反相高效液相色谱法同时测定甘草酸单铵盐原料药主成分及有关物质含量

建立了同时测定甘草酸单铵盐原料药中主成分18α-甘草酸、18β-甘草酸及其有关物质A、有关物质B含量的高效液相色谱法,并用于其质量标准的建立。采用Durashell C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以10mmol/L高氯酸铵(氨水调节pH 8.20)-甲醇(48∶52,v/v)为流动相,流速0.80mL/min,检测波长254nm,柱温50℃,进样量10μL。在优化的色谱条件下,18α-甘草酸、18β-甘草酸、有关物质A、有关物质B在0.50～100mg/L范围内线性关系良好(r>0.999 9),检出限分别为0.15、0.10、0.10、0.15mg/L,平均回收率在97.32%～99.33%之间(n=3),相对标准偏差(RSD)在0.05%～1.06%之间。本方法检测灵敏、重现性好,结果准确可靠,可用于甘草酸单铵盐原料药主成分及有关物质的检测分析,有利于其原料药的质量控制。

对中国国家药品标准甘草酸单铵盐中有关物质及含量检测方法的改进

针对中国国家药品标准（WS1-XG-2002）中,甘草酸单铵盐含量测定方法分析时间长、效率低、不能实现对甘草酸主成分异构体18α-甘草酸（18α-Gly）和18β-甘草酸（18β-Gly）的有效分离,以及未对有关物质进行准确定量分析和质量控制等问题,改进并建立甘草酸单铵盐原料药及不同剂型制剂中有关物质及含量的检测方法.对色谱条件进行优化,采用Durashell-C18柱（4.6mm×250mm,5μm）,以0.01mol/L高氯酸铵（氨水调节pH至8.20）-甲醇（48∶52,V/V）为流动相,流速0.80mL/min,检测波长254nm,柱温50℃,进样量10μL.18α-Gly,18β-Gly,甘草酸单铵盐杂质A和杂质B在0.5~100.0μg/mL内线性关系良好（r=0.999 9）,检出限分别为0.10,0.10,0.15,0.15μg/mL,平均回收率（n=3）为98.06%~101.61%.与中国国家药品标准（WS1-XG-2002）收载的甘草酸类制剂质量标准比较,本实验建立的方法能够实现对主成分异构体的有效分离,并能真实、准确地检测各有关物质的含量,方法精密度,重现性良好,灵敏度高,结果准确可靠,可用于甘草酸单铵盐原料药及其不同剂型制剂的检测分析及质量控制.

4代甘草酸制剂主成分异构体及有关物质含量差异分析与变化趋势

目的:对国内外上市的4代甘草酸制剂中主成分和有关物质含量差异与变化趋势进行分析。方法:对样品预处理条件进行考察,并建立高效液相色谱法,对10种上市甘草酸制剂主成分及其有关物质进行含量测定,分别计算各甘草酸制剂的标示量以及18α-Gly与18β-Gly的组成比例,对制剂中各成分含量差异和变化趋势进行比较分析。结果:10种上市甘草酸类制剂标示量均符合中国药典规定,各种甘草酸制剂之间主成分及有关物质的含量以及18α-Gly与18β-Gly组成比例均存在显著性差异;进口制剂各成分总含量高于国产制剂。结论:建立的分析方法简便、灵敏,重复性好,结果准确可靠,可用于各种剂型甘草酸制剂含量检测与分析以及质量控制;分析结果可为临床用药选择及开发新的甘草酸制剂提供参考。

不同国家药典对甘草酸单铵盐有关物质及含量测定结果与建立方法的比较

目的通过分析不同国家药典或药品标准以及本实验建立的对甘草酸单铵盐主成分及其有关物质的检测方法,对含量测定结果进行比较,以对检测方法进行评价。方法采用欧洲、英国最新版药典以及中国国家药品标准所收载的甘草酸单铵盐质量标准中的方法和本实验建立的方法,分别对其原料药和制剂中主成分及有关物质进行测定,对其色谱行为、主成分异构体分离度、实验成本、方法学、含量测定结果以及各方法的优缺点等进行比较和研究,并给出综合评价。结果现有各国药典或药品标准所用流动相均为酸性体系,对主成分异构体18α-Gly、18β-Gly没有分离选择性,不能真实反映原料药和制剂中18α-Gly、18β-Gly、有关物质A和有关物质B的含量;本实验建立的方法对主成分异构体的分离度为1.5,符合药典要求。欧洲药典EP 7.0版、英国药典2012版和中国国家药品标准(WS1-XG-2002)收载的甘草酸单铵盐质量标准中的含量测定方法与本实验建立的方法比较,对样品中主成分及有关物质的含量测定结果无显著性差异。结论综合准确性、实用性等方面因素,本实验建立的方法,能够实现对主成分异构体的有效分离;分析检测成本、毒性和污染均降低,分析检测时间缩短,检出限降低,结果准确、可靠;为甘草酸单铵盐类原料药和制剂内在质量控制、为将来各国对药典收载的甘草酸单铵盐质量标准的增补与修订提供依据。

甘草酸单铵盐原药中主成分及其有关物质的波谱特征与结构确证

通过高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)、核磁共振谱(NMR)等技术详细研究了甘草酸单铵盐原药中主成分及其有关物质的色谱和波谱学特征。本试验通过HPLC对原药主成分及其有关物质进行定位,对欧洲药典7.0版和英国药典2012年版收载的甘草酸单铵盐质量标准中主成分异构体的分离以及对色谱图中相对保留时间约为1.2的化合物的结构归属产生质疑。利用高分辨电喷雾电离质谱(HR-ESI-MS)确定相对分子量和分子式,并计算分子不饱和度;通过COSY、HSQC、NOESY和HMBC二维核磁共振技术,对各物质的1H NMR、13C NMR谱信号进行全归属,获得进一步的结构信息。结果表明,甘草酸单铵盐原药中主成分为18α,20β-甘草酸和18β,20β-甘草酸,有关物质A和相对保留时间约1.2的化合物归属为(18β,20β)-24-羟基-甘草酸和18β,20α-甘草酸。

甘草酸单铵盐原料药主成分异构体及其与有关物质同时分离检测和结构确证

建立简单、灵敏、快速的高效液相色谱法,对甘草酸单铵盐原料药中主成分异构体进行分离以及同时与有关物质的分离检测,并对各待测物结构进行鉴定。参考欧洲药典7.0版(EP7.0)、英国药典2012版(BP2012)、中国国家药品标准(WS1-XG-2002)及国内外相关文献,对流动相的组成进行选择,通过优化流动相中盐的浓度、水系溶液的pH值、有机相的加入比例、柱温及流速等参数,确定了最佳的色谱条件:采用Durashell C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.01 mol.mL 1高氯酸铵(氨水调至pH 8.2)甲醇(48∶52)为流动相,流速0.8 mL.min 1,检测波长254 nm,柱温50℃,进样量10μL。利用质谱、核磁共振谱、紫外光谱和液相色谱等实验技术对获得的18α-甘草酸、18β-甘草酸、有关物质A、有关物质B对照品结构进行确证,以保证其结构的准确无误;采用高效液相色谱法对法定机构提供的甘草酸单铵盐对照品进行定位,并采用二级管阵列检测器分析测定各待测物色谱峰的纯度。在优化的色谱条件下,18α-甘草酸、18β-甘草酸、有关物质A和B在0.50～100μg.mL 1内线性关系良好(r=0.999 9),检出限分别为0.15、0.10、0.10和0.15μg.mL 1。本方法检测灵敏、重现性好、结果准确可靠,可用于甘草酸单铵盐原料药主成分异构体及其与有关物质的同时分离检测。在EP7.0、BP2012收载的甘草酸单铵盐质量标准中,对主成分异构体的分离以及对色谱图中相对保留时间约为1.2的物质的结构归属有待商榷。本方法能够为甘草酸原料药、制剂以及中药材的质量标准的制定、质量控制及结构鉴定提供依据。