靶向测序综合分析诊断结核分枝杆菌合并多病原体感染肺炎1例

结核分枝杆菌是导致人类结核病最主要的病原体。常见的结核分枝杆菌检测方法主要有抗酸染色、罗氏培养法和γ干扰素释放试验,这些方法用于结核病的诊断耗时长且灵敏度较低,常常导致临床误诊、漏诊及治疗延误。近年来,结合多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)扩增与高通量测序两种技术方法的靶向测序(targeted next-generation sequencing,tNGS)技术以其超广谱性、高灵敏度和高检出率等优点在临床检验领域受到越来越多关注,逐渐成为一种鉴定结核分枝杆菌的重要补充手段。本文报道了深圳市龙华区人民医院1例93岁男性重症肺炎患者,分析该患者治疗过程中的临床及影像学表现、病原体检测及诊疗过程,使用tNGS技术综合分析诊断,确诊为结核分枝杆菌合并多病原体混合感染,借此阐述tNGS在结核病早期诊断、混合感染识别及疾病监测和疗效评估中的潜在应用价值,提升临床对结核分枝杆菌鉴别诊断水平,同时提高临床医务工作者对于tNGS技术在感染性疾病病原鉴定中应用的认识。

大鼠心肌细胞分离方法的改进

目的介绍一种易于判断酶解终点的分离大鼠心肌细胞的方法。方法成年SD大鼠麻醉后开胸取出心脏,分别采用传统的Langendorff灌流装置和本实验室改进的Langen-dorff灌流装置,于恒温37℃灌流消化液(含0.6%胶原酶B,0.6%BSA,30μmol.L-1Ca2+的台氏液)分离细胞,并采用IonOptix单细胞动缘检测系统检测细胞功能。结果传统的Langendorff灌流装置分离细胞,酶解时间约13～16min,但此法终点难以判断,每次分离的细胞质量差别较大,且不耐钙,收缩的稳定性较差。而以改进的Langendorff灌流装置分离细胞易于确定消化终点,细胞成活率大于80%,在含1.8mmol.L-1Ca2+的台氏液中存活率也高达50%。给予电压15V、频率1Hz、波宽4ms的持续电刺激时,其在1000s内收缩舒张功能稳定。结论经改造的Langendorff灌流装置分离的心肌细胞成活率高,可控性强,结果稳定,能够更好地用于检测细胞收缩舒张功能的实验。

深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立与应用

[目的]建立深圳市伤寒PulseNet数据库,用于伤寒的实时监测和分子流行病学调查。[方法]采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对深圳市2002～2005年106株伤寒的染色体DNA进行酶切,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。[结果]深圳市各年的伤寒菌株变异较多,呈现30多种PFGE图谱。同一起伤寒暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。[结论]深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。

改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。

附子、干姜配伍机制现代研究概述

历代医家认为附子、干姜配伍具有增效减毒作用,现代研究从二者配伍的药效学改变、化学成分变化等方面进行了大量探索。对二者配伍的现代研究进行总结与分析,为进一步探讨其配伍机制提供参考。

深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查

目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定,再以聚合酶链式反应(PCR)等方法加以验证。结果共采集水样28件,分离到1株军团菌,经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染,需引起重视,防止军团菌病发生。

脉冲凝胶电泳分型在伤寒暴发中的应用

目的:探讨深圳市某区伤寒暴发在不同厂区,不同来源的伤寒沙门菌之间的遗传相关性,建立分子流行病学研究,进行同源性分析,并与表型分型比较。方法:对深圳市某街道社区10个工厂的伤寒患者分离的28株伤寒沙门菌,根据不同厂区、不同来源的伤寒菌株,采用传统的生化分型、血清学分型,肥达反应,药物敏感分型,荧光PCR及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子生物学分型的技术进行研究。结果:从93例发热现症病人的血和粪便中分离出28株伤寒沙门菌,肥达反应阳性(“O”≥1∶80;“H”≥1∶160;)59例,分离出伤寒沙门菌患者中,肥达反应阳性19例。从伤寒沙门菌菌株中抽取4个工厂患者中分离的11株伤寒沙门菌和1株乙型副伤寒沙门菌,进行了荧光PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,12株伤寒沙门菌的指纹图谱完全相同,有高度的同源性。对12株伤寒沙门菌荧光PCR检测均呈阳性,28株伤寒沙门菌生化表型相同,血清学分型相同,药敏结果有差异,肥达实验抗体滴度与健康人群比较,差异有统计学意义。结论:生化表型和血清学分型不能进行同源性分析,而通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,可追溯其同源性,通过12株伤寒菌株的PFGE分型图谱分析,菌株之间有高度的同源性,确认是由相同病原菌引起的一宗伤寒疫情。

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

深圳市细菌性食物中毒病原菌的调查与预防

目的了解深圳市近年引起细菌性食物中毒常见病原菌的种类、特点和趋势，为检测和预防控制细菌性食物中毒提供科学依据。方法根据《中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法》微生物学部分对深圳市2003-2005年细菌性食物中毒检测致病菌资料进行统计分析。结果在3a中报告的63起细菌性食物中毒中依次是以副溶血弧菌（39．7％）、变形杆菌（15．9）、沙门菌（12．7）、金黄色葡萄球菌（11．1％）、蜡样芽胞杆菌（3．2％）为主要致病菌。结论深圳市为沿海城市，细菌性食物中毒病原菌以副溶血弧菌、变形杆菌为主，今后在对食品污染监测时，可重点监测上述致病菌，开发快速检测方法，这样可为预防、处理和治疗食物中毒赢得时间，确保食物中毒病人及时得到治疗，保障病人的安全和身体健康。

深圳市食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染状况调查

目的了解深圳市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的污染状况,并评价不同方法的检测效果。方法分别用传统分离培养方法和荧光PCR方法进行分离培养及检出鉴定。结果从178份样品中检出3份(株)单核细胞增生性李斯特氏菌,检出率为1.68%。结论深圳市食品中存在单核细胞增生性李斯特氏菌污染的危险,需加强食品中单核细胞增生性李斯特氏菌监测。用传统方法结合荧光PCR方法能提高单核细胞增生性李斯特氏菌的检出率和准确性。

副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型分析

目的分析副溶血弧菌菌株之间的相关性,建立深圳市副溶血弧菌的DNA指纹图谱数据库。方法56株副溶血弧菌基因组DNA经NotI酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果56株副溶血弧菌被分为34种脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)图谱,聚类分析显示,在90%的相似性水平上,28株细菌谱型属于同一个群,其中27株均为食物中毒患者分离株,并各年度均有分离。结论深圳地区存在遗传谱系紧密相关的副溶血弧菌流行克隆。建立DNA指纹图谱数据库为建立分子分型监测网络打下了良好的基础,有助于副溶血弧菌所致食源性疾病的及时主动监测和传染来源追踪。

2001～2003年深圳市学校食堂餐具消毒监测结果分析

目的全面了解深圳市学校食堂餐具的卫生质量情况,为今后学校师生食堂餐饮卫生监督提供科学依据.方法大肠菌群按GB 14934-94纸片法,致病菌按GB 4789.4.5-2003进行.结果深圳市学校2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为87.3%、92.5%、96.8%,致病菌均未检出.结论深圳市大中小学校使用的餐具卫生状况整体情况比较好,多数学校餐具卫生3 a保持良好状态,只有个别学校稍差.建议卫生监督机构除继续保持监测外,应着重加大对卫生状况和消毒效果稍差的学校的监督,指导学校做好消毒工作,以保护学校师生的饮食安全,避免引起食物中毒.

荧光PCR和PFGE在副溶血弧菌食物中毒诊断中的应用研究

[目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳(PFGE)在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧光PCR检测结果呈阳性,同起食物中毒菌株PFGE图谱一致。[结论]荧光PCR可以快速准确的鉴定病原体。PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于食物中毒病原菌学鉴定和传染源溯源。荧光PCR和PFGE在食物中毒的快速诊断中可发挥重要作用。

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌

目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。

益气复脉合剂抗乌头碱致大鼠心肌细胞动作电位异常的研究

目的:利用膜片钳技术阐述益气复脉合剂抗心律失常的作用机制。方法:采用酶解法分离大鼠心肌细胞,利用膜片钳方法考察益气复脉合剂抗乌头碱致大鼠心肌细胞动作电位异常的作用。结果:益气复脉合剂可显著缩短乌头碱所致动作电位时程APD、APD_(50)、APD_(90)的延长,对静息电位、超射、幅度及最大上升速率并无明显改变。结论:益气复脉合剂抗乌头碱致室性心律失常的作用机制可能与抑制心室肌细胞的Ca^(2+)内流以及K^+外流有关。

深圳市2起人感染猪链球菌病疫情的流行病学调查

目的查明我市2起人感染猪链球菌病的感染途径和流行特征,为制定预防控制措施提供依据。方法开展流行病学调查,采集脑脊液标本,用血平板进行细菌培养、分离,用PCR鉴定。结果患者手部有外伤且有生猪肉接触史,临床上潜伏期短,病程进展迅速,均为脑膜炎型。患者脑脊液中分离的细菌经生化和PCR检测结果为猪链球菌Ⅱ型。病人经过及时抢救均脱离了危险。结论2起疫情为散发疫情,相互间无流行病学联系。传播途径为接触被猪链球菌污染的生猪肉经破损皮肤而传染。应加强卫生知识宣传和教育,提高肉食品加工人员的自我保护能力,同时要提高医务人员的诊治水平。

抽检与送检桶装纯净水微生物污染的调查研究

目的研究分析抽检与送检桶装纯净水微生物污染的结果差别和卫生质量。方法对深圳市桶装纯净水的各种产品随机抽检280份;商场、超市和企业等主动送检桶装纯净水各种产品121份,采用国标标准进行微生物指标的各种检测,按国家微生物卫生标准评价。对二组结果进行比对分析研究。结果抽检的280份桶装纯净水合格率为74.3%;送检的桶装纯净水合格率为90.1%,经统计学处理两者有统计学意义(χ2=12.73,P﹤0.001)。结论抽检桶装纯净水合格率明显低于送检桶装纯净水的合格率,且两者的差别有统计学意义,说明桶装纯净水存在潜在的安全隐患,并威胁着市民的饮水安全。

金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系的建立及应用

目的建立SYBR-Green荧光PCR体系金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系,应用于金黄色葡萄球菌食物中毒和食品风险监测快速诊断。方法根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E基因的保守序列设计特异性引物,分别建立SYBR-Green荧光PCR体系。应用该系列体系检测185株金黄色葡萄球菌野生株的肠毒素基因A～E型。结果建立的SYBR-Green荧光PCR系列体系其DNA灵敏度为1.34～2.80ng/μL,菌液灵敏度为46～96CFU/mL;用以检测185株金黄色葡萄球菌的肠毒素基因A～E型,携带一种基因型的为58.38%,同时携带两种以上毒素基因占4.86%。结论建立的荧光PCR反应体系快速、灵敏度高、特异性强,能应用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的准确分型,对食物中毒诊断和食品风险监测很有意义。

深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况监测

目的了解深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况,以便对空调系统采取消毒和卫生管理措施,保障空调环境卫生。方法采用对酒店各部不同类型空调进行抽样调查,检测空调系统过滤网、冷却水、空气中的细菌总数、霉菌总数以及军团菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等项目。结果中央空调冷却水军团菌污染严重,阳性率为65.66%。不同类型空调系统集尘过滤网的细菌总数、霉菌总数超标率达33.8%,金黄色葡萄球菌,溶血性链球菌未检出阳性,而芽胞杆菌检出率较高为70.87%;在空气积尘中细菌、霉菌总数超标率较低,金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、芽胞杆菌检出率较低。结论部分酒店空调系统污染较为严重,必须引起注意,加强卫生消毒措施及管理。