rAAV-AsiNOS抑制C6胶质瘤细胞生长的实验研究

目的探讨携带诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)反义RNA重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体(rAAV-AsiNOS)对胶质瘤细胞生长增殖的影响以及对iNOS和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等表达的影响。方法根据C6细胞培养基成分不同分为3组,即空白组[含10%胎牛血清的改良Eagle培养基(DMEM)培养液,n=4]、β-半乳糖苷酶基因(β-galactosidase gene z,lacz)重组腺相关病毒载体(rAAV-LacZ)组(含有rAAV-LacZ的10%胎牛血清的DMEM培养液,n=4)和rAAV-AsiNOS组(含有rAAV-AsiNOS的10%胎牛血清的DMEM培养液,n=4),C6细胞生长曲线;3组同时进行培养1、3、6、12、24 h,应用流式细胞仪(FCM)检测C6细胞中NT阳性细胞百分比、iNOS和VEGF阳性细胞百分比,应用半定量反转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)分析iNOS和VEGF mRNA表达。结果一定感染复数的重组病毒载体rAAV-LacZ对C6胶质瘤细胞生长趋势无明显影响,而rAAV-AsiNOS重组病毒载体在转染C6细胞从3d开始出现细胞生长缓慢,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,NT、iNOS和VEGF阳性细胞在空白组和rAAV-LacZ组之间差异无统计学意义(P>0.05),而rAAV-iNOS组从培养6h开始出现NT、iNOS和VEGF阳性细胞百分比下降,NT百分比分别为9.37%±1.2%,97.3%±0.75%和4.62%±0.53%;iNOS百分比分别为18.42%±2.17%,14.29%±1.44%和8.31%±1.30%;VEGF百分比分别为7.85%±0.98%,6.32%±0.78%和5.04%±0.41%,较空白组之间差异均有统计学意义(P<0.05);半定量RT-PCR分析结果显示,同一时间中,iNOS mRNA在空白组和rAAV-LacZ组之间差异无统计学意义(P>0.05),而rAAV-iNOS组从培养6h开始出现iNOS mRNA表达下降,分别为0.46±0.04,0.34±0.03和0.21±0.03,较同一时间空白组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论携带iNOS反义RNA腺相关病毒载体rAAV-iNOS能够抑制C6胶质瘤细胞生长增殖,能够抑制iNOS表达,从而通过抑制VEGF基因表达发挥抗胶质瘤细胞生长增殖的重要作用。

胶质瘤促血管生存素2基因表达与血管生成的关系

背景与目的:血管生成与肿瘤的生物学行为密切相关,本研究探讨胶质瘤促血管生存素2(angiopoietin2,Ang2)表达与血管生成的关系。方法:采用RT-PCR检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达;CD34单克隆抗体组织化学染色显示微血管,用微血管计数(micro-vessel-counting,MVC)测定肿瘤血管生成。结果:50例脑胶质瘤和8例正常脑组织均可表达Ang2mRNA片段。Ang2mRNA表达与脑胶质瘤的血管生成呈显著正相关(r=0.821,P<0.01);高度恶性胶质瘤Ang2mRNA表达、MVC分别显著高于低度恶性胶质瘤(P<0.01);低度恶性胶质瘤Ang2mRNA表达、MVC均显著高于正常脑组织(P<0.05)。结论:Ang2可能通过参与胶质瘤血管生成,对胶质瘤的恶性演进起促进作用。

生物型人工硬脑膜修补硬脑膜缺损

背景:修复硬脑膜的完整性对于脑膜瘤患者的手术预后非常重要。目的:探讨生物型人工硬脑膜在大型凸面硬脑膜瘤修复中的应用价值。方法:回顾性分析56例因肿瘤侵蚀导致硬膜缺损的大型凸面脑膜瘤病例,术中采用人工硬脑膜修复硬膜缺损的临床疗效、并发症及随访结果。结果与结论:除2例并发局部积液,1例出现术侧少量硬膜下积液,1例出现迟发性硬膜外血肿外,其余病例均无脑脊液漏、颅内感染、癫痫、组织排异等不良反应发生。术后复查头颅CT及MR,证实植入人工硬膜的部位未见异常影像学改变。5例患者修复后3个月行颅骨修补,发现人工硬脑膜与正常硬脑膜融合良好,无粘连及炎症反应发生。说明生物型人工硬脑膜能够较好地重塑颅腔原有解剖层次,保护脑皮质,显著降低各种并发症的发生。

神经电生理和微血管多普勒联合监测在颅内动脉瘤术中的应用研究

目的研究神经电生理和微血管多普勒超声(MDU)联合监测在颅内动脉瘤夹闭术中的应用价值和意义。方法颅内动脉瘤患者40例,共45个动脉瘤,在术中常规行头皮脑电图(EEG)、体感诱发电位(SSEP)、运动诱发电位(MEP)监测和夹闭动脉瘤前后行MDU以监测载瘤动脉和邻近血管血流动力学变化,将术后患者神经功能恢复情况与术中监测的变化作前瞻性研究。结果术后恢复良好35例,暂时性偏瘫3例,永久性偏瘫2例。术中SSEP变化4例,MEP变化7例,EEG变化2例,MDU发现血流异常9例,其中MDU与诱发电位(EP)均出现变化6例,在术中神经电生理监测未发现明显变化而MDU发现血流异常3例,另2例MDU正常而MEP出现变化。术中联合监测无变化或虽有变化但干预后恢复者术后神经功能良好。结论在颅内动脉瘤术中神经电生理和MDU联合监测的变化与神经功能状况具有良好的关联性。神经电生理在监测皮质、皮质下缺血和脑功能损害方面优于MDU,MDU在检测血管血流动力学方面优于神经电生理。神经电生理和MDU能相互弥补不足,二者联合监测可最大限度地减少动脉瘤手术并发症,提高手术质量。

大脑半球高级别胶质瘤全切术后无进展生存期的相关因素分析

目的探讨初诊MRI影像特征及术后放疗、化疗对大脑半球高级别胶质瘤全切术后无进展生存期(progression-free survival,PFS)的影响。方法回顾性分析4个临床中心的54例影像学确定全切除又经病理证实复发或临床随访判断为进展的高级别胶质瘤的初诊MRI影像特征(包括肿瘤最大径、瘤周水肿特征、肿瘤增强程度、坏死程度、囊性变与否及是否存在卫星灶)及术后辅助放化疗情况。单因素采用Kaplan-Meier法、多因素使用Cox比例风险模型等统计方法研究这些因素与PFS的相关性。结果单因素分析显示:年龄(P=0.009)、瘤周水肿程度(P=0.001)、肿瘤坏死程度(P<0.0001)、肿瘤强化程度(P<0.0001)、术后放疗(P=0.008)、化疗(P=0.035)与肿瘤PFS相关。多因素分析结果显示:水肿程度(P=0.019)、肿瘤坏死程度(P<0.0001)为影响肿瘤PFS的独立因素且水肿和坏死程度越轻其PFS越长、术后放疗(P=0.035)、化疗(P=0.049)也为影响肿瘤PFS的独立因素且规放化疗PFS较长。结论术前MRI影像瘤周水肿程度及肿瘤坏死程度可用于评估胶质瘤全切术后PFS,大脑半球高级别脑胶质瘤即使在影像学上全切,术后也应提倡积极、规范的放疗和化疗。

神经电生理监测技术在椎间盘突出症显微手术中的应用

目的探讨神经电生理监测技术在椎间盘突出症显微手术中的应用价值。方法回顾性分析显微手术治疗的33例椎间盘突出症的临床资料,术中均行体感诱发电位(SSEP)、经颅刺激运动诱发电位(Tc MEP)和自发肌电图(EMG)连续监测;26例腰椎间盘突出症行半椎板入路手术,7例颈椎间盘突出症行颈前入路手术。结果术中监测发现SSEP改变3例,Tc MEP改变7例,EMG改变21例,处理后均恢复正常。术后无脊髓及神经根功能损害,随访2.4年至5年,改良Mac Nab标准评定优良率为93.9%。结论对椎间盘突症出手术,术中应用神经电生理监测技术有效保护脊髓及神经根,减少并发症,改善预后。

野生型PTEN基因对胶质细胞瘤侵袭力的影响

目的 观察转入野生型 PTEN基因的胶质瘤细胞体外侵袭力改变 ,探索 PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式。方法 构建野生型 PTEN基因的 pc DNA3 .1Hygro(-)真核质粒载体 ,并用于转染 PTEN基因失活的U 2 51细胞系 ,采用重组基底膜侵袭模型 ,观察转染前后细胞侵袭力的改变。结果 转染 PTEN基因可以明显抑制U2 51细胞的侵袭力。结论

胶质瘤中促血管生成素2和血管内皮生长因子基因表达的意义

目的探讨胶质瘤促血管生成素(Ang2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因表达的意义。方法采用逆转录-酶促链反应(RT-PCR)检测52例人脑胶质瘤中Ang2、VEGF基因的表达,同时采用SABC免疫组化方法检测Ang2蛋白的表达。结果50例脑胶质瘤表达Ang2mRNA片段,52例脑胶质瘤表达VEGFmRNA片段。Ang2mRNA与VEGFmRNA表达呈显著性正相关(r=0.816,P<0.01);高度恶性胶质瘤Ang2mRNA、VEGFmRNA表达均显著性高于低度恶性者(P<0.01)。免疫组化染色显示Ang2蛋白主要分布在高度恶性胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞,而在低度恶性胶质瘤中呈低水平表达。结论Ang2与VEGF可能在胶质瘤血管生成中起协同性促进作用。

脑胶质瘤增敏放疗的分子生物学研究进展

恶性胶质瘤是成人最常见的原发性中枢神经系统肿瘤。平均存活时间少于1年的这种状况在过去的30年里并没有得到显著改善。胶质瘤明显的辐射抗性是其预后差的重要原因之一。对胶质瘤恶性表型及辐射抗性分子机制的深入了解有利于产生新的针对性治疗策略。近年对于胶质瘤的分子生物学研究发现了一些其生长和生存途径中共同的畸变位点,并针对这些畸变位点,产生了新的放疗方法,目的是为了提高功效,减少毒性。

神经电生理监测在桥小脑角肿瘤手术中的应用研究

目的:探讨桥小脑角(CPA)手术中行神经电生理监测的意义。方法:本组CPA肿瘤病人25例,均于术中进行神经电生理监测,主要包括面神经、三又神经和对侧脑干听觉诱发电位(BAEP)监测,观察术后面神经功能及并发症。结果:面神经功能保留15例。术中对侧BAEP变化最明显的是lII、V峰波幅和峰间潜伏期。结论:在CPA肿瘤手术中,采用诱发电位和肌电图等实时神经电生理监测有助于面神经、三叉神经和脑干等重要结构的保护。

生物粘合剂在颅脑手术中的应用

211例颅脑手术中应用生物粘合剂。其中重建颅底和修补硬脑膜143例,未出现脑脊液漏;治愈6例手术切口脑脊液漏;修复静脉窦壁的破口13例;修补断裂血管14例;消除手术创面渗出血28例;辅助吻合血管6例;孤立加固动脉瘤1例。本文证明生物粘合剂对提高颅脑手术的技术水平和质量具有积极作用。

胶质瘤促血管生成素2基因表达的临床意义(附52例分析)

目的 探讨胶质瘤促血管生成素2 (Ang2) 基因在脑胶质瘤的表达及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR) 和链酶亲和素过氧化物酶复合物SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达。结果 50 例脑胶质瘤和8 例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段。高恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于低恶度胶质瘤(P<0 01); 低恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于正常脑组织(P<0 05)。免疫组化染色显示, Ang2蛋白主要分布在高恶度胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞, 低恶度胶质瘤呈低水平表达, 正常脑组织不表达。结论 Ang2的表达与胶质瘤的分级密切相关, 可能对胶质瘤的恶性演进起促进作用。

PPARγ激动剂吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长、凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增长因子活化受体γ激动剂(PPARγ)吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的机制。方法应用细胞增殖力测定、AO/EB荧光染色、流式细胞仪检测吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的情况。结果吡格列酮对胶质瘤细胞株U-251的生长有抑制作用,并呈时间与剂量依赖关系(P<0.05);可诱导胶质瘤细胞的凋亡,呈时间依赖关系(P<0.05),并出现细胞凋亡征象。结论 PPARγ激动剂吡格列酮对胶质瘤细胞U-251具有生长抑制作用。其可诱导胶质瘤细胞凋亡可能是细胞生长抑制的机制之一。

促血管生成素-1和-2的研究进展

促血管生成素(Angiopoitins)促进血管发生、重塑、成熟和维持,与肿瘤、炎症的血管发生,与肿瘤细胞的增殖和转移有密切关系,其家族成员包括 Angiopoitinl、2、3、4。Ang 1通过活化 Tie2受体促进血管发生,具有抗凋亡、抗缺血、抗炎等效应。Ang 2和内皮细胞生长因子协调促进血管发生,高压氧和缺氧能调节 Ang 2表达。Ang 2促进胶质瘤细胞增殖,这种作用是通过活化 MMP-2所引起。抑制 Angs/Tie 2信号转导级联反应是治疗肿瘤有前景的方法。

诱导型一氧化氮合酶及缺氧诱导因子-1α在人脑胶质瘤的表达意义与肿瘤血管生成关系的研究

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人脑胶质瘤标本表达特点及相关性,探讨HIF-1α和iNOS与肿瘤血管形成的相关性。方法收集86例人脑胶质瘤(低度恶性组42例,高度恶性组44例)和新鲜脑组织10例(对照组),应用免疫组化SP法测定HIF-1αi、NOS和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平并分析其相关性。结果免疫组化结果显示,iNOS在对照组细胞中不表达,低度恶性组胞浆中呈阳性表达,而高度恶性组呈强阳性表达,2组之间表达强度差异具有统计学意义(P<0.05);HIF-1α和VEGF在正常脑组织组和胶质瘤细胞中均有表达,其中正常脑组织均弱阳性表达,低度恶性组均呈阳性表达,而高度恶性组均呈强阳性表达,HIF-1α和VEGF在3组之间表达强度差异均具有统计学意义(P<0.05)。根据免疫组化结果进行各种抗原表达相关性分析,HIF-1αi、NOS和VEGF在低度恶性组和高度恶性组中表达均具有相关性。结论 HIF-1αi、NOS和VEGF共同参与胶质瘤细胞发生发展过程,三种基因表达强度均与胶质瘤细胞恶性度相关,恶性度越高,表达量越多;HIF-1αi、NOS和VEGF三者可能存在相互协调关系,共同促进胶质瘤生长增殖和转移过程。

PTEN/MMAC1基因改变与胶质细胞瘤生物学特征相关性研究

目的探讨胶质瘤PTEN/MMAC1基因突变及缺失与肿瘤分型、病理分级和肿瘤生长部位、患者年龄、性别的关系.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析(PCR-SSCP)结合银染技术、双重PCR技术检测80例胶质瘤PTEN/MMAC1基因九个外显子点突变与基因缺失情况.结果 80例胶质瘤分别有15例(18.75%)和27例(33.75%)PTEN/MMAC1基因点突变和基因缺失,且PTEN/MMAC1基因失活与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.05),其中低分化胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)突变率(31.30%)和缺失率(60%)明显高于高分化(Ⅰ～Ⅱ级)胶质瘤(P<0.05).其中,少突胶质细胞瘤仅有1例PTEN/MMAC1基因缺失(7.70%).星形细胞瘤PTEN/MMAC1基因第5外显子、第6外显子和第8外显子是胶质瘤PTEN/MMAC1基因易突变区.PTEN/MMAC1基因失活与患者性别、年龄及肿瘤生长部位无相关性.结论人胶质瘤PTEN/MMAC1基因与病理分级关系密切,不同起源的胶质瘤PTEN/MMAC1基因改变差异明显.

荟萃分析生长抑素类似物对生长激素腺瘤的射线保护作用

目的通过Meta分析系统评价生长抑素类似物(SSTA)对生长激素(GH)腺瘤的射线保护作用。方法检索PubMed、Cochrane Library、Google Scholar和Wiley Online数据库中有关GH腺瘤在伽玛刀围治疗期使用SSTA的研究,检索时间均为建库时间至2016年7月止。由2名评价者独立对纳入研究的文献进行质量评价、数据提取,运用Rev Man5.3软件进行Meta分析。结果 Meta分析结果显示:GH腺瘤病人在伽玛刀围治疗期使用SSTA治疗后的内分泌缓解率为未使用者的57%(RR=0.57,95%CI:0.34-0.95),差异具有统计学意义(P=0.03)。结论目前有限的证据支持SSTA对GH腺瘤具有射线保护作用。

脂松香生产开工时澄清锅预热方式的改进

针对脂松香生产开工时间长，热水浪费大的现象，提出了简单易行的改进方法，克服了以上不足，提高了工作效率。

黄芩苷对脊髓缺血神经保护作用的研究

目的探讨黄芩苷对脊髓缺血神经保护作用机制的研究。方法建立新西兰大白兔脊髓缺血模型,分为模型组、高剂量组、低剂量组及假手术组。采用H-E染色、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、免疫组织化学、逆转录反应系统(RT-PCR)等技术检测N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)、诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达水平,观察不同剂量黄芩苷对脊髓缺血的神经保护作用。结果模型组脊髓正常结构完全消失,低剂量组结构较完整,假手术组脊髓结构正常。高剂量组缺血损害情况介于低剂量组于假手术组之间。凋亡指数、表达NMDAR、iNOS、Caspase-3的阳性细胞百分比及相应mRNA表达水平:模型组最高,低剂量组、高剂量组、假手术组则依次降低,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩苷能抑制神经细胞凋亡,对脊髓缺血具有神经保护作用。