蛋白激酶C抑制剂staurosporine对HeLa细胞周期的影响

蛋白激酶Ｃ抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对ＨｅＬａ细胞周期的影响石法武＊任洪波张兆山＊＊王会信周廷冲（军事医学科学院基础医学研究所，＊＊生物工程研究所，北京１００８５０ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅｏｎｔｈｅｃｅｌｃｙｃｌｅｏｆＨｅ...

程序性细胞死亡

程序性细胞死亡石法武，李德玲，周廷冲（军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）细胞生物学有三大问题：细胞分裂（增殖），细胞分化和细胞死亡。细胞死亡可分为两类，一类是病理性死亡，它主要是由有害信号的极度刺激造成细胞损伤引起的，另一类是生理性的细胞...

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对HeLa细胞周期的影响

用蛋白激酶C的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)处理HeLa细胞,明显抑制HeLa细胞的增殖。这种抑制作用不是由于引起细胞死亡,而是因为细胞被阻断在G2期。这种阻断作用伴随着HeLa细胞多倍体的形成,提示Staurosporine抑制了HeLa细胞蛋白激酶C活性后引起的细胞阻滞,对细胞核的周期运转没有影响。进一步的探讨发现这种抑制作用可能是通过干扰细胞骨架的正确分布形成的,表明蛋白激酶C对于HeLa细胞由G2到M期正确过渡起重要作用。

对睡眠机理的探讨

本文通过对睡眠机制研究的简单回顾,对当代的研究成果进行了评价,提出了在这一机制研究上存在的问题,并对今后的研究工作阐述了自己的看法。

Fas和β-雌二醇受体融合基因在L929细胞中的表达及活性鉴定

利用ＰＣＲ方法将人Ｆａｓ基因的信号肽、跨膜区、胞内区与人β－雌二醇受体的激素结合结构域基因融合，并插入高效真核表达载体ｐｃＤＮＡ３。用脂质体法转染Ｌ９２９细胞，加入Ｇ４１８４周后，筛选出的转化细胞经Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ检测证明，该融合基因在Ｌ９２９细胞中得到较高表达。ＭＴＴ法检测进一步表明，在培养基中加入β－雌二醇可有效地诱导转化细胞发生凋亡，ＩＣ５０为１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。

HeLa细胞中细胞周期蛋白B不降解也能完成有丝分裂中后期转变

目的：在用细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｂ１作为ＨｅＬａ细胞周期Ｇ１期时相的阴性标志物时，发现呈阳性结果，为此，对细胞周期蛋白Ｂ在细胞的Ｍ期向Ｇ１期过渡中的作用做进一步探讨。方法：分别用诺考达唑（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）和离心淘洗的方法同步化ＨｅＬａ细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测细胞周期蛋白Ｂ的存在。结果：用诺考达唑阻断细胞于Ｍ期，然后释放４ｈ所得的Ｇ１期细胞中有细胞周期蛋白Ｂ，而离心淘洗的方法所得Ｇ１期细胞中没有细胞周期蛋白Ｂ。结论：（１）诺考达唑阻断细胞于Ｍ期后，可影响细胞周期蛋白Ｂ１在Ｍ期后期的降解；（２）细胞周期蛋白Ｂ１的降解对于ＨｅＬａ细胞由Ｍ期向Ｇ１期过渡并不是必需的，可能还有别的蛋白质参与；（３）采用药物阻断的方法同步化细胞，对细胞的生理、生化活动有潜在的影响。

P15^(INK4b/MTS2)对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞，研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点，构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１，进一步用 Ｇ－４１８筛选，获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ，Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析，表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞，证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型，与对照组相比，Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制，流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明，癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。