神经鞘磷脂合成酶基因沉默对细胞凋亡的影响

以HEK293细胞为模型,利用RNA干扰技术,将神经鞘磷脂合成酶(SMS)的同工酶(SMS1和SMS2)的siRNA分别联合、转染HEK293细胞.通过薄层层析法评价SMS酶活性,同时测神经酰胺(Cer)、卵磷脂(PC)及神经鞘磷脂(SM)的水平,并以流式细胞仪和AnnexinV-FITC、PI双染法检测细胞凋亡.结果显示,与对照组相比,SMS基因沉默后SMS表达水平降低(分别降低17%,20%,49%);SM水平显著性降低(P<0.05);Cer水平显著性升高(P<0.05);TNF-α诱导的凋亡显著性升高[分别为58%(P<0.01),24%(P<0.05),77%(P<0.01)].这些结果提示,SMS基因沉默能降低SM水平并升高Cer水平,明显增加TNF-α诱导的HEK293细胞凋亡.由于SM是动脉粥样硬化形成的独立危险因子,因此本研究有可能为动脉粥样硬化的治疗找到新的靶点和有效途径.

宁心宝用于糖尿病早期肾损伤疗效观察

目的 研究宁心宝对糖尿病患者尿液微量蛋白的影响 ,探讨其对肾脏的保护作用。方法 将 10 9例2型糖尿病患者分为观察组 5 6例和对照组 5 3例 ,两组均给予常规治疗 ,观察组在此基础上口服宁心宝胶囊 ,3粒/次 ,3次 /d,连服 2个月 ,测量两组治疗前后尿液白蛋白 (A 1b)、转铁蛋白 (TRF)、N-乙酰 -β- D氨基葡萄糖苷酶(NAG)的含量。结果 观察组治疗后尿液 A1b、TRF、NAG均明显降低 ,与对照组比较 ,P分别 <0 .0 5 ,<0 .0 1,<0 .0 5。结论 宁心宝胶囊对糖尿病致肾脏损伤有保护作用。

SMS高表达对细胞内和培养基中SM水平的影响

为了研究神经鞘磷脂合成酶(SMS)活性与神经鞘磷脂(SM)代谢之间的关系,用SMS的同功酶(SMS1和SMS2)的表达载体(pCMV.sport 6-SMS1和pcDNA3.1-SMS2),瞬时转染HEK293细胞,通过薄层层析法测定神经鞘磷脂合成酶活性来检测SMS的表达水平,同时测定细胞和培养基中的SM浓度.结果显示,用pCMV.sport 6-SMS1转染细胞后与对照组相比,SMS表达水平提高65%,细胞内和培养基中的SM水平显著性升高(58%和46%,p<0.01);转染pCDNA3.1-SMS2后与对照组相比,SMS表达水平提高13%,细胞内和培养基中的SM水平显著性升高(33%和29%,p<0.05).实验结果表明,SM水平可被SMS1和SMS2调节.由于SM是冠心病和动脉粥样硬化的独立危险因子,因此本文研究结果有可能为冠心病和动脉粥样硬化的治疗提供新的靶点.

糖尿病患者Alb、TRf、NAG与血糖控制的关系

目的:了解糖尿病患者尿白蛋白(A lb)、转铁蛋白(TR f)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性与血糖控制的关系。方法:选糖尿病患者49例,分成三组:血糖控制良好(17例),血糖控制较差(13例),不良(19例),分别测尿A lb、TR f、NAG活性。结果:血糖控制三种情况下尿A lb、TR f和NAG活性比较有极显著差异(P<0.01)。结论:尿A lb、TR f和NAG活性随血糖升高而增加。提示,控制血糖对于延缓糖尿病肾病的发生是十分重要的。

血脂异常患者血清神经鞘磷脂的测定及其意义

目的:评价血脂异常患者血清神经鞘磷脂(SM)水平。方法:将血脂异常的患者分为总胆固醇(TC)升高组、三酯酰甘油(TG)升高组、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高组和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低组,与对照组SM水平比较。酶法测定SM、TC、TG、LDL-C、HDL-C。用单因素方差分析,Dunnett检验处理数据。结果:血脂异常患者SM水平与对照组比较有显著性差异(P<0.05);TC、LDL-C升高组SM水平与对照组比较有显著性差异(P<0.05),TG升高组、HDL-C降低组SM水平与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:血清SM水平和已知的致动脉粥样硬化危险因子密切相关,提示SM可能是导致动脉粥样硬化发生的重要因素。

心血管疾病防治药物的分析与展望

我国冠心病、动脉粥样硬化、高血压等心血管病的患病率、死亡率近三十多年来持续上升,现在已成为我国最大的流行病之一.心血管病是由多种因素引起、发病机理复杂的疾病,一般认为与脂类代谢关系密切,但确切机理尚未阐明.对于这类严重威肋着人类生命的心血管病,目前尚无特效药物.

年龄 性别 体重指数 饮食结构与血脂的关系

目的了解年龄、性别、体重指数、饮食结构与血脂的关系。方法用随机抽样方法,抽取开封市20岁以上居民2734人,进行问卷调查并检测血脂水平。结果血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLc)随年龄而增高,但男女之间增高幅度并不平行;高密度脂蛋白胆固醇(HDLc)随年龄变化不明显。血清TC、TG、LDLc随体重指数(BMI)增长而升高,HDLc随BMI增长而下降;血脂水平的变化与饮食结构的改变有关。结论摄取平衡饮食,建立良好的生活和饮食习惯,坚持体育锻炼,以降低高脂血症的发生率,预防心脑血管疾病的发生。

帽蕊木中的喹诺酸三萜皂苷

目的：研究帽蕊木Mitragyna rotundifolia茎皮的正丁醇部位化学成分。方法：采用各种色谱法分离，运用多种波谱技术鉴定结构。结果：分离鉴定出6个化合物quinovic acid-3-O-β-D-6-Deoxy-glucopyranoside，28-O-β-D-glueopyranosyl ester（1），quinovic acid-27-O-α-L-Rhamnopyranosyl ester（2），quinovic acid-3-O-α-L-Rhamnopyranoside（3），qunovic acid-27-O-β-D-glueopyranosyl ester（4），quovic acid-3-O-β-D-6-Deoxy-glueopyranoside（5），qunovic acid-27-D-β-6-deoxy-D-glueopyranosyl ester（6）。结论：化合物1—6均为首次从该植物中得到，化合物1—4和6为首次从该属中得到。

灵草液对AD模型大鼠脑组织NO、MAO及蛋白质含量的影响

目的 :观察灵草液对阿尔茨海默病 (AD)大鼠脑中NO、NOS和MAO的影响。方法 :健康雄性SD大鼠 ,随机分成 7组。Ⅰ组为正常对照组 ,Ⅱ组为AD模型组 ,Ⅲ组为AD模型 +生理盐水组 ,Ⅳ组为AD模型 +脑复康治疗组 ,Ⅴ组为AD模型 +低浓度灵草液治疗组 ,Ⅵ组为AD模型 +中浓度灵草液治疗组 ,Ⅶ组为AD模型 +高浓度灵草液治疗组。采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术 ,用IBO损毁大鼠双侧nbM。手术后灵草液连续灌胃共 2 0天 ,每天 1次 ,每次2ml。灌胃期满后即将大鼠断头处死 ,并立即在冰盘中开颅取脑做组织匀浆 ,取其上清液测各项生化指标。结果 :①与正常组比较 ,模型组脑组织中的一氧化氮 (NO)、单胺氧化酶 (MAO)均明显升高 (P <0 0 1) ,蛋白质含量显著降低 (P <0 0 1)。②与模型组比较 ,生理盐水组脑组织中的NO、MAO及蛋白质含量均无明显改变 (P >0 0 5 )。③与模型组比较 ,脑复康组及灵草液各浓度组脑组织中NO显著降低 (P <0 0 1) ,蛋白质含量显著升高 (P <0 0 1) ,MAO无明显改变 (P >0 0 5 )。

前列腺癌与增生组织中MnSOD基因片段的克隆分析

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中MnSOD基因的突变情况。方法:用RT-PCR的方法分别检测30例Pca组织中和20例BPH组织中SOD2基因片段的突变情况。结果:在6例前列腺癌组织标本和4例良性前列腺增生(BPH)组织中发现SOD2基因的点突变位点,其中前列腺癌组织标本(P3)中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt G---T颠换和373nt T---G颠换。结论:MnSOD基因的突变在前列腺癌的发生和发展过程中可能具有重要意义。

HEK293、COS7、7721、HepG2和PC12细胞内神经鞘磷脂合成酶活性比较

目的:分析比较HEK293、COS7、7721、HepG2和PC12的细胞内神经鞘磷脂合成酶(SMS)的活性。方法:收集处于对数生长期的HEK293、COS7、7721、HepG2和PC12细胞,每种细胞的细胞浓度相同;5种细胞均建立2个酶促反应体系,反应时间分别是2 h和3.5 h;薄层层析和灰度扫描分析比较SMS活性强弱。结果:HEK293细胞内的SMS活性较强。结论:建立了有效检测不同来源细胞SMS活性比较的方法,发现HEK293细胞具有较强的SMS活性,可以更好的用于神经鞘磷脂代谢的研究。

血清凝集肿瘤细胞活性及其意义的研究

目的 :探讨血清对肿瘤细胞凝集的影响以及血清凝集肿瘤细胞活性测定的意义。方法 :采用体外细胞凝集实验和实验性转移模型等 ,以及以热变性、酶消化和盐析等方法处理血清。结果 :血清诱导促进高转移潜能肿瘤细胞凝集 ,以恶性肿瘤患者血清凝集肿瘤细胞活性最高 ,其对恶性肿瘤诊断的灵敏度为 90 6% ,特异性为92 1% ,准确性为 91 3%。糖肽能有效地抑制血清诱导的黑色素瘤B16 细胞凝集及其实验性肺转移。此外蛋白酶及高碘酸处理血清可使血清凝集肿瘤细胞活性极大的降低 ,正常人及良性瘤患者血清活性对热较稳定 ,而恶性肿瘤患者血清活性则比较敏感等。结论 :血清中存在肿瘤细胞凝集因子 ,正常人及良性瘤患者血清中因子可能主要是糖蛋白 ,恶性肿瘤患者血清中的则可能还有少量氨基多糖和凝集素类。血清可能通过诱导肿瘤细胞凝集促进肿瘤转移。此外 ,血清凝集肿瘤细胞活性与肿瘤转移相关 ,其在恶性肿瘤的临床诊断及预后方面可能具有重要的应用价值。

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠的饲养繁殖和鉴定

目的:繁殖和鉴定神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因敲除(-/-)小鼠。方法:将引进的SMS2杂合子(+/-)小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,一旦获得雄性和雌性SMS2纯合子(-/-)小鼠,便按照同样方法进行繁殖;用酚氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型做出鉴定;将SMS2野生型(+/+)小鼠的产仔数作为正常对照组,与SMS2(+/-)和SMS2(-/-)小鼠的产仔数进行比较,用单因素方差分析、Dunnett检验处理数据。结果:SMS2(-/-)小鼠的饲养繁殖鉴定获得成功,单因素方差分析SMS2(+/+)小鼠、SMS2(+/-)小鼠以及SMS2(-/-)小鼠三组产仔数比较无显著性差异(P>0.05),Dunnett检验SMS2(+/-)小鼠与正常组比较产仔数无显著性差异(P>0.05),SMS2(-/-)小鼠与正常组比较产仔数无显著性差异(P>0.05)。结论:用正确的繁殖方法和鉴定方法可以成功获得SMS2(-/-)小鼠。

49例Ⅱ型糖尿病微量蛋白尿检测的临床意义

糖尿病慢性并发症目前已成为威胁糖尿病患者健康与生命的主要危害,而糖尿病肾病是最严重的慢性并发症之一,一旦临床糖尿病肾病诊断成立,其病理改变是一个不可逆转的改变,因此,糖尿病肾病的早期诊断至关重要。近年来有研究报道糖尿病患者尿液TRF排泄率显著增加,在糖尿病肾病的早期诊断中,尿液TRF较Alb更敏感,是肾小球受损的早期诊断指标。本组对49例Ⅱ型糖尿病患者进行了尿液TRF测定与Alb比较,以期探讨尿液微量TRF测定在糖尿病肾病早期诊断中的临床意义。

血清糖蛋白参与肿瘤细胞凝集

目的 探讨糖蛋白在血清诱导肿瘤细胞凝集中的作用。方法 体外测定生化处理的小鼠血清诱导的黑色素瘤细胞凝集率。结果 盐析、蛋白酶及高碘酸等处理血清导致其诱导细胞凝集的活性极大降低或丧失，热处理对血清活性影响较小。结论 糖蛋白可能是血清中主要的肿瘤细胞凝集因子。

猪红细胞膜糖肽抗肿瘤作用的初步研究

目的:探讨猪红细胞膜糖肽的抗肿瘤转移作用;方法:通过腹腔注射给药测定其对小鼠肿瘤生长和转移的影响。结果:糖肽明显抑制S_(180)肿瘤及Lewis肺癌的生长,抑制率分别为52.62％和66.44％,对Lewis肺癌的自发性肺转移的抑制率为78.16％。结论:猪红细胞膜糖肽具有抗肿瘤生长及抗转移的生物学活性,是一很有发展前景的生化制剂。