5-Aza-CdR对裸鼠皮下移植瘤组织中甲状腺乳头状癌细胞自噬和凋亡的影响及其机制

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞自噬和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:16只BALB/c雌性裸鼠右前腋下接种人甲状腺乳头状癌(PTC) TPC-1细胞建立移植瘤模型。成瘤后裸鼠随机分为对照组和实验组,每组8只,对照组裸鼠腹腔注射生理盐水,实验组裸鼠腹腔注射5-Aza-CdR,隔日给药1次,连续给药4周。观察2组裸鼠移植瘤生长情况,末次给药后处死裸鼠,称瘤体质量。HE染色观察2组裸鼠移植瘤组织病理形态表现,免疫组织化学染色检测2组裸鼠移植瘤组织中微管相关蛋白轻链3 (LC3)、B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组裸鼠移植瘤组织中LC3、Beclin-1、Bcl-2、Bax、细胞外信号调节激酶激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶1 (ERK1)、细胞外信号调节激酶2 (ERK2)、磷酸化ERK1 (p-ERK1)、磷酸化ERK2(p-ERK2) mRNA和蛋白表达水平,并计算Bax/Bcl-2比值。结果:与对照组比较,实验组裸鼠移植瘤体积和质量明显降低(P<0.01)。对照组裸鼠癌细胞数量多,排列紧密,细胞形状不规则,细胞核染色清晰,细胞核大,细胞有重叠和分叶,可见明显的病理性核分裂象,符合PTC病理特点;实验组裸鼠癌细胞数目明显减少,排列稀疏,细胞核固缩且胞核不明显,结缔组织明显增多。与对照组比较,实验组裸鼠移植瘤组织中LC3B和Beclin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05或P<0.01),MEK、ERK1/2及p-ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结结论论:5-Aza-CdR可抑制裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞生长,诱导移植瘤细胞自噬并促进细胞凋亡,其机制可能与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制有关。

5-Aza-CdR对甲状腺乳头状癌TPC-1裸鼠移植瘤MAPK/ERK通路、Caspase-3的影响

目的探讨5-Aza-CdR经MAPK/ERK信号通路及Caspase-3途径对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞裸鼠皮下异位移植瘤生长的抑制作用及机制。方法构建16只人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞裸鼠皮下异位移植瘤模型。成瘤后将其分为模型对照组和5-Aza-CdR干预实验组,每组8只。对照组腹腔内注射无菌生理盐水,每只200μL/次;实验组腹腔内注射5-Aza-CdR,每只200μL/次(1μg/g);每2天给药1次,周期为28 d。末次给药后剖取瘤组织称瘤质量。采用HE染色观察2个组瘤组织病理形态改变;采用qRT-PCR法检测2个组TPC-1移植瘤组织中MEK、ERK1、ERK2的mRNA表达水平的影响;采用Western-blot法检测2个组TPC-1移植瘤组织中MEK、ERK1/2、P-ERK1/2及Caspase-3的蛋白表达水平的影响。结果HE染色显示移植瘤组织见乳头/滤泡结构即为模型成功。与模型对照组相比,5-Aza-CdR干预实验组瘤体积、瘤质量减小,差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,5-Aza-CdR干预组中MEK、ERK1、ERK2的mRNA表达量显著下降,差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,5-Aza-CdR干预实验组MEK、ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达比对照组下降,Caspase-3蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论5-Aza-CdR抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞裸鼠移植瘤生长,可能通过抑制MAPK/ERK信号通路的活化,刺激线粒体依赖性途径Caspase-3发挥凋亡作用有关。