兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定

目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。

人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究

目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组（血红蛋白组）和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示：血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示：与基质对照组（感染后不治疗）比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。

利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库

背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。

大鼠生殖道炎症动物模型的构建

目的:构建苯酚胶浆致大鼠阴道及宫颈炎动物模型。方法:切除双侧大白鼠卵巢,注射苯甲酸雌二醇和氢化可的松,造成假动情期和全身免疫功能低下,然后每鼠阴道内注入苯酚胶浆0.1 ml,隔天一次共3次,每天观察并记录外阴变化,术后第15 d称重后眼球取血以显微镜计数法测定白细胞总数,断颈处死取阴道及宫颈进行病理学检查。结果:大鼠阴道口红肿、有的有脓性物流出;宫颈肥大,阴道及宫颈黏膜上皮细胞变性坏死或脱落,形成溃疡,膜下有充血水肿、炎细胞浸润、腔内有大量炎性或脓性渗出物及坏死组织;腺体有不同程度增生及鳞状化生;白细胞总数明显增高;体重减轻。结论:成功构建了阴道宫颈炎大鼠动物模型,为进一步研究HMGN家族等分子在调控女性生殖道炎症发生发展的机制研究打下了基础。

内源性抗生素肽HMGN2抗细菌内化作用及机制初探

目的探讨HMGN2抗细菌内化作用及其机制。方法利用生物学在线软件对人及常见医学模式生物HMGN2进行生物信息学分析;用免疫打点杂交技术检测临床标本HMGN2表达;设置以HMGN2预处理Klebsiella pneumoniae细菌后感染细胞组(简称共孵育组)和HMGN2预刺激细胞后再感染KP组(简称预刺激细胞组),平板菌落计数法检测两种状态下胞内活菌数;用荧光显微镜、流式细胞术观测各组细胞微丝形态和构成变化,用光镜观测HMGN2处理菌及未处理菌细胞骨架表型变化。结果不同属种生物HMGN2具有很高同源性,带阳离子电荷,具有α螺旋结构,分子量小于10kD;在炎性和非炎性标本中均可见HMGN2阳性信号,而在炎性标本中信号强度更大。HMGN2共孵育组和HMGN2预刺激细胞组胞内活细菌数与对照组相比较都明显减少,但共孵育组比预刺激细胞组胞内活菌数减少更为明显;荧光显微镜观察显示,两组微丝均有解聚成颗粒状向核周聚集现象,流式细胞术检测发两组细胞骨架微丝蛋白的平均荧光量减少,而油镜下HMGN2处理菌与未处理菌比较,其菌体长短径无明显的变化。结论 HMGN2属于内源性抗菌肽家族分子,可能通过促进细胞内微丝蛋白解聚成单体,减弱了KP内化入膀胱上皮细胞。

浅析拉赫玛尼诺夫艺术歌曲《春潮》的艺术特征

拉赫玛尼诺夫是俄罗斯重要的作曲家,他创作的艺术歌曲《春潮》给当时处于国家动荡的人们带去了希望。本文浅析拉赫玛尼诺夫诺夫艺术歌曲《春潮》的艺术特征,第一部分对艺术歌曲的定义进行了阐述,接着对拉赫玛尼诺夫的生平进行了介绍。第二部分是对艺术歌曲《春潮》艺术特征的分析,主要从它的创作背景、曲式、旋律、节奏、意象等方面展开探讨。最后是对艺术歌曲《春潮》的意义进行了总结。