双价痢疾菌苗株免疫小鼠后GALT中ASC的观测

为了观测两株菌苗ＦＳＭ－２１１７（Ｉｐａ－）、ＦＳ－５４１６（Ｉｐａ＋）免疫后所引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的免疫反应，以小鼠灌胃免疫为模型，应用ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法检测了ＧＡＬＴ中诱导部位派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）和抗原特异性抗体分泌细胞（ＡＳＣ），发现两菌苗株免疫小鼠后，ＰＰ结、ＭＬＮ中福氏、宋内氏抗原ＳＩｇＡ、ＩｇＧ抗体分泌细胞明显增加，尤以ＳＩｇＡ－ＡＳＣ为甚。株间差别无统计学意义。两株菌苗与对照组相比。

不同表型双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后黏膜和系统记忆反应观测

目的 观测 5株 2类不同表型的双价痢疾菌苗滴鼻免疫后所引起的黏膜和系统的记忆反应 ,为痢疾菌苗的构建提供理论依据。方法 以小鼠滴鼻免疫为模型 ,3次免疫 (间隔 2周 )后 ,2 0周再次免疫 ,分别于 3次免疫及 2 0周加强免疫后第 7天 ,收取鼻咽、肺、小肠及阴道冲洗液和血清 ,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果 2类双价菌苗株滴鼻免疫 3次后 ,多个黏膜部位及血清均产生了抗原特异性sIgA、IgG ,较PBS对照组有明显升高 ;2 0周后再次加强免疫 ,仍可诱导黏膜及系统的免疫反应 ,但较 3次免疫后水平明显降低。结论 2株双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后可诱导多个黏膜及系统的特异性抗体产生 ,并可产生一定时间的记忆反应 。

双价痢疾菌苗免疫小鼠后抗体记忆反应的观测

目的 :FSM 2 117和FS 5 416是我室构建的具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株 ,前者不表达侵袭蛋白 ,无侵袭力 ,而后者表达侵袭蛋白 (Ipa) ,具有侵袭力。拟观测两株菌苗FSM 2 117(Ipa- )、FS 5 416 (Ipa+ )免疫后所引起的肠粘膜局部和系统中的免疫记忆反应 ,为研制痢疾菌苗提供理论依据。方法 :以小鼠灌胃免疫为模型 ,3次免疫后 ,间隔 3个月再次免疫 ,第 7天取血清和小肠冲洗夜 ,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果 :两菌苗株免疫组 ,血清中及局部抗原特异性sIgA、IgG抗体明显升高。两株菌苗与对照组相比 ,都具有显著差异。结论 :两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后 。

肠上皮间淋巴细胞的研究进展

肠上皮间淋巴细胞（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｉＩＥＬ）是位于肠上皮细胞间基侧膜表面的一类淋巴细胞，在粘膜免疫防御、口服免疫耐受形成等方面起着十分重要的作用，它们无论在结构、功能上还是在起源、发育、回归上都与一...

马抗SARS-CoV免疫球蛋白对SARS-CoV GZ-01株中和作用的研究

观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白对SARS-CoV GZ-01毒株的中和作用,为马抗SARS-CoV免疫球蛋白用于SARS的治疗提供科学的依据。采用CPE、MTT测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白对SARS-CoV GZ-01株的中和作用。结果显示,马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2治疗性抗体对SARS-CoV GZ-01株具有很好的中和作用,三批马抗SARS-CoV免疫球蛋白的CPE和MTT中和效价分别达到1:6400、1:6400、1:12800,且两种方法测得结果一致。

增强DNA疫苗效果的几种策略

近年来DNA疫苗的研究成为疫苗研究领域的热点 ,集预防性疫苗、治疗性疫苗 ,抗感染疫苗与非抗感染类疫苗于一身 ,开创了人类与疾病斗争的疫苗研究新篇章 ,许多科学家将DNA疫苗称为第三次疫苗革命。目前 ,包括艾滋病DNA疫苗在内的 10余种DNA疫苗已经进入Ⅰ～Ⅱ期临床试验。但DNA疫苗本身存在着自身的缺点 ,本文就几种增强DNA疫苗免疫或治疗效果的策略进行综述。

肠粘膜上皮细胞的免疫学功能

肠道是人体重要的消化和吸收器官，同时也是表面积最大的免疫器官，肠粘膜上皮细胞处于机体与外界抗原接触的第一线，表面表达一系列表面分子，在生理及病理情况下能分泌一系列细胞因子，在感染防御及抗原吸收、转运、提呈等方面具有重要作用，本文重点介绍肠上皮细胞的免疫学功能。

双价痢疾菌苗角结膜免疫豚鼠后泪液中特异性抗体的检测

目的 :研究痢疾杆菌侵袭蛋白与局部免疫反应的关系 ,为痢疾菌苗的研制提供理论依据。方法 :用表达和不表达侵袭蛋白 (Ipa+ /Ipa-)的两株福氏、宋内氏双价痢疾菌苗经角结膜免疫豚鼠 ,并分别用福氏、宋内氏毒株攻击 ,BA ELISA方法检测豚鼠泪液中特异性抗体升高情况。结果 :发现角结膜免疫后豚鼠泪液中特异性双价抗体水平较对照显著升高 ,差别具有统计学意义 ,Ipa+ 菌苗免疫组宋内氏抗体水平较Ipa-免疫组升高 ,差别具有统计学意义 ;攻击后 ,两免疫组局部抗体呈二次反应变化。结论 :侵袭蛋白的表达可加强痢疾菌苗诱导的局部抗体水平。两株双价痢疾菌苗均有较好的免疫原性。

减毒活细菌在肿瘤治疗中的作用

减毒活细菌在作为感染疫苗用于预防感染性疾病的同时 ,某些细菌抗肿瘤特性及作为粘膜疫苗载体的研究近来受到了空前的重视。综述几种减毒活细菌在肿瘤治疗中的应用 ,包括卡介苗、梭状芽孢杆菌、伤寒杆菌。

双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导粘膜与系统免疫反应

目的 :探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响。方法 :BALB/c小鼠随机分为3组 ,每组 2 0只 ,FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2w ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞 ,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化 ;收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清 ,采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG。结果 :两株菌苗经鼻内免疫都诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加 (P <0 0 1) ;NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加 ,其中以CD4+ T细胞增加为主 ;FSM 2 117免疫组的脾细胞中B2 2 0 + 细胞显著增加 ,而FS 5 416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加。结论 :两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生 ,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径。

质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究

目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3 .1 H1载体中 ,构建表达siRNA的质粒。采用脂质体法将质粒转染VeroE6细胞 ,经潮霉素抗性筛选后 ,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验 ,以观察干扰效应。结果 对所构建的质粒分别测序 ,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致。用不同浓度的SARS CoV感染转染质粒后的细胞 ,与阴性对照相比 ,其细胞病变减轻、活细胞显著增加 ,病毒空斑明显减少。结论 利用RNA干扰能有效的抑制SARS CoV在细胞中的复制 ,并对细胞有保护作用 ,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法。

两株双价痢疾工程菌苗不同粘膜免疫途径的免疫原性

目的探讨免疫途径、接种剂量及侵袭蛋白表达对两株双价痢疾工程菌苗免疫效果的影响。方法小鼠分为滴鼻、灌胃和对照组 ,分别以不同剂量免疫 3次 ,间隔 2周 ,3次免疫后 7d收集血清、小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液 ,EL ISA法检测其中特异性福氏、宋内氏 L PS- Ig A和 Ig G。结果 4× 10 7CFU菌苗经鼻途径免疫即可诱导多个粘膜部位以及血清双价特异性抗体显著增高 ;菌苗剂量增加 2 0、2 0 0倍时经灌胃免疫诱发较为局限的粘膜特异性抗体增高。结论鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位 (特别是生殖道 )以及系统免疫的抗体反应 ,是一个安全有效的免疫途径。

2006～2007年流行流感病毒减毒疫苗株的构建(英文)

选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株作为骨架病毒,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入5个氨基酸突变(PB1-391E,581G,661T,PB2-265S,NP-34G).HA和NA来源于2006～2007当年流行株A/New Caledonia/20/99(H1N1).8个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接,构建8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS、pMDV-A-HA、pMDV-A-NA.6质粒与当年流行株的表面基因HA和NA进行"6+2"组合的病毒拯救,8个重组质粒共转染COS-1细胞,成功拯救出了具有血凝性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒.鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价为1∶29～1∶210.构建的A/AA/6/606个内部基因的病毒骨架拯救系统,为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。

冷适应减毒B型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定(英文)

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB123-PA,pAB124-HA,pAB125-NP,pAB126-NA,pAB127-M和pAB128-NS.在成功拯救冷适应A型流感病毒的基础上,利用反向遗传学技术成功获救了具有感染性的重配B型流感病毒株,命名为rMDV-B.该重配病毒株以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架,其中HA和NA来源于2006～2007年当年流行株B/Malaysia/2506/2004.rMDV-B在鸡胚尿囊液和MDCK细胞中的HA效价可达1∶64～1∶512.实验结果暗示:从单一供体病毒株可以产生有效的减毒活B型流感病毒疫苗候选株,能够为将来人用流感疫苗的设计提供可借鉴的模型.

小鼠Semcap2分子的克隆、表达与抗血清制备

目的 获得小鼠Semcap 2蛋白 ,并对其功能进行初步研究。方法 用DNA重组法构建了mSemcap 2cDNA的原核表达质粒pGEX KG mSemcap 2。将重组质粒转入大肠杆菌DH5α,经 0 .3mmol LIPTG在 37℃条件下诱导 3 .5h,行SDS PAGE检测。用 8mol L尿素溶解的包涵体作为免疫原免疫家兔制备多抗。结果 蛋白表达量约占细菌总蛋白的 1 5 %。多抗效价达 1∶1 0 2 4 0 0 ,此多抗可以与重组蛋白及真核转染细胞中的蛋白发生很好的抗原抗体反应。结论 小鼠Semcap 2在大肠杆菌中得到高效表达 ,其抗体的制备为深入研究mSemcap

双价痢疾菌苗不同途径免疫小鼠对脾细胞及GALT中ASC影响的实验研究

目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以探讨免疫途径及侵袭蛋白表达与否对痢疾菌苗免疫效果的影响。方法： BALB／c小鼠随机分为 3组，每组 20只， FSM－2ll7或 FS-5416 4 x10^7CFU分别经滴鼻、灌胃及肠内注射3种途径免疫小鼠，间隔2w，第3次免疫后7d活杀分离脾、小肠pp及MIN淋巴细胞，采用BA－ELISASPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG分泌细胞。结果：滴鼻途径及小肠内免疫都能够诱生脾细胞特异性IgA-ASC、IgG-ASC显著升高（P＜0．01）；仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著（P＜0．01）。滴鼻和小肠内免疫同时诱生肠GALT中派伊尔小结（Payer's patch,PP)和肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node,MLN)淋巴细胞ASC显著升高（P＜0．05，P＜0．01），但株间比较无统计学差异。而同等剂量的灌胃免疫未能诱发脾细胞及GALT特异性ASC升高。结论：鼻粘膜和小肠内免疫可以有效地诱导脾脏和GALT淋巴细胞的免疫反应，且显著降低免疫原用量（本实验滴鼻剂量为常规灌胃的1/20），是一个安全有效的免疫途径。研?

传染性非典型肺炎疫苗的研制:重组真核质粒PVAX1/SARS-CoVM的构建及免疫原性研究

目的:构建真核表达质粒PVAX1/M,免疫Balb/c小鼠,测定其诱导的特异性免疫应答,探讨传染性非典型肺炎(severeacuteresperatorysyn-drome,SARS)防治和康复的可能手段。方法:根据GenBank中登录的SARS-CoVM蛋白基因序列设计引物,采用反转录聚合酶链反应方法从感染SARS病毒的VeroE6细胞中扩增得到约666bp的片段,构建重组真核表达质粒PVAX1/M。体外转染COS-7细胞,细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达后,肌肉注射免疫Balb/c小鼠(雌性,6周龄),加强免疫3次后,测定其诱导免疫应答的能力。结果:构建的重组质粒经酶切及测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;细胞免疫化学方法均显示重组质粒可在COS-7细胞中表达有免疫原性的SARS-CoVM蛋白;免疫小鼠血清中检测到较高滴度的抗体,并能诱导特异性的CTL反应。结论:成功构建真核表达质粒PVAX1/SARS-CoVM,并能诱导小鼠产生特异性的免疫应答,为SARS的预防康复提供了可能的治疗手段。

抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)_2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01株的中和作用

目的观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01毒株的中和作用。方法采用细胞病变法(cytopathiceffect,CPE)、四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazoliumassay,MTT)测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株的中和作用。结果三批马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,CPE和MTT法测得中和效价分别为1∶6400、1∶6400、1∶12800。结论研制的马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,并且两种方法结果一致,为SARS的治疗提供了可靠的依据。