兔卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究

为了研究兔卵巢保存温度、运输时间及季节对兔卵母细胞体外成熟培养效果的影响,试验把从屠宰场获取的兔卵巢分别保存在25～30℃、31～35℃、36～40℃的生理盐水中运回实验室,将采集到的卵母细胞体外成熟22～24 h,比较兔卵巢分别在<3 h、≥3～≤4 h、>4 h 3个不同时间段运回实验室对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:卵巢保存在25～30℃生理盐水时,卵母细胞体外成熟率为61.09%,显著高于另两者(26.30%、15.79%,P<0.05)。卵巢运输时间>4 h时,卵母细胞的成熟率为50.23%,显著低于另两者(64.24%5、9.64%,P<0.05)。夏季从屠宰场收集兔卵巢得到卵母细胞体外成熟率为32.65%,显著低于春季、秋季和冬季(64.26%、58.37%6、4.86%,P<0.05),但春季、秋季和冬季之间差异不显著(P>0.05)。说明在春季、秋季和冬季收集兔卵巢,放在25～30℃生理盐水中保存,在4 h内送回实验室,有利于卵母细胞的成熟培养。

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素，为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后，按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组，对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％，二者差异不显著（P〉0．05）；采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％，P〈0．05）；以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％，P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果，单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。

母兔超数排卵影响因素的研究

采用国产促性腺激素对新西兰白兔进行超数排卵试验,研究激素、季节及兔龄对超排效果的影响。结果发现:①FSH组(30.05±8.97个/只)平均排卵数显著高于PMSG组(22.46±5.18个/只)(P<0.05)。②母兔在春季、夏季、秋季、冬季的平均排卵数为32.34±5.58、15.96±4.11、24.18±4.95和22.61±3.75个/只,春季的处理效果显著优于其他3个季节(P<0.05),而秋季和冬季处理组之间没有显著差异(P>0.05),但都显著高于夏季(P<0.05)。③经产母兔超排处理后的平均排卵数(30.56±6.79个/只)显著高于青年母兔平均排卵数(21.60±3.66个/只)(P<0.05)。以上结果表明,SH超排效果优于PMSG,且在春季对母兔进行超排处理比较合适,经产母兔比青年母兔超排效果更好。

兔卵母细胞孤雌激活方法的研究

对兔卵母细胞的孤雌激活方法进行探讨,为兔的体细胞核移植奠定良好的技术平台。体外成熟培养20～22h的兔卵母细胞随机分组,分别进行以下试验:采用不同脉冲电压、脉冲次数和脉冲时间,电激活兔卵母细胞,摸索最佳电激活参数;比较不同的激活方法处理兔卵母细胞的效果,Ⅰ:Ion 5min+6-DMAP 3h,Ⅱ:Ion 5min+CHX 3h,Ⅲ:Ion 5min+6-DMAP联合CHX 3h,Ⅳ:电激1次联合6-DMAP+CHX 3h;优化6-DMAP与CHX作用时间。结果显示:当电激参数为:电压40V/mm,脉冲时间20μs和脉冲次数3次时,兔孤雌胚的分裂率和囊胚率最高,可达80.64%和14.51%;采用第Ⅳ种方法激活兔的卵母细胞,胚胎的分裂率和囊胚率(80.64%,13.71%)均显著高于Ⅰ组(66.67%,8.6%)和Ⅱ组(43.21%,1.24%,P<0.05),略高于第Ⅲ组(77.59%,12.07%);当兔孤雌胚分别在含6-DMAP和CHX的CM中培养1h和3h时,1h处理组在分裂率(80.68%vs 77.59%)和囊胚率(15.91%vs 12.07%)上都略高于3h处理组。结果表明:兔卵母细胞经Ion处理5min,或先电激1次(参数为电压40V/mm,脉冲时间20μs,脉冲3次),再用2mmol/L 6-DMAP+5mg/L CHX处理1～3h,均可获得较好的激活效果,有利于兔孤雌胚的发育。

促性腺激素释放激素拮抗剂在防治早发型中重度卵巢过度刺激综合征的应用

目的探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-A)在防治体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕过程中并发早发型中、重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)的效果,旨在寻找防治早发型中重度OHSS的有效措施。方法回顾性队列研究分析本院生殖中心接受IVF-ET助孕治疗具有OHSS高风险而取消新鲜周期胚胎移植行全部胚胎冷冻的患者共138例。其中hCG注射日血清雌二醇(E2)≥4 000 ng/L且<6 000 ng/L和/或获卵数≥15个为对照组,在取卵当日给予来曲唑5 mg,口服,qd;溴隐亭2.5 mg,直肠给药,qd,共76例;血清E2≥6 000 ng/L为试验组,在取卵当日给予以上治疗措施的同时另给予思则凯0.25 mg单次皮下注射,共62例。两组患者均在取卵后第3日及第5日复查血清E2水平、血常规及阴道B超,比较两组患者在使用两种治疗措施前后的变化,计算两组患者中、重度OHSS的发生率。结果两组患者中均无重度OHSS发生。试验组中度OHSS发生率(3.23%)低于对照组(7.90%)(P=0.243)。使用GnRH-A后E2水平下降快、卵巢恢复快(P=0.00)。试验组白细胞、红细胞、红细胞压积、血小板水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OHSS高风险患者取卵日单次给予GnRH-A不受促排卵方案的影响,可显著降低早发型中重度OHSS的发生率,减轻了患者的症状及经济负担,可作为防治早发型中重度OHSS的有效措施。