RNA干涉技术用于p53基因表达的研究

目的利用RNAi技术研究p53基因表达。方法以质粒为载体,介导体外合成的具有与p53基因目的区域同源的特殊结构的DNA片段,通过脂质体将携带此片段的质粒载体导入COS-7细胞,利用载体的U6-RNA启动子,不断在体内产生21-23ntsiRNA,引起目的基因p53的沉默并用Westernblot检测p53的表达水平。结果通过质粒载体介导体外合成的具有特殊结构的DNA片段,能成功地导致p53蛋白的表达下降。结论RNAi技术可作为研究肿瘤基因的有效手段。

实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测

目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术用于骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因检测的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR Green I技术,检测21例MDS患者的SLC7A5基因表达情况,并以IDA、ITP、增贫及其他贫血19例为对照组。结果实验组和对照组SLC7A5基因的表达无明显的统计学差异。结论real-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便、快捷、准确的方法。

大数据技术在高中生物实验教学中的应用

大数据技术在高中生物实验教学中发挥优势作用,通过数据资源的整合与科学分析,可优化实验组织,带动高中生物实验教学评价的创新优化,也能调动学生参与生物实验活动的积极性,使得高中生物实验教学更具实效性.选取部分生物实验的案例,结合大数据技术的应用进行高中生物实验教学分析,验证说明大数据技术在高中生物实验教学中的应用优势,为后续高中生物实验教学的优化提供指导与参考.

高中生物教学中核心素养的培养

2014年12月，教育部全面启动对2004年开始实行的各学科普通高中课程标准的修订工作，本次修订中一项重要的任务就是“凝练核心素养，推动落实‘立德树人’根本任务”，要求高中生物教学必须深入挖掘学科核心素养，以核心素养为教学的核心，从三维目标出发，探索高中生物学科素养的培养策略。

氨苄青霉素及四环素耐药基因的裸探针制备

通过PCR方法由DNA聚合酶催化 ,在自行设计的两段特异引物引导下 ,用PCR生成克隆化双链DNA ,将其中氨苄青霉素及四环素耐基因的特异序列制备裸探针。

G蛋白β3亚单位基因多态性与奥氮平所致体重增加的相关性

目的探讨G蛋白β3亚单位(G-proteinβ3 subunit,GNB3)基因C825T多态性与精神分裂症患者使用奥氮平治疗过程中体重增加的关系。方法对90例首次住院的精神分裂症患者予奥氮平治疗12周,监测治疗前后的体重、体重指数(body mass index,BMI)变化,并检测患者GNB3基因C825T多态性,分析基因多态性与体重变化的相关性。结果治疗后患者体重、BMI增加有统计学意义(均P<0.01)。TT基因型者治疗后的增重率(weight gain rate,WGR)及BMI增加较CC基因型者更明显(均P<0.01),携T等位基因(TT型+CT型)者治疗后的WGR及BMI增加较非携T等位基因(CC型)者更明显(均P<0.01)。治疗后WGR≥7%者GNB3基因C825T基因型分布(CC型15.69%,CT型54.90%,TT型29.41%)与WGR<7%者(CC型38.46%,CT型43.59%,TT型17.95%)差异有统计学意义(P<0.05),WGR≥7%者T等位基因频率(63.33%)高于WGR<7%者(39.74%)(P<0.05)。多因素线性回归显示TT基因型(以CC型为参照)影响奥氮平治疗后的体重变化(β=1.83,标准化β=0.29,P<0.01)。结论 GNB3基因C825T多态性与奥氮平所致的体重增加有关。

MicroRNA-106a在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨微小RNA-106a(miRNA-106a)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并进一步分析其与肿瘤的临床病理特征和预后的相关性。方法:收集42例NSCLC肿瘤组织和相对应的正常肺组织,采用RT-PCR方法检测miRNA-106a在组织中的相对表达量,同时在肺癌细胞株和正常支气管上皮细胞中加以验证。进一步分析miRNA-106a的表达与临床病理资料和预后的相关性。结果:肺癌组织中miR-106a表达水平(3.72±1.81)明显高于正常肺组织(1.15±0.52)(P<0.01);肺腺癌A549细胞和鳞癌SK-MES-1细胞中miR-106a的表达水平均高于正常人支气管上皮16HBE细胞,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。MiR-106a的表达水平与肺癌的EGFR基因突变、淋巴结转移及临床分期明显相关(P<0.05)。MiR-106a低表达者生存时间明显高于高表达组(P<0.01)。结论:MiR-106a在NSCLC肿瘤组织中表达上调,可作为NSCLC预后判断的潜在分子标志物。

两种药物对肠道杆菌耐药质粒的影响

目的 探讨中西药在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒 pRST98的可能性。方法 将原存在于伤寒杆菌中的多重耐药质粒pRST98,分别导入大肠杆菌和鼠伤寒杆菌 ,选用氧氟沙星和双黄连对上述三种携带 pRST98的肠道细菌进行质粒消除试验 ;对受试菌进行药敏试验及质粒电泳检测 ;用地高辛标记的氯霉素、氨苄青霉素和四环素耐药基因探针进行Southernblot。结果 两种药物虽然未能将受试菌携带的 pRST98消除 ,但该质粒编码的耐药种类却减少 ;部分菌株对一些药物的耐药程度明显下降甚至恢复敏感 ,但SouthernBlot结果却显示 pRST98上的耐药基因并未丢失。结论氧氟沙星和双黄连能降低pRST98宿主菌的耐药性 ,但药物作用后同一质粒在不同种属或同种细菌的不同菌株间耐药性变化有差异 ,显示该质粒耐药基因表达的多样性和复杂性。

白头翁皂苷A对K562细胞红系诱导分化作用的研究

目的:探讨白头翁皂苷A对K562细胞向红系诱导分化的作用。方法:应用不同浓度的白头翁皂苷A作用于K562细胞后,采用联苯胺染色阳性细胞计数、细胞内血红蛋白测定及流式细胞术检测细胞膜表面CD71及GPA分化抗原表达等方法评价白头翁皂苷A对K562细胞的诱导分化作用。结果:不同浓度的白头翁皂苷A均可提高K562细胞内血红蛋白的含量;上调K562细胞膜表面CD71及GPA分化抗原的表达。其中以4μg/ml的白头翁皂苷A的作用最为显著。结论:白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。

异基因造血干细胞移植治疗慢性粒-单核细胞白血病的临床分析

目的:回顾性分析异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗慢性粒-单核细胞白血病(CMML)的疗效。方法:通过观察13例CMML患者在接受allo-HSCT后造血植入、移植物抗宿主病(GVHD)、感染、复发及生存情况,分析allo-HSCT治疗CMML的临床疗效。结果:13例患者中,男性10例,女性3例;中位年龄38(21-50)岁,其中非亲缘相合移植4例,同胞相合移植6例,亲缘单倍体相合移植3例。13例患者全部获得供者型植入,粒系植入中位时间12(11-18)d,巨核系植入中位时间15(10-55)d,其中8例患者发生急性GVHD,中位随访时间13(6-29)个月,总体生存率53.8%,无病生存率53.8%,复发率7.7%。结论:Allo-HSCT可以改善CMML患者的生存,是治疗CMML的有效手段。

中西药消除耐药质粒pR_(ST98)的研究

目的 用SouthernBlot杂交法检测中、西药在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒pRST98的结果。方法 用氧氟沙星和中药双黄连对携带pRST98的伤寒杆菌、大肠杆菌和鼠伤寒杆菌进行亚抑菌浓度的质粒消除试验 ;用地高辛标记的氨苄青霉素和四环素耐药基因探针进行SouthernBlot。结果 SouthernBlot杂交结果显示两种药物作用后pRST98上的耐药基因并未丢失 ,但同一质粒耐药基因在不同宿主菌中表达不同 ,导致最小抑菌浓度 (MIC)变化有明显差异。结论 氧氟沙星和双黄连能降低pRST98宿主菌的耐药性。

DNA修复及其在肿瘤发生中的作用

生物体基因组不断受到各种内外因素的威胁仍能保持遗传信息的稳定传递,与机体不同类型的DNA修复功能密切相关。但是,当DNA修复功能异常不能及时有效地对受损的DNA进行修复时,基因组的稳定性就会受到挑战,从而导致染色体结构发生变化等一系列事件的发生,最终导致肿瘤的发生或者进展。因此,对DNA修复功能的机制进行深入研究有助于治疗、延缓肿瘤进展。

蚯蚓数量动态和环境因素关系的研究

研究了菜园和荒地土壤中蚯蚓的数量动态变化和空间分布,结果表明菜园的蚯蚓密度从3～6月逐渐减少,荒地土壤中蚯蚓密度从3～6月逐渐增多,而两者的垂直分布都是从上到下逐渐减少。在菜园和荒地土壤中的环境因素也具有明显的季节动态变化。灰色关联分析表明,影响菜地的蚯蚓密度的主要因素是含水量和pH值,而影响荒地蚯蚓密度的主要因素是土壤温度和含水量。

SET-NUP214融合基因阳性的混合表型急性白血病研究

目的探究SET-NUP214融合基因阳性且伴有髓细胞肉瘤的混合表型急性白血病（MPAL）病例的临床及分子生物学特征。方法通过病理组织活检，骨髓形态学检查，流式细胞术，染色体核型分析，多重巢式PCR扩增，基因转录本测序等方法进行分析。结果该患者阴道壁和淋巴结活检皆示小细胞恶性肿瘤；骨髓形态学结果为急性白血病；流式免疫分型提示髓系、B淋系混合表达；染色体核型分析存在包括del（7）（q22），t（16；17）（p13；q22）的复杂染色体异常；多重巢式PCR检测到SET-NUP214融合基因，融合位点为SET exon7／NUP214 exon18。结论该患者为极其罕见的SET-NUP214融合基因阳性，且伴有粒细胞肉瘤的MPAL。

137例男性泌尿生殖道感染病原体分析

目的 进一步了解目前我国男性泌尿生殖道感染的病因。方法 采用细菌培养、解脲脲原体培养、PCR检测沙眼衣原体等 ,对 137例男性泌尿生殖道感染患者进行病原体检测。结果 110例检出病原体 ,其中淋球菌 2 6例 ( 19.0 % ) ,解脲脲原体 40例 ( 2 9.2 % ) ,沙眼衣原体 2 1例 ( 15 .3% )。L型细菌感染在慢性前列腺患者中明显增加 (P<0 .0 5 )。结论 目前国内男性泌尿生殖道感染日趋复杂 。

融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影响

背景:已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞。目的:观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。方法:应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPαmRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况。结果与结论:AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列。结果提示C/EBPα是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达。

胱硫醚-β-合成酶基因多态性与精神分裂症核心家系的关联研究

目的:探讨胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-beta-synthase,CBS)基因多态性与精神分裂症的关系。方法:采用聚合酶链式反应和DNA测序技术,检测75个精神分裂症核心家系CBS基因T833C、G919A多态性,采用单倍体相对风险度(haplotyperelativerisk,HRR)分析和传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT)分析CBS基因多态性与精神分裂症的关系。结果:所有受检者均未发现CBS基因T833C、G919A多态性,但下游8-9内含子33bp处见G→A突变。患者组G→A突变的基因型频率[GG(82.67%),GA(14.67%),AA(2.66%)]与父母组[GG(81.33%),GA(16%),AA(2.67%)]比较差异无统计学意义(χ2=0.29,P>0.05),患者组G→A突变的等位基因频率[G(90%),A(10%)]与父母组[G(89.33%),A(10.67%)]比较差异也无统计学意义(χ2=0.32,P>0.05)。HRR分析未显示G→A突变与精神分裂症有关联(χ2=0.21,P>0.05),TDT分析未见A等位基因在杂合双亲向患病子女的传递中有优势性(χ2=1.80,P>0.05)。结论:CBS基因多态性可能不是精神分裂症的遗传学危险因素。

高海拔地区不同饮食习惯人群的肠道菌群差异研究

目的分析高海拔地区藏、汉两民族非疾病人群肠道菌群的特征及差异。方法选取非疾病藏族与汉族人各100名,分析两民族饮食结构特点,并从中选取两民族人群各10名,采集粪便标本行16S rRNA基因高通量测序,分析藏、汉两民族人群肠道菌群特征,比较肠道菌群的差异并探讨导致其差异的因素。结果非疾病藏族与汉族人群肠道菌群存在明显差异。在门水平上,藏族人群的拟杆菌门和变形菌门的相对丰度高于汉族人群,厚壁菌门、软壁菌门、放线菌门相对丰度低于汉族人群。肠道菌群中拟杆菌的丰度与饮食中蛋白质的含量呈正相关,普氏菌的丰度与细粮的含量呈正相关,软壁菌门的丰度与蔬菜、水果的含量呈正相关。结论高海拔地区非疾病藏族与汉族人群的肠道菌群存在差异,其差异可能与人种及饮食结构的差异有关。

伤寒杆菌耐药质粒pR_(ST98)毒力基因spv的序列测定

目的 对伤寒杆菌多重耐药质粒 pRST98的毒力基因spv进行克隆及核酸序列测定。 方法 为区分毒力基因存在于细菌染色体还是位于耐药质粒 pRST98,先分离提取耐药质粒 pRST98,再以该质粒为模板 ,将自行设计的引物经多聚酶链式反应 (PCR)扩增目的基因 ,装入克隆载体 pGEM TEASY进行核酸序列测定。 结果 PCR反应得到spv基因的spvR和spvB片段 ,其ORF大小分别为 894bp和 1776bp ,核酸序列测定后进行生物信息学分析。结论 伤寒杆菌多重耐药质粒pRST98除编码细菌抗药性外 ,还具有与细菌毒力相关的基因 ,该质粒是一种具有双重功能的“嵌合型”质粒。

初诊慢性粒细胞白血病疾病各阶段WT1基因表达量的研究

目的探讨WT1基因在初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者疾病各阶段中的表达量的特点.方法通过Taqman荧光探针RQ-PCR方法分别对188例初诊CML的患者的WT1目的基因及ABL内参基因进行检测,利用标准曲线法对WT1基因的表达水平进行绝对定量,检测结果用WT1与10000倍ABL基因拷贝数比值(WT1/10000 ABL)表示.结果初诊188例CML患者中有慢性期158例,WT1表达量范围在4~470 copies/10000 ABL copies;加速期患者26例WT1表达量范围在386~14439 copies/10000 ABL copies;急淋变期患者4例WT1表达量范围在26~667 copies/10000 ABL copies.结论WT1基因在CML患者各疾病期均有表达,并且加速期患者的WT1表达量最高,明显高于慢性期和急淋变期;WT1表达量的多少可以预示CML所处疾病阶段.