具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体的构建

目的构建具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体。方法本研究在前期构建的多表位疫苗GILE的基础上,通过添加SAM基因序列,设计、合成SAM-GILE序列,构建乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE,并电转至乳酸乳球菌NZ9000中建立乳酸菌表达体系。用酶切与基因测序双重实验验证乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE是否构建成功,用PCR验证乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE是否成功电转至乳酸乳球菌NZ9000,用Western Blot实验检测重组蛋白SAM-GILE是否表达,用全细胞ELISA法检测SAM-GILE的表面展示情况,用免疫荧光染色法鉴定LL-plSAM-GILE的M细胞靶向性。结果酶切与基因测序双重实验结果显示,乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE构建成功。经PCR验证,pNZ8148-SAM-GILE成功电转至乳酸乳球菌NZ9000。经Western Blot验证,通过Nisin诱导,成功表达约45 KD的重组蛋白。经全细胞ELISA检测,SAM-GILE可展示于LL-plSAM-GILE表面。经免疫荧光染色验证,重组抗原与M细胞高度重合,表明重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-GILE具有M细胞靶向性。结论成功构建具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体。