牛妊娠相关糖蛋白boPAG2双抗体夹心ELISA体系的建立

【目的】通过双抗体夹心ELISA体系实现对牛妊娠相关糖蛋白boPAG2的免疫学检测,为后续研发牛妊娠检测试剂盒奠定基础。【方法】将自制boPAG2作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,以细胞融合技术对呈阳性的杂交瘤细胞进行筛选。运用ELISA相加性试验筛选最佳配对抗体,初步建立起双抗体夹心酶联免疫吸附试验系统,采集牛场中120头荷斯坦奶牛血清样本进行初筛。【结果】筛选出3株能稳定分泌boPAG2单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2C01,5E02,3B05。纯化出单克隆抗体滴度为(1∶22.48×10^4)^(1∶11.96×10^4),免疫球蛋白亚型均为IgG。ELISA相加性试验筛选出2株可识别boPAG2抗原不同表位的最佳配对抗体5E02和3B05。当5E02作为包被抗体,3B05作为检测抗体时,其最佳稀释质量浓度为1.25μg/mL,检测boPAG2的灵敏度可达5μg/mL。【结论】制备和选定了两株最佳配对单克隆抗体5E02和3B05,该对抗体效价高,通过建立双抗体夹心ELISA体系实现对boPAG2的免疫学检测,并对少量血清样品进行了初步鉴定。

牛妊娠相关糖蛋白基因boPAG4的原核表达及单克隆抗体的制备

为了获得具有高特异性和高免疫原性的boPAG4单克隆抗体,本试验以PCR技术扩增荷斯坦奶牛boPAG4基因,构建重组质粒pCold TF-boPAG4后,在E.coli BL21(DE3)中表达pCold TF-boPAG4蛋白并优化。以重组蛋白pCold TF-boPAG4作为免疫原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合最终筛选出3株能稳定分泌pCold TF-boPAG4单克隆抗体的杂交瘤细胞,pCold TF-boPAG4单克隆抗体滴度均为1×105以上。纯化蛋白pCold TF-boPAG4经HRV3C蛋白酶酶切后制备出boPAG4抗原,Westernblot(WB)结果显示,3种单克隆抗体都能特异性识别boPAG4抗原,pCold TF-boPAG4单克隆抗体的成功制备为开发现场奶牛妊娠ELISA检测系统提供了理论支持。

冷鲜猪肉中单增李斯特菌快速检测试纸条的初步研制

【目的】建立一种可快速检测单增李斯特菌的胶体金试纸条的制备方法。【方法】用自制的单核增生性李斯特菌作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,之后通过杂交瘤技术进行细胞融合制备出特异性良好的单克隆抗体,并通过双抗夹心ELISA体系筛选出2株稳定且配对最佳的抗体,利用胶体金免疫层析技术组装试纸条并分析其特性。【结果】筛选出的2株单抗命名为3B7、5C9,测得其灵敏度均为10~4 CFU/mL,抗体的最适pH值是8.0,最佳抗体标记是24μg,试纸条的灵敏度为10~6 CFU/mL且特异性良好。【结论】初步制备出可快速、准确检测冷鲜猪肉中单增李斯特菌的试纸条。