广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性

旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支原体通用引物序列鉴定等方法,对分离的菌株进行种属鉴定,同时将分离的毒株对鸡胚和SPF鸡进行攻毒试验及抗菌药物敏感性试验。结果显示:显微镜下菌落呈典型的“荷包蛋”状。平板凝集试验显示其与MG阳性血清有凝集反应,与MS阳性血清不反应;16S rRNA序列测序发现各分离株与MG相似性达99.9%,因此确定分离株为MG。将各分离株感染7日龄SPF鸡胚,结果显示感染鸡胚大多于临近出壳时死亡;感染3周龄的SPF鸡,3周后解剖发现鸡气囊发生显著病理变化,说明其具有较强致病力;药物敏感性试验结果显示,5株分离株对盐酸沃尼妙林、多西环素、泰万菌素及泰妙菌素有较高敏感性,对替米考星、泰乐菌素、恩诺沙星、红霉素、吉他霉素、林可霉素呈现出不同程度耐药性。综上,从广东某规模化鸡场死鸡胚中成功分离到5株MG分离株,各分离株均可引起红细胞凝集,导致鸡胚死亡,对SPF鸡可引起典型的气囊炎症状,且对多种药物存在不同程度耐药性。本研究为临床MG的分离鉴定及用药选择提供了可参考的技术方法及指导,为MG攻毒模型建立提供了研究基础。

滑液囊支原体NADH氧化酶单克隆抗体的制备

为制备滑液囊支原体NADH氧化酶(NOX)的单克隆抗体。将本实验室前期构建好的重组菌株E.coliBL21(pET28a-NOX),进行诱导表达,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选结合有限稀释法克隆化,得到1株稳定分泌抗MSNOX抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F4。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,该单克隆抗体为IgG2b亚类,间接ELISA测定单克隆抗体腹水效价为1∶2048000。经Westernblot和悬浮免疫荧光试验鉴定,该株单克隆抗体与MS不同分离株均发生特异性反应,与其他禽致病菌不发生反应。通过染色体分析,该杂交瘤细胞株2F4有98±5条染色体,符合杂交瘤细胞染色体的数目,证实细胞融合成功。本研究成功制备NADH氧化酶单克隆抗体,为建立滑液囊支原体的检测方法及进一步研究NADH氧化酶在MS致病机制中的作用提供了重要的生物材料。

流产布鲁菌LysR家族转录调控子LTTR8缺失株的构建及其生物学特性分析

布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab_RS24670缺失株ΔlttR8,基于广宿主质粒pBBR1MCS构建成互补株ΔlttR8-Com。免疫印迹试验表明:ΔlttR8为光滑型菌株;体外培养分析发现lttR8缺失不影响布鲁菌的生长;细胞感染试验发现lttR8缺失不影响布鲁菌黏附、入侵细胞和胞内存活的能力。耐受性试验分析发现:lttR8缺失不影响布鲁菌对过氧化氢(H2O2)和多粘菌素B(polymyxin B)的敏感性。小鼠感染试验分析发现lttR8缺失显著减弱流产布鲁菌的毒力。综上所述,本研究发现一个新的与流产布鲁菌致病性相关的转录调控子,为布鲁菌致病机制研究提供参考。

血清肌钙蛋白Ⅰ在急性心肌梗死诊断中的临床价值

目的急性心肌梗死(AMI)是威胁人类生命的主要疾病之一,及时诊治是挽救生命的关键。初步研究表明,肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)作为心肌细胞内特有的结构蛋白成分释放入血循环是心肌细胞损伤的高度敏感和特异的标志。本研究通过定性和定量测定比较心肌cTnI与几种常用的AMI诊断标记物的临床应用价值。方法对40例AMI和65例非心肌梗死患者同时检测血清cTnI、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD)等6项指标,并进行两组间比较,分别对AMI和非心肌梗死组各指标间的差异作对比分析。结果 cTnI诊断AMI的敏感性(92.5%)高于CK(72.5%)、CK-MB(65.0%)、AST(62.5%)、LDH(60.0%)、α-HBD(62.5%),P<0.05;cTnI诊断AMI的特异性(96.3%)与CK-MB(93.8%)相近(P>0.05),高于CK(87.8%)、AST(76.9%)、LDH(84.6%)及α-HBD(81.5%),P<0.05。结论 cTnI对AMI的诊断具有较高的敏感性和特异性,作为一种心肌损伤的特异标记物,具有较好的临床应用价值。

SDS-AGE电泳法测定糖尿病肾病患者尿蛋白的图谱分析

糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症,是糖尿病全身性微血管病变表现之一,临床特征为蛋白尿、渐进性肾功能损害、高血压、水肿,晚期出现严重肾功能衰竭,是糖尿病患者的主要死亡原因之一。近年来,随着我国人口人均寿命延长,生活饮食习惯和结构的改变,糖尿病的患病率呈直线上升趋势,

ICU血流感染患者碳青霉烯类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌的毒力和耐药基因分布及其与感染严重程度的相关性

目的探讨重症监护病房(ICU)碳青霉烯类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌血流感染患者的临床特征,并分析菌株耐药和毒力基因的检出情况及其与感染严重程度的关系。方法选取2018年1月至2020年12月新疆医科大学第五附属医院检验科首次分离的180株非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CR-KP),以上菌株来自180例ICU血流感染患者的血液样本。根据拉丝试验将所有菌株分为耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)组和耐碳青霉烯类非高毒力肺炎克雷伯菌(CR-non-hvKP)组,比较两组CR-KP菌株宿主临床特征、碳青霉烯酶、血清荚膜分型和毒力基因的检出情况,并采用Spearman法分析毒力基因与患者脓毒症相关序贯器官衰竭(SOFA)评分的相关性。结果180株CR-KP宿主中CR-hvKP感染患者62例(34.4%)。CR-hvKP组年龄、合并糖尿病及30 d内死亡比例明显高于CR-non-hvKP组(P<0.05)。CR-hvKP组与CR-non-hvKP组携带肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因和携带新德里金属-β-内酰胺酶基因的菌株比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。ICU血流感染患者CR-KP菌株携带的毒力基因以ybtS(95.6%)和entB(81.7%)为主,其中CR-hvKP组菌株中携带rmpA、iutA和rmpA2毒力基因的比例高于CR-non-hvKP组[98.4%(61/62)比12.7%(15/118),87.1%(54/62)比27.1%(32/118),85.5%(53/62)比18.6%(22/118)](P<0.05),CR-hvKP与CR-non-hvKP组其余毒力基因分布比较差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析结果显示,毒力基因rmpA、iutA和rmpA2与SOFA评分呈正相关(r=0.498,P<0.001;r=0.652,P<0.001;r=0.630,P<0.001)。结论ICU碳青霉烯类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌血流感染患者毒力基因rmpA、iutA和rmpA2与感染严重程度存在密切关系,及时检测菌株毒力基因对临床治疗具有一定意义。

牛支原体临床分离株牛体毒力和免疫原性比较

牛支原体肺炎是我国肉牛的新现传染病,目前尚无特异性预防措施。本研究比较3株牛支原体临床分离株和1株ATCC参考株PG45的牛体毒力和免疫原性,筛选免疫原性良好的强毒株,为牛支原体灭活疫苗研究提供侯选菌株。6月龄左右本地健康黄牛经气管注射相同剂量的牛支原体,连续观察22d后处死,记录攻毒前后试验牛的临床症状,血液白细胞变化,体重变化,特异性细胞免疫和体液免疫反应等;剖检观察病理变化和组织病理变化,并用免疫组化方法检测组织中抗原量。4株牛支原体菌株中,临床分离株XY毒力最强,导致牛体重减轻,临床症状明显,大体和组织病理变化严重,同时能诱导较好的免疫反应。然而,各株牛支原体抗原在感染牛肺和淋巴结的分布没有显著差异。通过牛体试验,筛选出1株牛支原体灭活疫苗研究侯选菌株,同时为牛支原体毒力研究和疫苗效力评价提供了牛体感染模型。

不同鸭疫里默氏杆菌菌株携带生物被膜形成相关基因的分析

为筛选鸭疫里默氏杆菌(RA)生物被膜形成过程中的关键基因,本研究先采用PCR检测了10个生物被膜形成相关基因在生物被膜形成强、弱和无的菌株中的分布,根据试验结果,比较了CH3株在置玻璃试管和12孔聚乙烯板中培养时5个生物被膜形成相关基因在转录水平上的差异。结果表明,21株RA中强、弱和无生物被膜形成的菌株分别占28.57%(6/21)、23.81%(5/21)和47.61%(10/21);这些RA菌株均携带asrpdp(Riean_0487)、dhdps(Riean_0023)、ftsQ(Riean_1039)和hthdp(Riean_0339)4个基因;而大部分生物被膜形成能力弱的菌株和不形成生物被膜的菌株不携带aminopeptidase N(Riean_0186)和hp1(JN986833)基因。Real-time PCR结果表明,CH3株在24孔板中培养至生物被膜形成初期(10 h)比同时在玻璃试管中静置培养时,细菌的aminopeptidase N、hthdp和dhdps基因mRNA转录水平分别升高62.1%、102.3%和62.5%。本研究为进一步解析RA生物被膜形成的分子机制等奠定基础。

抗生育活性天然产物研究进展

天然产物是生物活性物质的重要来源,能为新药研究提供先导化合物。近年来从天然产物中寻找具有高效、选择性好的抗生育活性物质是计划生育药物研究的热点之一。本文就天然产物中的萜类、生物碱类、黄酮类化合物抗生育活性研究做一综述。

高职产教研融合培养畜牧兽医人才

＂产教研融合＂是一种将教师教学与生产研发相结合,学生学习与实践相结合,企业全过程参与学校教学活动的人才培养模式。近年来,学院基于现代职教理念,创新提出将＂研＂的要素融入高职教育＂工学结合＂系统培养技术技能人才的新思路,把科研融入人才培养全过程,总结形成了高职＂产教研融合＂培养现代畜牧业技术技能人才体系,拓展了人才培养质量提升的新途径。

鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞粘附入侵能力的研究

为了分析鸭胚肝细胞用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵实验的可行性,本研究比较了鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附和入侵能力。首先将构建的互补质粒pRES1-ompA通过双亲本接合转导的方法导入ompA基因缺失株Th4ΔompA中,构建得到缺失株的回复菌株cTh4ΔompA;然后比较了野生株Th4、缺失株Th4ΔompA及回复株cTh4ΔompA菌株对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力。结果表明,与野生株Th4菌株相比,缺失株Th4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附能力分别降低了3.32倍和3.12倍,入侵能力分别降低了2.25倍和7.58倍,而cTh4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力均得到部分回复。本研究结果表明鸭胚肝细胞可用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵能力的分析。

老年2型糖尿病患者骨质疏松与冠状动脉钙化的关系

目的探析2型糖尿病老年患者骨质疏松与冠状动脉钙化的关系。方法入选我院2型糖尿病老年患者92例,根据X线双能骨密度检查分为两组,观察组为骨质疏松组,对照组为非骨质疏松组,分别进行冠状动脉双源CT检查,计算冠状动脉总钙化积分(TCS),同时检测甲状旁腺素(PTH)、血磷(P)、钙(Ca)水平。结果观察组与对照组的PTH、P、Ca检测水平结果差异具有统计学意义(P<0.05),糖尿病患者TCS与L2、L3、L4、股骨颈骨密度呈负相关,与Ca、PTH呈正相关(P<0.05)。结论 2型糖尿病老年患者骨质疏松与冠状动脉钙化存在一定的相关性,PTH水平代偿性升高、TCS及钙磷代谢异常可作为冠状动脉钙化与骨质疏松关系的参考指标。

尿蛋白指标联合检测在高血压肾病早期诊断中的价值

目的探讨不同时期的高血压患者尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2微球蛋白(β2-MG),尿微量白蛋白(mALb)含量的改变对肾脏早期损伤的诊断价值。方法选取2012年1月—2013年10月就诊于本院的高血压患者200例为高血压组,测定其β2-MG、NAG、mALb、尿肌酐等指标。另设立健康对照组57例。结果高血压组尿NAG、β2-MG、mALb水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),NAG+β2-MG+mALb三项联合检测的阳性率高于二项联合检测的阳性率以及单项检测的阳性率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尿NAG、β2-MG和mALb是诊断肾脏早期损伤的灵敏指标,联合检测可显著提高阳性检出率,对及时准确地诊断高血压早期肾损害有非常重要的临床应用价值。

维生素D缺乏与2型糖尿病合并冠心病相关性研究

目的:研究血清维生素D与2型糖尿病合并冠心病的关系。方法:选择2012年1月至2013年3月在我院住院的患者,取数据完整的140人进入本研究,根据诊断标准分为2型糖尿病组和2型糖尿病合并冠心病组,比较血糖、血脂、血压、血清维生素D等指标在两组间的差异。结果:2型糖尿病合并冠心病组的年龄、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2hPG)均高于2型糖尿病组的(<0.05),而血清25(OH)D3、按HOMA模型估计的β细胞功能指数(HOMA-IS)均低于2型糖尿病组(<0.05),体质指数(BMI)、腰围(WC)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)在两组间的差异均无统计学意义(>0.05)。结论:2型糖尿病合并冠心病患者体内血清维生素D水平明显低于2型糖尿病患者,提示可通过补充维生素D降低糖尿病患者心血管疾病的发病率。

利拉鲁肽对超重和肥胖2型糖尿病患者的心血管保护

目的:探讨胰升糖素样肽-l(GLP-1)类似物(利拉鲁肽)对超重和肥胖2型糖尿病患者的疗效以及对心血管的保护作用。方法:选取2012年6月1日至2013年6月1日住院的体质指数(BMI)>25kg/m2的2型糖尿病患者55例,给予利拉鲁肽联合二甲双胍治疗,于用药前、用药24周后分别测定患者的空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、体重、腰围(WC)、血压、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肝功能、肾功能、C反应蛋白(CRP)、24h尿微量白蛋白(UMA)、颈动脉内膜中层厚度(IMT),记录用药期间低血糖发生情况和其他不良反应。结果:研究对象入组后应用利拉鲁肽和二甲双胍治疗24周后FPG、2hPG、HbAlc、体重、WC、BMI、收缩压(SBP)、TG、LDL-C、IMT平均厚度均明显下降,并有统计学意义(P<0.05),而舒张压(DBP)、TC、CRP、UMA均降低,HDL-C升高,但两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:利拉鲁肽在平稳降糖的同时,还可以减轻体重、降压、调脂、抗炎,通过多种机制来保护心脏。

糖尿病及其高危人群血清维生素D的现况调查

目的探讨糖尿病及其高危人群血清维生素D的现况及相关因素。方法对水磨沟区居民进行整群抽样调查,筛选出糖尿病高危人群及糖尿病患者,检测其血糖、胰岛素、血清25(OH)D3,选取数据完整的555例。分别根据年龄、性别、族别分组,比较各调查指标的变化。并对影响维生素D浓度的危险因素行非条件Logistic回归分析。结果血清25(OH)D3水平为38.0～110.7nmol/L;青壮年和中老年、男性和女性、维吾尔族和汉族血清25(OH)D3差异均无统计学意义;非条件Logistic回归分析提示,不吃动物肝脏、不穿短袖、不喝牛奶为导致维生素D不足的危险因素,胰岛素抵抗为避免维生素D不足的保护因素。结论该糖尿病及其高危人群中维生素D不足的情况较严重,年龄、性别、民族对血清维生素D水平均无明显影响;经常进食动物肝脏、每天喝牛奶、夏天穿短袖可提高血清维生素D的含量,胰岛素抵抗为避免维生素D不足的保护因素。

鸡滑液支原体磷酸甘油酸激酶的克隆表达及酶学活性测定

磷酸甘油酸激酶(PGK)是生物进行糖酵解的关键酶,目前未见关于鸡滑液支原体(MS)PGK的相关研究报道。本实验采用Overlap PCR方法对MS的pgk基因进行点突变扩增,然后连接至pET-28a(+)表达载体并在大肠杆菌BL21中表达,纯化获得重组MSPGK(rMSPGK)蛋白,然后对纯化后的rMSPGK蛋白的酶学活性进行测定,包括温度、pH及不同底物对酶活的影响,并计算其酶比活力、米氏常数及最大反应速率。结果显示:最终获得了纯化的rMSPGK蛋白,其相对分子质量约为45 kDa;酶学活性测定显示,rMSPGK蛋白的酶比活力为100.70 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5;双倒数法求得rMSPGK蛋白相对于3-PGA的最大反应速率Vmax为370.37μmol/(L?min),米氏常数Km值为3.88 mmol/L;相对于ATP的最大反应速率Vmax为357.14μmol/(L?min),Km值为0.25 mmol/L。综上,本实验成功地表达了MS的PGK蛋白,并获得了酶活力较高的rMSPGK蛋白,为进一步研究鸡滑液支原体代谢和致病机制奠定了基础。

双组分系统CpxR影响禽致病性大肠杆菌的耐药性、抗血清杀菌能力及毒力

CpxR是细菌中Cpx双组分系统(two component system, TCS)的反应调控蛋白,通过调控靶基因的转录表达,在细菌细胞膜稳定及毒力方面发挥作用。本研究旨在探究TCS CpxR对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)基本生物学特性、抗血清杀菌能力及致病性的影响。利用Red同源重组系统及互补质粒构建cpxR基因缺失株、互补株,然后比较分析野生株、基因缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、药物敏感性、抗血清杀菌能力、动物致病性的差异。结果显示:cpxR基因缺失株与野生株、互补株的生长速度和运动性能无明显差异,且缺失cpxR基因不影响APEC的生物被膜形成能力。然而,缺失CpxR导致APEC对阿米卡星和卡那霉素耐药性降低。血清杀菌试验结果显示,CpxR有助于APEC的抗血清杀菌能力。动物感染试验结果显示,野生株、cpxR基因缺失株和互补株对雏鸭的半数致死量(LD_(50))分别为7.50×10^(5)、7.50×10^(6)、1.33×10^(6) CFU,表明CpxR缺失显著降低APEC的毒力。综上表明,TCS CpxR在APEC耐药性、抗血清杀菌能力及毒力方面发挥作用,为阐明APEC的环境适应性、生存能力及致病机制提供参考。

血清肿瘤标志物联合检测在胆囊癌诊断中的临床意义

目的研究血清糖类抗原CA19-9、癌胚抗原(CEA)在胆囊癌诊断中的价值,以筛选适合的血清肿瘤标志物组合,用于提高胆囊癌诊断的准确率。方法对136例体检健康者、131例胆囊良性疾病患者、100例胆囊癌患者进行CA19-9、CEA检测,分析单个肿瘤标志物和两种肿瘤标志物联合检测的差异。结果健康对照组和胆囊良性疾病组CA19-9、CEA水平均低于胆囊癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。健康对照组和胆囊良性疾病组CA19-9、CEA测定阳性率均低于胆囊癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测阳性率为64.0%,高于任一单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CA19-9、CEA在胆囊癌诊断中具有较高的价值,联合检测优于单项检测,对胆囊癌诊断具有重要的临床意义。

鸭疫里默氏杆菌耐药机制研究进展

鸭疫里默氏杆菌作为影响我国乃至世界家鸭养殖业的重要细菌性病原体之一,因抗生素长期使用等多个因素使耐药菌株的检出率逐年上升。其耐药机制主要包括外排泵的外排,细胞膜通透性的改变,基因突变、灭活酶或钝化酶的产生、修饰酶的产生等。本文依据近年来国内外学者研究报道,就鸭疫里默氏杆菌如何对抗菌药物产生耐药性进行总结论述。