慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察大鼠脊髓损伤后皮层体感运动区Cdh1mRNA的表达变化,探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对脊髓损伤修复的作用.方法:15只雄性SD大鼠随机分成对照组和手术组,手术组采用Allen氏法建立脊髓打击损伤模型(T10～T11).荧光定量PCR检测脊髓损伤后大鼠体感运动皮层区Cdh1mRNA表达变化.30只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,建模1wk时分别注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒.术后每周进行BBB评分,荧光定量PCR检测注射10d后Cdh1mRNA的表达,损伤后6wk同法注射BDA-TR,8wk取脊髓冰冻切片.结果:手术组的Cdh1mRNA表达高于对照组(P<0.05),注射药物10d后C组Cdh1mRNA表达低于A组及B组(P<0.05).损伤6wk后C组运动功能评分均高于另两组(P<0.05),且在脊髓空洞区可见更多神经纤维通过.结论:APC-Cdh1在抑制轴突生长方面可能起着重要的作用.

大鼠脊髓部分横切损伤后APC-Cdh1在损伤脊髓组织中的表达

目的观察大鼠脊髓部分横切损伤后损伤脊髓组织中APC-Cdh1 mRNA的表达变化,探讨APC-Cdh1在脊髓损伤修复中的作用。方法建立成年SD大鼠脊髓部分横切模型(T_(10)～T_(11)),将40只成年雄性SD大鼠随机分成对照组和模型组,于损伤后不同时间点按实验性脊髓损伤神经功能综合评分标准进行CBS评估,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织APC-Cdh1 mRNA的表达,并用免疫组化染色检测Cdh1表达的部位。结果对照组和模型组术后不同时间点CBS评分差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,术后第1天Cdh1 mRNA表达减少(P<0.05),术后第7天显著升高(P<0.05),术后第14天又降低(P<().05)。免疫组化检测结果显示在脊髓前角和后角中有大量APC-Cdh1表达。结论 APC-Cdh1在损伤脊髓组织中大量表达,表明其可能参与脊髓损伤修复的病理生理过程。

大鼠全脑缺血再灌注损伤后SnoN mRNA的表达

在中枢神经系统中轴突的生长为神经元之间的连接奠定了最根本的作用,目前研究发现中枢神经系统损伤后轴突是可以再生的,但是再生能力是有限的。近年来研究发现细胞周期后期分裂促进复合物（anaphase promoting complex,APC）与其调节亚基Cdh1在哺乳动物大脑皮质、海马、小脑等部位的终分化神经元的核内有大量的表达,且具有抑制神经元轴突生长及发育的作用[1];

原代缺氧缺糖损伤神经元模型Cdh1及其下游底物的表达

背景:课题组前期实验已证实Cdh1在大鼠海马、皮质均有大量表达,且体外实验发现神经元中Cdh1表达高于神经干细胞,可能与神经干细胞向神经元分化有关。但细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1在缺血性神经元损伤中的作用,尚不明确。目的:体外构建原代缺氧缺糖损伤神经元模型,观察Cdh1及其下游底物表达变化。方法:取出生24 h内乳鼠大脑皮质,体外培养原代神经元并通过免疫荧光染色进行鉴定。使用无糖Earle’s液替代细胞培养液,利用三气培养箱充以氮气建立原代神经元缺氧缺糖模型,缺氧处理1 h后复氧。于缺氧前、缺氧缺糖损伤后6 h、1 d,3 d,7 d采用实时荧光定量PCR检测神经元Cdh1及其下游底物Skp2、Cyclin B1的表达。结果与结论:体外缺氧缺糖损伤后,原代神经元Cdh1及其下游底物Cyclin B1表达上调(P<0.05),Skp2表达均下调(P<0.05)。提示,体外缺氧缺糖损伤后神经元Cdh1表达升高,可能通过泛素化降解Skp2参与缺氧性神经元凋亡等病理过程。

大鼠局灶性脑缺血后Cdh1 mRNA水平及Cdh1蛋白分布的改变

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血损伤后Cdh1 mRNA水平的变化及其在不同类型神经细胞中的分布变化。方法:雄性成年SD大鼠30只,线栓法建立右侧大脑中动脉缺血模型,分别于缺血前和缺血再灌注后1、3、7d采用实时荧光定量PCR技术检测缺血侧和非缺血侧脑组织中Cdh1 mRNA的水平;缺血再灌注后7d免疫荧光双标法检测Cdh1在神经元和星形胶质细胞中的分布情况。结果:脑缺血前,两侧脑组织中Cdh1 mRNA的水平差异无统计学意义。缺血再灌注后1、3、7d,缺血侧脑组织Cdh1 mRNA水平均低于非缺血侧脑组织(P<0.05);缺血再灌注后7d,与非缺血侧相比,缺血侧神经元明显减少,星形胶质细胞增多;在非缺血侧Cdh1主要表达于神经元,星形胶质细胞中表达较少,在缺血侧Cdh1在神经元及激活的星形胶质细胞中均有表达。结论:大鼠局灶性脑缺血损伤后,缺血侧Cdh1 mRNA的水平较非缺血侧降低,且Cdh1在神经元和星形胶质细胞中分布情况发生变化。

大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组)。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降(P<0.01);TUNEL法检测显示:与假手术组相比,凋亡指数显著增加(P<0.01)。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。

大鼠全脑缺血-再灌注损伤后APC-Cdh1蛋白的表达

目的探讨大鼠全脑缺血-再灌注损伤后APC-Cdh1蛋白的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,体重280～350g,随机分成假手术组和缺血-再灌注组。采用改良Pulsinelli4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在损伤后不同时间点,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位并且采用Western blotting检测大鼠海马组织APC-Cdh1蛋白的表达。结果免疫组化检测显示APC-Cdh1在海马区及皮层区中均有大量表达。与假手术组相比,缺血-再灌注组术后第1天APC-Cdh1蛋白表达减少,术后第3天升高(P<0.05),术后第7天又降低。结论APC-Cdh1可能与中枢神经系统损伤有着密切的关系。

大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1mRNA的表达变化

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,体重280～350g,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组)。采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在损伤后不同时间点,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位并且采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马组织APC-Cdh1的表达。结果与对照组相比,术后1dCdh1mRNA表达减少,术后3d显著升高,术后7d又降低。免疫组化检测显示APC-Cdh1在海马区及皮质区中均有大量表达。结论 APC-Cdh1可能与中枢神经系统的发育及损伤有着密切的关系。

慢病毒介导的Cdh1-siRNA在大鼠全脑缺血再灌注损伤后的表达及功能

目的:探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对全脑缺血再灌注损伤的影响。方法:将150只雄性SD大鼠随机分成生理盐水组(A组)、空慢病毒组(B组)和重组慢病毒组(C组)各50只。分别给予3组大鼠注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒,注射3d后采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,采用荧光定量PCR检测大鼠海马组织Cdh1mRNA表达,Western blot检测Cyclin B的变化,TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞指数(AI)。于全脑缺血再灌注术后第7天行Morris水迷宫测试认知功能的变化。结果:C组Cdh1mRNA表达明显低于A、B组(P<0.05);AI值及Cyclin B表达均明显高于A、B组(P<0.05);水迷宫测试结果显示,术后第9～11天各时间点C组的寻台潜伏期明显长于A、B组(P<0.05)。结论:细胞周期末期分裂促进复合物及其调节亚基Cdh1可能通过Cyclin B堆积介导缺血性神经元的凋亡。

大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞体外机械拉伸损伤模型的建立与评价

目的采用FX-4000TTM柔性基底加载系统建立体外大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞机械拉伸损伤模型,为进一步探讨少突胶质前体细胞在脊髓损伤及修复过程中的作用及机制提供模型基础。方法采用振摇法体外纯化培养大鼠脊髓少突胶质前体细胞,并进行免疫荧光细胞鉴定。将纯化培养3 d的少突胶质前体细胞随机分为A组(对照组)、B组(拉伸强度5%)、C组(拉伸强度10%)、D组(拉伸强度15%)。采用FX-4000TTM柔性基底加载系统机械拉伸少突胶质前体细胞2 h后,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学改变、MTT法检测细胞存活率、双染流式细胞术检测细胞凋亡,对损伤模型进行评价。结果体外成功培育少突胶质前体细胞且纯度>90%。B组拉伸强度对细胞形态及存活没有明显影响,基本不构成损伤。C组和D组细胞存活率较A组显著降低(P<0.05),凋亡率也明显升高(P<0.05),并出现明显病理性形态改变;但D组有明显的细胞脱落现象且细胞存活率降到<50%,不利于后续实验进行。结论采用FX-4000TTM柔性基底加载系统以10%为拉伸强度可建立有效的少突胶质前体细胞机械拉伸损伤模型。

床旁肺部超声对胃肠癌根治术患者术后肺部并发症的预测价值

目的:评价床旁肺部超声对胃肠癌根治术患者术后肺部并发症(PPCs)的预测价值。方法:选取择期全身麻醉下行胃肠癌根治术患者108例,性别不限,年龄>18岁。于术前(T_(1))、术后2、4和7 d(T_(2-4))时行肺部超声检查,记录肺部超声评分(LUS)、B线评分,测定血清降钙素原(PCT)浓度,并行血常规检查,计算全身免疫炎症指数(SII)。于术前、术后7 d内行胸部CT检查,以胸部CT及临床诊断结果为诊断PPCs的金标准。记录术后7 d内PPCs的发生情况。根据患者是否发生PPCs分为PPCs组和非PPCs组。采用Spearman相关分析评价B线评分、LUS与PPCs、SII、血清PCT浓度的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价LUS预测PPCs的准确性。结果:最终纳103例患者,PPCs组45例,非PPCs组58例,PPCs发生率为43.7%。T_(1)时B线评分、LUS与PPCs呈正相关(P<0.001),T_(2-4)时B线评分、LUS均与PCT、SII呈正相关(P<0.001)。术前B线评分、LUB预测PPCs的曲线下面积(95%可信区间)分别为0.926(0.879~0.972)、0.909(0.852~0.965)(P<0.001),最佳截断值分别为25.5、11.5分,灵敏度和特异度分别为0.80和0.88、0.78和0.93。结论:术前床旁肺部超声(B线评分和LUS)检查可准确预测胃肠癌根治术后患者PPCs的发生,并可动态评估PPCs病情,B线评分>25.5分、LUS>11.5分提示PPCs的发生风险高。

气道超声参数预测肥胖患者困难面罩通气的准确性

目的评价气道超声参数预测肥胖患者困难面罩通气(DMV)的准确性。方法选择气管插管全麻下择期手术患者96例,年龄>18岁,性别不限,BMI 28~<40 kg/m^(2),ASA分级Ⅰ或Ⅱ级。术前1 d进行临床气道评估,记录甲颏距离、改良Mallampati分级、咬上唇试验分级。麻醉诱导前采用超声测量髁状突活动度、舌纵截面积及舌横径,计算舌体积。麻醉诱导后面罩通气,记录面罩通气困难分级,以面罩通气困难分级Ⅲ和Ⅳ级为DMV标准,将患者分为非DMV组(NDMV组)和DMV组。采用Spearman相关分析各指标与DMV的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)曲线评价各指标预测DMV的准确性,根据约登指数最大原则确定截断值。结果最终纳入96例患者,其中NDMV组64例,DMV组32例。与NDMV组比较,DMV组年龄增大,改良Mallampati分级、咬上唇试验分级、舌纵截面积、舌横径、舌体积升高,甲颏距离、髁状突活动度降低(P<0.05)。年龄(r=0.283)、改良Mallampati分级(r=0.668)、咬上唇试验(r=0.826)、舌纵截面积(r=0.598)、舌横径(r=0.578)、舌体积(r=0.707)与DMV呈正相关(P<0.01),甲颏距离(r=-0.623)、髁状突活动度(r=-0.666)与DMV呈负相关(P<0.05)。舌纵截面积、舌横径、舌体积、髁状突活动度预测DMV的AUC(95%CI)分别为0.870(0.780~0.961)、0.858(0.768~0.948)、0.937(0.864~1.000)、0.912(0.835~0.990)(P<0.01),其预测截断值分别为22.61 cm^(2)、4.29 cm、100.60 cm^(3)、1.18 cm,灵敏度和特异度分别为90%和80%、83%和80%、90%和95%、90%和95%。结论超声测量的舌体积、髁状突活动度预测肥胖患者DMV的准确性高,舌体积>100.60 cm^(3)或髁状突活动度<1.18 cm提示患者发生DMV的风险较高。

异丙酚对大鼠肝缺血再灌注损伤时HMGB-1/TLR4信号通路的影响

目的评价异丙酚对大鼠肝缺血再灌注损伤时高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响.方法清洁级健康雄性SD大鼠36只,3月龄,体重250~300 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚组(P组).采用夹闭肝门左叶、中叶肝动脉、门静脉lh,再灌注6h的方法制备大鼠肝缺血再灌注损伤模型.P组于缺血前20 min时经尾静脉泵注异丙酚12mg·kg^-1·h^-1至再灌注6h.于再灌注6h时处死大鼠取肝左叶组织,观察病理学结果并行肝组织病理学损伤评分,采用Western blot法检测HMGB1、TLR4、TNF-α和IL-6的表达.结果与S组比较,I/R组和P组肝组织病理学损伤评分升高,HMGB1、TLR4、TNF-α和IL-6表达上调(P<0.05);与I/R组比较,P组肝组织病理学损伤评分降低,HMGB1、TLR4、TNF-α和IL-6表达下调(P<0.05).结论异丙酚减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制与阻断HMGB-1/TLR4信号通路,抑制炎性反应有关.

七氟醚后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时自噬的影响

目的评价七氟醚后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时自噬的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠45只,体重280~350g,采用随机数字表法分为3组(n=15):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚后处理组(SP组)。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。SP组再灌注即刻吸入2.4%七氟醚30min。于再灌注2h时随机取5只大鼠处死取大脑皮质,采用Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达;取大鼠脑皮质制作标本,于电镜下观察自噬小体形态与数目;再灌注24h时行神经功能缺陷评分;再灌注72h时断头取脑,TTC染色测定脑梗死体积。结果与S组比较,I/R组和SP组大鼠神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积百分比增加,脑皮质LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,Beclin-1表达上调,自噬小体数增加(P<0.05);与I/R组比较,SP组大鼠神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积百分比减少,脑皮质LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,Beclin-1表达下调,自噬小体数减少(P<0.05)。结论七氟醚后处理可通过抑制自噬减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。