黄芪甲苷对阿霉素诱导的HL-1细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的探讨黄芪甲苷(astragaloside IV,ASIV)对阿霉素诱导HL-1细胞凋亡的影响及机制,为进一步研发治疗阿霉素诱导心肌损伤的新药提供可靠的实验依据。方法将HL-1心肌细胞分为正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、1μmol/L ASIV、2μmol/L ASIV及4μmol/L ASIV组等5组。用5.2μmol/L的DOX溶液放入细胞培养箱中培养12 h制备心肌细胞损伤模型后,以1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L的ASIV溶液加入细胞损伤模型中,再放入细胞培养箱中培养12 h。CCK8法确定阿霉素造模药物浓度,流式细胞术确定浓度阿霉素造模时间,荧光染色法检测不同浓度ASIV对阿霉素诱导的HL-1心肌细胞凋亡、线粒体膜电位水平及ROS水平;分光光度检测法检测ASIV对阿霉素诱导的HL-1心肌细胞上清NO含量。结果5.2μmol/L的DOX培养12 h诱导HL-1心肌细胞凋亡模型。与Model组相比,2μmol/L和4μmol/L ASIV组细胞凋亡明显减少(P<0.01),NO含量显著增加(P<0.01);ASIV各剂量组Annexin V-FITC表达均有降低趋势(P<0.01)、ASIV 1μmol/L、ASIV 2μmol/L Mito-Tracker Red CMXRos表达均明显升高(P<0.05),ASIV 4μmol/L Mito-Tracker Red CMXRos表达均明显升高(P<0.01),ASIV 1μmol/L、ASIV 2μmol/L和ASIV 4μmol/L组ROS表达显著降低(P<0.05)。结论ASIV可通过减轻心肌细胞膜电位下降,降低ROS表达,提高NO含量,减轻氧化应激损伤,从而抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

芒柄花素通过HSP90/AKT调控扩张型心肌病心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及其机制

目的探讨芒柄花素(formononetin,FMN)对扩张型心肌病心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及HSP90/AKT的影响。方法通过超声心动图、ELISA法、组织学染色、TUNEL染色,观察不同剂量FMN对扩张型心肌病心力衰竭大鼠的保护作用及心肌细胞凋亡情况。从TCMSP、DisGeNet、GeneCards等数据库获取FMN作用于扩张型心肌病心力衰竭的潜在靶点及其交集,再根据蛋白质互作网络(PPI)获得两者交集的关键靶点,并通过分子对接和Western blotting对关键靶点进行验证。结果FMN可降低扩张型心肌病心力衰竭大鼠左心室收缩末期内径(LVIDS)、左心室舒张末期内径(LVIDD)水平及NT-pro BNP、cTn-T、CK、CK-MB和LDH含量,提高射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)水平,减少心肌细胞凋亡;FMN与网络药理学筛出的10个关键靶点(AKT1、HSP90AA1、CASP3、MAPK1、MMP9、SRC、ALB、HRAS、IGF1、EGFR)均具有较强的结合作用,以HSP90AA1、AKT1结合作用最强,同时FMN可降低心肌组织HSP90、AKT及下游CASP3蛋白表达,提高p-AKT的表达。结论FMN可能通过抑制HSP90的表达,促进AKT磷酸化,降低CASP3的表达,减少心肌细胞凋亡,改善心肌组织损伤,达到治疗扩张型心肌病心力衰竭的目的。

双酚A与肾阳虚诱导雄激素受体磷酸化对睾丸细胞凋亡影响的比较研究

目的观察不同浓度双酚A(BPA)染毒模型与氢化可的松诱导肾阳虚模型小鼠睾丸细胞凋亡及雄激素受体(AR)和雄激素受体磷酸化(p-AR)定位与表达,探讨BPA与肾阳虚导致雄性生殖生精障碍的相关性。方法选取25只SPF级6周龄雄性昆明小鼠作为研究对象。根据不同制备方式分为1mg/kg BPA模型组、10mg/kg BPA模型组、100mg/kg BPA模型组、肾阳虚组和正常对照组。采用TUNEL染色观察睾丸组织细胞凋亡,免疫组化染色、免疫荧光染色及Western blotting观察AR、p-AR定位与表达。结果随着BPA浓度升高,BPA染毒模型小鼠睾丸生精细胞凋亡明显增加,AR睾丸表达显著下降,p-AR表达显著上升(P<0.05),且100mg/kg BPA组与肾阳虚组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论100mg/(kg·d)BPA和肾阳虚可以通过抑制AR表达、激活AR磷酸化来诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡,这为进一步探讨补肾阳中药治疗BPA染毒导致的男性生精功能障碍提供了可靠的实验依据。

参丹方通过PI3K/AKT信号通路改善扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨参丹方对扩张型心肌病(DCM)模型大鼠心脏的保护作用及机制。方法用腹腔注射2.5 mg·kg^(-1)阿霉素建立DCM模型大鼠。将模型大鼠随机分为模型组和低、中、高剂量实验组,每组8只;另取8只正常大鼠作为正常组。低、中、高剂量实验组分别灌胃给予1.46、2.92、5.84 g·kg^(-1)参丹方溶液,剂量以10 mL·kg^(-1)·d^(-1)计算,正常组和模型组均灌胃给予等量0.9%NaCl。5组大鼠每日给药1次,连续给药28 d。用酶联免疫吸附试验法检测N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、肌钙蛋白T(cTn-T)和肌酸激酶(CK)的含量,用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)蛋白的表达情况。结果中、高剂量实验组和模型组、正常组的NT-proBNP水平分别为(963.40±46.67)、(903.11±82.76)、(1457.56±66.28)和(789.79±40.53)pg·mL^(-1),cTn-T水平分别为(559.68±31.05)、(521.51±19.29)、(685.53±17.16)和(452.67±30.76)pg·mL^(-1),CK水平分别为(39.23±6.85)、(34.61±8.55)、(55.79±0.61)和(27.79±1.76)ng·mL^(-1),PI3K蛋白相对表达水平分别为2.62±0.21、3.30±0.10、0.76±0.24和3.54±0.16,AKT蛋白相对表达水平分别为2.20±0.36、3.13±0.32、0.92±0.24和3.79±0.19。模型组的上述指标与中、高剂量实验组相比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论参丹方可能通过PI3K/AKT信号通路,改善DCM大鼠心肌细胞凋亡及心肌纤维化。