脑脊液双向电泳技术体系的建立

目的:建立用于脑脊液(CSF)蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找多发性硬化患者和对照组脑脊液蛋白质差异,从分子水平探讨多发性硬化患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法:分别取对照组及多发性硬化患者的脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白质后,加入适量裂解液使蛋白质充分裂解,离心后取上清液上样。进行第1向等电聚焦(IEF)电泳和第2向十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),染色脱色后,分析所得蛋白质斑点。结果:对照组和多发性硬化患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质斑点,其中2个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量增加,4个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量减少,12个蛋白质斑点为多发性硬化患者脑脊液特有。结论:对照组和多发性硬化患者脑脊液的双向电泳图谱存在明显差别,这些发现可为研究多发性硬化疾病机制提供线索。

蛋白质组学及其在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此 ,对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今 ,研究技术不断提高 ,涉及面日益广泛 ,其应用价值越来越大。本文着重从技术及应用的角度 ,追踪最新的研究进展 。

胶质瘤细胞耐药性逆转的HPLC法研究

目的 检测胶质瘤细胞中阿霉素 (ADM )的含量 ,探讨抗P 糖蛋白 (P GP)单克隆抗体对细胞耐药性的逆转效果。方法 将胶质瘤细胞分为敏感组、耐药组、耐药 +抗P GP单抗组及空白对照组 ,采用高效液相色谱 (HPLC)法测定细胞中ADM含量。色谱条件为LiChrosorbC18柱 (2 5 0mm× 4 .6mm ,10 μm) ;流动相为甲醇 乙腈 0 .0 1mol·L-1磷酸二氢胺 冰醋酸 (5 0 2 2 2 8 0 .5 ) ;流速为 1ml·min-1;激发波长为 4 95nm ,发射波长为 5 6 0nm。结果 测得细胞内ADM浓度在 0 .1～ 1.0mg·L-1范围内呈线性关系 ,相关系数为 0 .9983。ADM在各种细胞中的浓度分别为 空白对照组 (0 .4 96± 0 .0 15 )mg·L-1,敏感组 (0 .5 33± 0 .0 2 9)mg·L-1,耐药组 (0 .5 0 2± 0 .0 75 )mg·L-1,耐药 +抗P GP单抗组 (0 .5 77± 0 .0 86 )mg·L-1。结论 HPLC法是一种简便而准确地检测细胞中ADM的方法。结果表明 ,与正常对照组相比 ,耐药的胶质瘤细胞中ADM浓度降低 ,加抗P GP单抗逆转后的细胞中ADM浓度升高 ,提示抗P

气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中的乳酸

血清和脑脊液样品经甲酯化处理,氯仿提取,氮气吹干,残留物用庚烷溶解后进样,用气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中乳酸含量。结果显示,线粒体脑肌病患者的血清、脑脊液中乳酸含量分别为(294±101)mg/L和(312±103)mg/L,比正常人((192±37)mg/L和(153±81)mg/L)以及神经系统其他疾病患者((150±34)mg/L和(173±29)mg/L)显著增高(P<0.05)。该方法可作为筛选线粒体脑肌病的临床诊断方法。

大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究

目的 :研究大鼠脑组织中单胺类递质及其代谢产物的高效液相反相离子对色谱测定法。方法 :采用LiChrosorbC18,10 μm色谱柱 ,流动相为甲醇 :水 (4 0 :60 ) ,含 0 .0 2 8g LEDTANa2 ,0 .15g LSDS ,0 .2ml LH2 SO4(pH 2 .5～ 3 ) ,荧光检测波长 :λEX=2 85 ,λEM=3 3 3。结果 :对 87只大鼠脑组织中 4种单胺类递质及其代谢产物的含量进行了同时测定 ,高香草酸 (HVA) 2 .5 0～ 40 .0 μg ml、去甲肾上腺素 (NE) 0 .0 1～ 0 .5 0 μg ml、多巴胺 (DA)0 .0 5～ 1.0 0 μg ml、5 羟色胺 (5 HT) 0 .0 2 5～ 0 .5 0 μg ml,峰面积与其含量呈良好的线性关系。 结论 :该法操作简便、快速、准确 ,为组织中单胺类递质及其代谢产物检测的一种理想方法 ,并适用于临床相关研究。