巨噬细胞RAW264.7的培养及电转染条件的优化

为了建立最优的巨噬细胞RAW264.7培养方法和电转染条件,在细胞培养时采用两种方法了解细胞的培养特性并进行电转染条件的优化,建立并验证RAW264.7细胞快速、无血清培养体系的电转染方法。以绿色荧光蛋白（GFP）为报告基因,进一步优化巨噬细胞电穿孔的条件。通过控制电压（250~420 V）、脉冲时间、电击次数、温度、电击缓冲液等转染条件,采用不同的条件组合,用电穿孔法将质粒pEGFP-C1转染于培养的RAW 264.7细胞。通过荧光显微镜分析转染效率,可见：用胰酶和细胞刮刀消化RAW264.7细胞,细胞损伤小,形态好。利用优化的电转染条件得出最佳转染条件是：电压350 V、脉冲时间30 ms、电击1次、电击缓冲液成分为cell盐和options且V（cell盐）∶V（options）=3∶1、最佳温度4℃。