医学免疫学课程思政的实证研究

立德树人、培养有灵魂的卓越医学创新人才是医教协同背景下医学教育改革的重要推力:医学免疫学作为临床医学专业主干学科承担着重要的育人功能。本文以医学免疫学基础教学为例,探讨课程思政协同育人体系的构建,将思政教学的专业属性和专业教学的思政属性有机融合,以有生命力的思政融入培养学生思维张力,提升课程思政协同育人效果,实现思想和价值引领,旨在推进医学课程思政中的专业传授与德育引导的内在统一。

干扰素-α介导系统性红斑狼疮外周血CD56dimCD57+自然杀伤细胞功能的损伤

目的:探究干扰素-α(interferon-α,IFN-α)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD56^(dim)CD57^(+)自然杀伤(natural killer,NK)细胞凋亡和杀伤功能的调控作用及具体机制。方法:选取大连医科大学附属第二医院就诊的64例初治SLE患者和16例健康人(healthy control,HC)为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NK细胞杀伤功能相关分子的基因表达水平;将CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞与K562细胞共培养后,采用膜联蛋白和7氨基放线菌素标记凋亡的K562细胞;用浓度分别为20、40、80μmol/L的过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)处理外周血单个核细胞,并以不使用H2O2处理作为对照组,采用流式细胞术检测穿孔素(per-forin,PRF)表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定血清中IFN-α的浓度;采用流式细胞术检测CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞表面IFN-α受体(interferon-αreceptor,IFNAR)表达水平,并用平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)表示;用浓度为1000 U/mL的IFN-α处理CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞24、48、72 h,并以不使用IFN-α处理作为对照组,采用流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)表达水平,并用MFI表示。结果:与HC(n=3)相比,SLE患者(n=3)外周血总NK细胞的PRF1基因表达水平降低(1.24±0.41 vs.0.57±0.12,P=0.05)。与HC(n=5)相比,SLE患者(n=5)外周血CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞杀伤K562细胞的能力明显下降(58.61%±10.60%vs.36.74%±6.27%,P<0.01)。与对照组(n=5,97.51%±1.67%)相比,不同浓度的H2O2处理可显著下调CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞的PRF表达水平且呈剂量依赖性,浓度为20μmol/L的H2O2组PRF为83.23%±8.48%(n=5,P<0.05),浓度为40μmol/L的H2O2组PRF为79.53%±8.56%(n=5,P<0.01),浓度为80μmol/L的H2O2组PRF为76.67%±7.16%(n=5,P<0.01)。与HC(n=16)相比,系统性红斑狼疮疾病活动评分(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)为中高疾病活动度(SLEDAI≥10)的SLE患者(n=45)血清IFN-α水平显著增高[(55.07±50.36)ng/L vs.(328.2±276.3)ng/L,P<0.001]。同时与HC(n=6)相比,SLE患者(n=6)外周血CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞IFNAR1表达增高(MFI:292.7±91.9 vs.483.2±160.3,P<0.05),与HC(n=6)相比,SLE患者(n=7)外周血CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞IFNAR2表达增高(MFI:643.5±113.7 vs.919.0±246.9,P<0.05)。与对照组(n=6)相比,IFN-α刺激(n=6)可显著促进CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞凋亡(20.48%±7.01%vs.37.82%±5.84%,P<0.05)。同时,与对照组(n=4,MFI:1049±174.5)相比,不同时间下用IFN-α刺激CD56^(dim)CD57^(+)NK细胞可显著促进mtROS的产生,且呈时间依赖性,48 h的MFI为3437±1472(n=4,P<0.05),72 h的MFI为6495±1089(n=4,P<0.0001),而刺激24 h时差异无统计学意义。结论:SLE患者血清中高水平的IFN-α可能通过促进mtROS产生诱导细胞凋亡并抑制PRF表达,下调CD56^(dim)CD57^(+)NK杀伤功能。

医学免疫学课程思政教育元素的挖掘及教学实践

课程思政教育是高等学校教学过程的重要组成部分,是实现立德树人教育目标的重要环节。如何将思政教育巧妙自然地融入医学专业课的授课过程,寓思想政治引导于知识传授和能力培养之中,帮助学生塑造正确的世界观、人生观、价值观、职业观,是高等医学院校专业课教师的研究课题。本文归纳了蕴含在医学免疫学中的代表性思政教育元素,通过设计不同的思政教育思路,尝试以符合课程特点的方式,在授课过程中融入思政元素。通过问卷调查,有大约50%的同学对课程思政教育持肯定态度,达到了预期的思政教育目标。

系统性红斑狼疮合并动脉粥样硬化的小鼠模型建立和评价

目的动脉粥样硬化(AS)相关心血管病变是系统性红斑狼疮(SLE)患者最主要的致病和死亡因素,但是其具体机制不明。本研究旨在建立SLE合并AS的小鼠模型并进行评估,为研究SLE合并AS的机制和治疗奠定基础。方法将SLE模型(Fasl^(-/-))和动脉粥样硬化模型(apoE^(-/-))小鼠进行杂交纯化;采用PCR方法鉴定小鼠的基因型;检测小鼠血清中肾功能和血脂等生化指标;分析肾脏和心脏等病理改变。结果 PCR结果显示SLE和AS杂合小鼠为Fasl和apo E基因纯合突变;小鼠血清肌酐增高,血清中出现抗ds-DNA抗体。血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白增加,高密度脂蛋白降低;小鼠肾脏出现狼疮性肾炎病理改变,心脏有明显动脉粥样斑块沉积。结论 SLE和AS模型小鼠杂合纯化的小鼠,同时表现出SLE和AS样病变,成功建立了SLE合并AS的小鼠模型,为后续研究奠定了基础。

颌下腺注射间充质干细胞治疗干燥综合征的机制研究

目的探索干燥综合征小鼠颌下腺局部注射间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)后的疗效和机制,为临床应用间充质干细胞治疗干燥综合征提供依据。方法选取公认的非肥胖性糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠作为干燥综合征模型,颌下腺部位注射5×10~5MSCs,1个月后,检测小鼠唾液流量,观察颌下腺淋巴细胞浸润情况,采用流式细胞术和TUNEL法检测颌下腺细胞凋亡。结果与对照组相比,颌下腺注射MSCs组小鼠唾液流量明显增加,颌下腺浸润淋巴细胞明显减少,颌下腺细胞凋亡明显减少。结论颌下腺局部注射MSCs可以治疗干燥综合征,其机制在于抑制颌下腺细胞凋亡和减少淋巴细胞浸润,为临床应用MSCs治疗干燥综合征提供了依据。

线上线下混合教学模式下免疫学教学探索与反思

在“互联网+”的时代背景下,强力推进了线上教学模式的全面普及。但由于目前线上教学体系仍不完善,一味推崇线上教学模式,可能不利于高校教学的顺利进行。因此,采用渐进式线上线下混合教学模式,稳步推进教学改革,才能使互联网为现代高等教育锦上添花。文章通过分析线上线下混合教学模式在医学免疫学教学中的实践应用,反思教学过程中遇到的实际问题,以探索更完善的保障教学质量的教学模式。

髓源抑制性细胞通过抑制Th2细胞反应参与干燥综合征的实验研究

目的干燥综合征(SS)患者和模型小鼠均存在髓源抑制性细胞(MDSCs)数量增加和功能改变,但是MDSCs参与SS的具体机制不明。文章观察SS小鼠接受MDSCs过继移植和清除MDSCs后颌下腺病理结构和功能以及唾液流量的变化,探索MDSCs作用机制。方法 4周龄NOD小鼠(未出现SS样症状)脾MDSCs,制成单细胞悬液。将小鼠分为PBS组(注射等量的PBS)和MDSCs组(移植MDSCs 1×10~6个/鼠),每组5只。将10周龄NOD小鼠分为anti-Gr1组(腹腔注射anti-Gr1抗体)和Rat IgG2b组(注射等量Rat IgG2b同型对照抗体),每组5只。分别检测各组小鼠唾液流量,并比较颌下腺淋巴细胞浸润情况;采用流式细胞术检测小鼠MDSCs和Th2细胞数量。结果与PBS组比较,MDSCs移植组小鼠外周血和脾脏Th2细胞比例及唾液流量明显降低[(0.67±0.13)%vs (0.16±0.07)%,(0.80±0.13)%vs (0.37±0.04)%,(78.70±6.80)μL vs(33.85±11.25)μL)],差异有统计学意义(P<0.05)。与PBS组比较,MDSCs移植组小鼠外周血和脾MDSCs细胞数目显著增加[(1.54±0.14 vs 5.47±1.54)×10~5,(1.09±0.23 vs 4.50±1.04)×10~5)],差异有统计学意义(P<0.05)。与Rat IgG2b组相比,anti-Gr1组外周血和脾Th2细胞比例及唾液流量明显增加[(0.55±0.09)%vs (0.92±0.10)%,(0.63±0.08)%vs (1.10±0.06)%,(56.48±14.18)μL vs (121.20±10.34)μL)],差异有统计学意义(P<0.05)。与Rat IgG2b组比较,anti-Gr1组小鼠外周血和脾MDSCs细胞数目显著降低[(1.53±0.12)×10~5个vs(0.35±0.16)×10~5个,(2.53±1.10)×10~5个vs(0.91±0.07)×10~5)个],差异有统计学意义(P<0.05)。MDSCs移植加重颌下腺淋巴细胞浸润,而anti-Gr1抗体清除小鼠体内MDSCs减轻颌下腺淋巴细胞浸润。结论 MDSCs通过抑制Th2细胞反应参与了SS的发病。抑制MDSCs进而增加其调控的Th2细胞反应,有望成为SS患者治疗的新方向。

IL-27通过调节淋巴细胞亚群参与干燥综合征

目的探讨IL-27对淋巴细胞亚群的调节作用,为阐明IL-27在干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)中的作用和机制提供依据。方法观察比较干燥综合征(non-obese diabetic,NOD)鼠与Il-27基因敲除干燥综合征(Il-27-/-NOD)鼠病情指标;留取鼠颌下腺组织切片并进行HE染色;采用流式细胞术检测2组鼠脾脏淋巴细胞亚群。结果与NOD鼠相比,Il-27-/-NOD鼠唾液流量下降,脾脏指数、颌下腺腺体数目明显减少;脾脏调节性T细胞(Treg)显著降低;滤泡辅助性T细胞(Tfh)和B细胞显著上调。结论Il-27缺失后鼠的干燥综合征症状加重,脾脏Treg下降,Tfh和B细胞增加,这些发现提示IL-27可能通过改变淋巴细胞亚群参与干燥综合征的发病。

干燥综合征小鼠中MDSCs数量及功能变化

目的通过检测干燥综合征(Sjogren’s syndrome, SS)模型小鼠中髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)数量及功能变化,旨在揭示干燥综合征发病机制,并为其临床治疗提供新依据。方法本研究选取公认的非肥胖性糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠作为干燥综合征模型,分别检测4、8、10和12周龄NOD小鼠唾液流量变化;HE染色观察NOD小鼠颌下腺淋巴细胞浸润情况;并采用流式细胞术检测不同周龄NOD小鼠MDSCs数量及功能变化。结果随着NOD小鼠干燥综合征病情的发展,其唾液流量逐渐减少,颌下腺淋巴细胞浸润灶的数量及浸润面积明显增加;外周血中MDSCs比例显著升高;与对照组小鼠相比具有SS样症状的NOD小鼠MDSCs表面的未成熟标志物表达量明显降低。结论 MDSCs数量和功能伴随SS的发展而改变。靶向MDSCs可能成为干燥综合征患者治疗的新靶点。

研究生网络科研研讨常态化的探索与实践

研究生的科研研讨在研究生的发展中占举足轻重的作用,是导师带教研究生、培养其科研能力、了解科研进度、探讨科研方向及实现思政教育的重要场所。网络课程的应用已广泛化并标准化,研究生组会的网络化也显示出其特有的应用优势。文章阐释了新形势下的研究生科研研讨的实施形式及手段和实施中应注意的问题,以期对研究生科研素养的培育以及网络科研研讨的常态化提供有益的帮助。

体外高效诱导人MDSC分化和扩增的方法探索

为探索体外稳定、高效诱导人髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)分化与扩增的实验方法,为体外研究人MDSC功能及作用机制提供新的实验技术支持,收集健康人全血后采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,贴壁法纯化单核细胞。用人GM-CSF和IL-6(各10、20、40和80 ng/mL)刺激PBMC或单核细胞4、7、14和21 d,与PBMC共培养3 d;采用FACS检测CD33^(+)MDSC、T细胞增殖和CD3^(+)IFN-γ^(+)T细胞比例。结果显示,常规方法仅诱导PBMC或单核细胞分化为较低比例的CD33^(+)MDSC;改善培养方法,用人GM-CSF和IL-6(各80 ng/mL)刺激单核细胞14 d(每4~5天换1次液),可诱导出较高比例的CD33^(+)MDSC,且CD33^(+)MDSC表现出显著抑制T细胞增殖及分泌IFN-γ的功能。该研究提示,改良后的培养方法可高效诱导人单核细胞分化成为CD33^(+)MDSC,CD33^(+)MDSC具有较强的免疫抑制功能。

系统性红斑狼疮患者血浆游离肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的变化和临床意义

目的检测SLE患者血浆游离肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)表达水平,分析其与临床指标的相关性,探讨sTRAIL的临床意义。方法实时定量PCR法检测26例SLE患者和13名健康对照者PBMCs中TRAIL、TRAIL受体1(TRAIL-R1)和TRAIL-R2的mRNA水平。独立样本t检验比较2组之间差异。ELISA检测42例SLE患者及21名健康对照者血浆sTRAIL水平,Pearson相关性分析血浆sTRAIL水平与临床及实验室指标的相关性。结果SLE血浆sTRAIL水平[(82±5)pg/ml]高于健康对照[(49±3)pg/ml],差异有统计学意义(t=4.10,P<0.01);SLE中疾病无活动[(92±14)pg/ml]、轻度活动[(80±9)pg/ml]、中度活动[(74±12)pg/ml]以及重度活动组[(83±8)pg/ml]的血浆sTRAIL水平均较健康对照组升高,差异有统计学意义(H=18.07,P<0.01),而不同疾病活动度之间的血浆sTRAIL水平差异无统计学意义;肾脏受累的SLE患者血浆sTRAIL水平较健康对照升高[(82±5)pg/ml与(49±3)pg/ml,H=18.37,P<0.01)]。SLE PBMCs中TRAIL及TRAIL-R2的mRNA水平高于健康对照组[(1.04±0.08)与(1.80±0.25),t=2.10,P<0.05;(1.07±0.12)与(2.08±0.21),t=3.27,P<0.01)]。在中高度活动组中血浆sTRAIL水平与尿蛋白定量(24 h)呈正相关(r=0.814,P<0.01)。结论血浆sTRAIL可能是SLE疾病的预测指标,提示TRAIL可能是SLE治疗的潜在新靶点。