淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP8脑线粒体的保护作用

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对快速老化小鼠SAMP8脑线粒体功能的影响。方法:将8月龄快速老化小鼠SAMP8随机分为模型组、盐酸多奈哌齐1mg/kg组、吡啦西坦200mg/kg组、ICA75mg/kg组和150mg/kg组,每组6只;8只同月龄抗快速老化小鼠SAMR1作为正常对照组。给药30d后,提取小鼠脑线粒体,测定线粒体呼吸功能、肿胀度、膜电位、活性氧(ROS)和ATP含量。结果:与SAMR1正常对照组相比,SAMP8小鼠脑线粒体呼吸功能显著降低,表现为线粒体Ⅲ态呼吸明显降低,Ⅳ态呼吸改变不明显,呼吸控制指数和磷氧比值降低(P<0.05);线粒体膜肿胀度增高,膜电位降低,线粒体内ROS含量增高,而ATP含量明显降低(P<0.05)。与SAMP8模型组相比,ICA75mg/kg和150mg/kg均可明显改善SAMP8小鼠脑线粒体结构和呼吸功能(P<0.05,P<0.01)。结论:ICA可明显改善SAMP8小鼠脑线粒体结构和功能。

重组人CLK1的真核表达及鉴定

目的:合成真核细胞CLK1(Cdc2-like kinase 1)编码基因,构建CLK1/pEGFP-N2真核表达载体并在真核细胞HEK293A中过表达,为CLK1的生物学功能研究奠定基础。方法:从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术用已知引物合成cDNA,将CLK1基因扩增后插入真核细胞表达载体pEGFP-N2,将重组质粒热转化至大肠杆菌感受态Trans 10细胞中获得重组菌株,提取质粒进行酶切鉴定及插入基因测序;将构建的重组质粒转染HEK293A细胞,用Western印迹及免疫荧光检测CLK1的表达水平,同时对其下游的磷酸化SF2/ASF蛋白进行检测。结果:构建了CLK1/pEGFP-N2真核表达载体,将其转染HEK293A细胞后24 h,CLK1蛋白表达水平最高;同时,CLK1过表达后使得下游的SF2/ASF蛋白磷酸化水平升高。结论:构建了人CLK1基因的真核细胞表达载体CLK1/pEGFP-N2,并在HEK293A细胞中过表达,其生物活性也得到了验证。本研究为外源性CLK1基因在真核细胞中过表达提供了一种途径,为CLK1的生物学功能研究奠定了基础,也可为真核细胞其他蛋白表达体系的构建提供借鉴。

9型腺相关病毒经圆窗膜转导小鼠耳蜗两种方式的对比研究

目的通过圆窗膜显微注射和完整圆窗膜途径转导小鼠内耳携带GFP的9型腺相关病毒(adeno-asso-ciated virus,AAV),比较两种方式的可行性、转染效率以及对听力的影响。方法 18只C57BL/6小鼠,随机分为圆窗膜显微注射组和完整圆窗膜途径组,术前均行听性脑干反应(auditory brain response, ABR)测听,术后两周行ABR测听后取双侧耳蜗基底膜铺片及冰冻切片观察GFP表达情况。结果两种转导方法对小鼠听力均无显著影响,圆窗膜显微注射组转染耳蜗内毛细胞GFP可见表达,转染效率由底转到顶转逐渐降低,无毛细胞损伤,经完整圆窗膜途径转染耳蜗未见GFP表达。结论 9型AAV难以通过完整圆窗膜,通过显微注射方式能够将目的基因高效转导内耳,对内毛细胞有选择特异性,且对听力影响较小,是一种安全有效的内耳转导方式。

半胱氨酸链蛋白β在内耳中的表达及其与听功能的相关性研究

目的研究半胱氨酸链蛋白β(cysteine string proteinβ,CSPβ)在巴马小香猪及出生后不同日龄的C57小鼠内耳组织中的表达,探讨其与听功能的相关性。方法应用耳蜗冰冻切片免疫荧光染色观察CSPβ在内耳中的表达分布,应用基底膜铺片观察CSPβ随生长发育的表达变化。应用ABR检测C57小鼠发育过程中的听力变化。结果采用SPSS23.0统计学软件进行各组间单因素方差分析。结果 CSPβ在成年C57小鼠的螺旋神经节以及内毛细胞中均有表达,而在外毛细胞中没有表达;出生12天之前的C57小鼠耳蜗基底膜内毛细胞中都没有CSPβ的表达,直到出生后第12d,内毛细胞中才出现CSPβ的表达,且随着小鼠日龄的增加,CSPβ的表达信号增强,而在外毛细胞中始终没有出现CSPβ的表达。与C57小鼠不同的是,出生1天的小型猪内毛细胞胞中即有CSPβ表达,但在3排外毛细胞中没有表达;ABR结果显示自小鼠出生第14d开始检测到ABR,随着日龄的增加听力越来越成熟。结论我们推测CSPβ与内毛细胞释放神经递质之间可能存在密切联系,可能是神经递质释放,信息传递以及听觉发生的前提条件之一。

2018国际耳鼻咽喉头颈外科高峰论坛第八届《中华耳科学杂志》暨第七届Journal of Otology编委会在京召开

2018年11月9-11日,由中国人民解放军总医院和《中华耳科学杂志》杂志社主办的2018国际耳鼻咽喉头颈外科高峰论坛在北京举行。10日上午8:00,大会开幕式正式开始。开幕式短片向大家展示了中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科团队历年的发展历程和取得的成就,体现了“薪火相传聚力量,乘风破浪创辉煌”的团队精神。短片结束后,大会主席杨仕明主任致辞,他对莅临本次论坛的各位领导以及国内外的专家教授表示了热烈欢迎,并表示科室的发展和取得的成绩要感谢301医院和国内外耳鼻咽喉头颈外科同道的支持,强调301耳鼻咽喉头颈外科要牢记“姓军为兵,服务人民”的宗旨,以更加团结、开放和包容的精神做好各项工作,全心全意为人民服务。

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1在心肌缺血再灌注损伤中的作用

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)是一种特殊的调控蛋白,自身不具有酶的活性,但是它通过其自身特殊的结构域或模体与其他蛋白质、脂质进行相互作用,因此具有很多非常重要的生物学功能,在癌变,凋亡等许多细胞行为中发挥着重要作用。心肌缺血再灌注损伤机制可能涉及细胞凋亡、炎性反应、钙离子超载、线粒体损伤、能量代谢障碍、氧自由基过度释放等^([1])。我们就CKIP-1参与调节心肌缺血再灌注损伤这一过程进行综述。

2016中华耳科学杂志暨Journal of Otology发展战略研讨会

2016年4月16日Journal of Otology暨中华耳科学杂志发展研讨会在北京召开,来自国内外编委200余人参加了本次研讨会。本次会议由两刊杂志社长兼总编杨仕明主持,杨仕明教授首先介绍了参会的主要嘉宾,并对各位编委的到会表示热烈欢迎。杨教授对杂志的发展做了重要讲话,他对两刊杂志创刊14年来取得的优异成绩表示祝贺，并对杂志目前存在的问题和如何加快杂志向高精尖水平发展提出了很好的建议，同时感谢全体编委对两刊杂志的支持。

临床常用中成药的体外抗流感病毒活性评价

本文旨在研究我国临床常用清热解毒中成药的体外抗病毒活性。通过应用已建立的流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)抑制剂筛选模型,评价了33种临床常用中成药的NA抑制活性,应用已建立的流感病毒诱导的细胞病变效应模型,对具有NA抑制作用的部分中成药进行了体外抗病毒活性评价。结果表明,临床常用中成药液体制剂的NA抑制活性普遍较高,包括双黄连口服液、清开灵口服液、清热解毒口服液和热毒宁注射液,其中双黄连口服液在细胞水平对于病毒感染所致细胞病变效应(CPE)也具有较高抑制活性;中成药固体制剂中,双黄连注射粉针的NA抑制活性最高,而复方鱼腥草片则显示较高的体外抗病毒活性。综合分析表明,大多数中成药具有一定的NA抑制活性,但只有部分药物具有明显的体外抗病毒活性,其活性结果对于中成药的活性物质基础研究和临床用药将具有指导意义。

茶黄素及其衍生物药理作用研究进展

目的简述茶黄素及其衍生物的来源,化学结构和合成转化,重点讨论茶黄素及其衍生物的药理作用及其主要作用机制。方法查阅近年茶黄素药理作用相关研究文献,结合本实验室近期相关工作,通过分析、归纳进行评述。结果茶黄素类具有抗心血管系统疾病、抗炎、免疫调节和抗肿瘤、抗病毒等多种药理作用。结论茶黄素类作为药用资源具有广泛的药理作用,对其作用机制的深入研究将为进一步开发奠定理论基础。

美国“脑计划”实施特点分析及启示

目前,世界主要国家开始了一场脑科技竞赛,以期在人类认识自然的“终极疆域”取得战略优先权。美国“脑计划”是一项在规模和潜在影响上与“人类基因组计划”相当的大科学项目,以加快技术发展和开发工具为引擎,其务实创新的发展模式使美国在全球脑科技竞赛中保持领跑地位。文章概述了美国“脑计划”的实施近况,解读了重要战略报告,分析了主要研究成果,并对其实施特点进行了剖析,从加强顶层设计、大力发展原研生物技术、紧前布局科学数据治理、探索政企合作模式、建立跨学科网络、践行神经伦理研究6个方面提出了启示和建议,以期为加快我国脑科学发展提供引玉之砖。

美军创伤后应激障碍研究进展分析

创伤后应激障碍(PTSD)是一种暴露于灾难性事件后,发生以焦虑或抑郁为主要表现的复杂的精神病理状态,广泛发生于有部署经历的退伍军人中。近年来美国持续作战部署,较多现役和退伍军人出现心理健康危机,PTSD等心理障碍使得美军自杀率呈上升趋势,负面影响甚至超越战争本身。为降低PTSD对战备的不利影响,提升军人整体心理弹性和冲突应对能力,美军开展了较多相关研究。该文梳理了美军PTSD的流行病学特征和诊断标准,从药物疗法、认知行为疗法、其他心理疗法和潜在新兴疗法四方面归纳了美军PTSD的治疗策略和研究进展,分析了美军开展的部分代表性训练项目,以期为我军开展相关研究提供有益参考。

流感病毒核酸内切酶抑制剂高通量筛选模型的建立

目的:建立适于高通量筛选的流感病毒核酸内切酶(PAN)抑制剂筛选模型。方法:在大肠杆菌中诱导表达质粒,经蛋白纯化和浓缩,得到目的蛋白PAN。提取噬菌体M13K07的单链环状DNA为底物,应用荧光定量方法建立PAN抑制剂高通量筛选体系,并对应用虚拟筛选技术挑选的100个样品进行PAN抑制活性筛选。结果:反应体系在底物质量浓度0.2μg.mL-1,pH 9.0,Mn2+浓度1 mmol.L-1,37℃温孵60 min的条件下酶活性最佳。此时Z'因子为0.77,可用于高通量筛选。筛选结果发现7个样品对PAN具有抑制活性。结论:本研究建立的流感病毒核酸内切酶抑制剂高通量筛选体系可用于PAN抑制剂的筛选。

美军疫苗研发进展与策略分析

疫苗是应对重大、突发传染病的有力武器。接种疫苗是全球公认的最成功和最经济的公共卫生干预措施之一,对于预防大范围感染和保持军队战斗力具有重要意义。美军医学机构长期致力于疫苗研发,其针对细菌、病毒等感染性疾病研发了多种有效疫苗,在美军全球兵力部署方面发挥了十分重要的作用,其主要研究领域、方向和布局特点具有较高的借鉴价值。该文综述了美军从事疫苗研究的主要科研机构,在临床前和临床试验阶段的主要疫苗品种,在此基础上归纳了美军推进疫苗研发的主要策略,以期为我军疫苗研发提供有益参考。

虎杖抗H1N1流感病毒神经氨酸酶活性成分研究

目的:分离和鉴定虎杖乙酸乙酯提取物中能显著抑制H1N1流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的活性成分。方法:基于药理活性导向法,综合利用硅胶,葡聚糖凝胶和制备液相等色谱分离虎杖提取物活性成分,采用MS和NMR等波谱数据及其理化性质鉴定分子结构。结果:从虎杖乙酸乙酯活性部位分离出7个化合物,分别鉴定为:2-methoxystypandrone(1),大黄素(2),白藜芦醇(3),虎杖苷(4),大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),(E)-3,5,12-trihydroxystilbene-3-O-β-D-glucopy-ranoside-2'-(3″,4″,5″-trihydroxybenzoate)(6)和儿茶素-3-O-没食子酸酯(7);NA测试表明化合物3,6和7显著抑制NA活性,IC50分别为129.8,44.8,21.3μmol·L-1,进一步CPE测试表明化合物6和7具有显著抗H1N1流感病毒效果(EC50分别为5.9,0.9μmol·L-1),对宿主MDCK细胞表现出非常低的细胞毒性,选择性指数分别为56和269。结论:基于药理活性导向从虎杖提取物中分离鉴定出能显著抗H1N1流感病毒的神经氨酸酶抑制剂,对阐明其药效物质基础和抗流感药物研发具有指导意义。

基于网络药理学的香薷治疗流感作用机制研究

目的通过网络药理学方法分析香薷(Moslae Herba)治疗流感潜在活性成分、靶点以及作用机制。方法从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中获取香薷化学成分,利用SwissTargetPrediction数据库得到化合物潜在靶点,通过GeneCards、OMIM数据库和文献挖掘获取流感靶点;利用Cytoscape软件构建成分靶点网络图,通过STRING数据库获取交集靶点的蛋白质相互作用(PPI)并导入Cytoscape软件,采用Metascape平台对交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果共获得香薷14个活性成分及其243个潜在靶点,流感相关靶点1088个,香薷成分和流感交集靶点45个;研究发现香薷治疗流感的有效活性化合物为14个,关键成分为柯伊利素、木犀草素、山奈酚、华良姜素、金合欢素和槲皮素等6个;PPI网络分析得关键靶点蛋白9个,主要为Akt丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt1)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、热休克蛋白(HSP)90AA1、表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等;Metascape基因富集分析筛选得到GO条目总计708条,主要与细胞因子、免疫调节、氧化应激等多个生物学过程相关;筛选发现KEGG 130条通路,主要涉及病原体感染以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、趋化因子信号通路、磷脂酶D信号通路等。结论该研究揭示香薷可能通过抗炎、抗病毒、免疫调节等机制治疗流感,为后续实验研究提供一定参考。