三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察。方法收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对“中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则”中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性。结果三七片取样量100 mg,56℃水浴8 h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230 bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求。结论ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考。

绞股蓝中新达玛烷型皂苷成分及其神经保护作用

采用色谱方法从绞股蓝叶分离得到1个新达玛烷型皂苷和2个已知达玛烷型皂苷,并分别通过HR-ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR,2D-NMR,CD光谱等方法鉴定为3-O-[β-D-葡萄糖基(1→2)][β-D-葡萄糖基]-2α,3β,12β,20,24(S)-四羟基-达玛-25-烯-20-O-[β-D-木糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷(1,新化合物,命名为gypenoside J5),3-O-[β-D-葡萄糖基(1→2)][β-D-葡萄糖基]-2α,3β,12β,20,24(R)-四羟基-达玛-25-烯-20-O-[β-D-木糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷(2)和2α,3β,12β,20-四羟基-25-过氧氢-达玛-23-烯-3-O-[β-D-葡萄糖基(1→2)][β-D-葡萄糖基]-20-O-[β-D-木糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷(3)。其中化合物1和2是24位差向异构体,通过圆二色谱(CD)确定其24位绝对构型。这3种化合物对H1299,HepG2,PC-3癌细胞显示出低细胞毒性。然而,它们对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤具有剂量依赖性的保护作用,尤其是化合物1显示出最强的抗氧化作用。尽管还需进一步的体内实验来证明其活性,但目前的体外研究为绞股蓝潜在的神经保护作用提供了物质基础。