肺癌基因治疗现状与展望

肺癌是当今发生率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,根据病理和临床特征,可以分为小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）两大类[1]。其中SCLC约占肺癌发病总数的16.8%,而NSCLC约占80.4%[2]。由于肺癌被诊断发现时往往已属晚期,导致患者的5年生存率往往低于10%;随着肺癌诊断和治疗技术的进步,目前肺癌的5年生存率可提高到近15%。

MSTN基因在1～6月龄哈萨克羔羊肌肉组织中表达量及其与生长指标相关性分析

试验旨在分析MSTN基因在1-6月龄哈萨克羔羊肌肉组织中表达量及其与各项生长指标的相关性,为哈萨克羊的良种选育提供科学依据。随机选取5只哈萨克公羔羊,每月定时在羔羊活体腿部取肌肉组织,软尺测量体长、体高、体重、管围、胸围等各项生长指标。实时荧光定量PCR分析1-6月龄哈萨克羔羊肌肉组织中MSTN的表达量,相关性分析MSTN基因在羔羊肌肉中的表达量与各项生长指标的关联性。结果显示：哈萨克羔羊各项生长指标在1、2月龄快速增长,体重从4月龄开始增重缓慢,体长、体高、胸围在3月龄出现增长缓慢,管围在3月龄起基本停止增长。MSTN基因在1-4月龄哈萨克羔羊肌肉组织中表达量均无显著性差异（P〉0.05）,呈现略微上升的趋势,5月龄达到最高峰,6月龄迅速下降。MSTN基因在肌肉中表达量与体长呈显著负相关（P〈0.05）,相关系数为-0.472,与体重、胸围呈弱负相关,与管围、体高呈弱正相关。

新疆也木勒白羊肌肉生长抑制素基因在不同生长时期的表达研究

试验采用实时荧光定量PCR技术测定也木勒白羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因在不同生长时期(0~6月龄)的表达量,采用2-ΔΔCt分析不同生长阶段表达量的差异,旨在掌握也木勒白羊不同生长时期MSTN基因的表达规律,为也木勒白羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料。结果发现,MSTN基因在3月龄也木勒白羊肌肉中的表达量显著低于其他月龄(P【0.05),其余各月龄差异不显著(P】0.05);MSTN在脂肪中的表达量0月龄相对较低,随月龄增长,表达量升高,在5月龄达到最高,后随月龄增长表达量降低。MSTN基因在肌肉和脂肪中的表达量随着月龄增长有一定的规律可循,其表达规律可为也木勒白羊肉用性能的选育提供一定的科学依据。

MSTN基因在1-6月龄哈萨克羔羊脂肪中相对表达量的研究

探索MSTN（生长抑制素）基因在脂肪组织中不同生长阶段的表达差异,为哈萨克羔羊的良种选育提供遗传学资料。采用荧光定量1-6月龄哈萨克羔羊脂肪组织中MSTN基因的相对表达量,2-ΔΔCt处理不同月龄相对表达量数据,SPSS 17.0软件分析表达量差异。结果表明：MSTN基因在1-6月龄哈萨克羔羊尾脂中的相对表达量6月龄最高,1、2、3、4各月龄之间无显著性差异（P〉0.05）,5月龄最低。说明MSTN基因在脂肪中的表达量在生长发育的前期差异不显著（P〉0.05）,在5月龄显著降到最低点,随后在6月龄达到最高。

MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药

背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物,但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs,探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs,将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株,CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因,RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达,表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192,细胞对顺铂的IC50显著增高,顺铂引起的细胞凋亡率显著降低;反之,在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达,顺铂的IC50显著降低,顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR,并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达,诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药,并减少顺铂引起的细胞凋亡。

类泛素化修饰蛋白SUMO1的表达纯化及抗体制备

SUMO是近年发现的类泛素化修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的细胞内定位、稳定性及与其它蛋白质的相互作用.为研究蛋白质的SUMO化修饰,本文表达并纯化了重组的人SUMO1,制备了兔抗hSUMO1的多克隆抗体.经ELISA和免疫印迹检测,该抗体灵敏度高、特异性好,且能识别内源性SUMO1及其修饰蛋白,可用于SUMO化修饰靶蛋白的鉴定及SUMO化修饰的生物学功能研究.

慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变

背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因。前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力。为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株。方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-H1基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变。结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低;shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1的正常表达;侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强。结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强。

器官特异性转移肺癌细胞株的筛选及建立

背景与目的肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。肺癌转移具有器官特异性,最常转移的部位是淋巴结、大脑、骨、肝脏和肾上腺。本研究的目的是应用我们实验室的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981,筛选鉴定出具有器官特异性转移的肺癌亚代细胞株,为进一步研究肺癌细胞器官特异转移提供科学可靠的细胞模型。方法通过裸鼠实验,将母系细胞株L9981-Luc皮下接种,每周一次动物活体成像观察肺癌器官转移情况,数周后构建出具有肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑等器官特异性转移的小鼠模型;处死裸鼠,切取肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑器官肺癌转移瘤进行原代培养,构建具有器官靶向特异性转移潜能的肺癌亚代细胞株;将第一代器官特异性转移肺癌细胞株接种裸鼠皮下,再次构建肺癌器官特异性转移小鼠模型;通过反复多次将肺癌器官特异性转移瘤构建肺癌细胞株,再裸鼠接种,最终获得具有肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑器官特异性转移的肺癌细胞株。结果经过裸鼠反复接种,动物活体成像、动物体内反复筛选鉴定,成功构建了4株分别特异性转移到肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑的器官特异性转移肺癌细胞株,分别命名为L9981-LuM、L9981-BoM、L9981-LnM和L9981-BrM。结论成功构建出具有肺、纵隔淋巴结、脊柱和大脑特异性转移的人大细胞肺癌细胞模型,为进一步研究肺癌器官特异转移的分子机制、信号调控途径,以及未来研究和开发抑制或/和阻断肺癌转移的分子靶向药物提供了可靠的细胞模型。

新疆也木勒白羊MSTN基因在不同组织中的表达定量研究

通过实时荧光定量也木勒白羊MSTN基因在不同组织(心、肝、脾、肺、肠、肾、尾脂、半膜、半键、股二、股三、背最长肌)表达量的多少,分析MSTN基因在不同组织的表达规律,为也木勒白羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料。结果表明:也木勒白羊MSTN基因在肌肉半膜、半键、股二、股三的表达量显著高于其他各组织(P<0.05),背最长肌表达量显著高于各内脏组织和尾脂(P<0.05),尾脂、肝、脾、肠、肾中表达量显著低于其他各组织(P<0.05),内脏组织中肺的表达量最高,心居于第二,其余各内脏组织表达量均差异不显著(P>0.05)。说明MSTN基因在12种组织中均有表达,但在内脏和尾脂中的表达量低于肌肉组织。

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)m RNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白(β-catenin)蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin m RNA和蛋白水平表达(P<0.01,P<0.01),并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin m RNA和蛋白水平表达(P<0.01,P<0.01);尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01,P<0.01)。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。

高中语文教材爱情作品教学初探

在新课程背景下，高中语文教材中增加了不少爱情作品，如何利用这些作品帮助学生正视爱情，判断爱情，并树立美好健康的爱情观，培养学生的健全人格？作为语文教师，应该改变传统的教学观念，在认真解读分析这些爱情作品的基础上，引导学生感受真情，正确树立高尚的爱情观。

提升高中语文阅读教学质量的策略

高中语文作为提升高中生识字率、表达能力和沟通鉴赏能力的学科,除了讲授基础的语文知识外,还要提高学生的写作能力和阅读能力。语文阅读既是学习的目的,也是学习的途径,就目前来看,在高中语文阅读教学中还存在一些问题,比如：学生阅读兴趣较淡,阅读功利性较强,阅读能力较弱等。为了优化高中语文的阅读教学,笔者结合自身的教学经验,探究了一些提升阅读有效性的方法,希望能对高中语文的阅读教学起到一定的积极作用。

让备课“给力”语文课堂

教学工作的主阵地是课堂,但课堂效率离不开教师的备课。备课是实现课堂＂轻负高质＂的主要途径。教师要以备课带动教学,从课外延伸到课内,提高课堂教学的效率,从而实现高效教学。语文教学中,有些老师的语文＂常态课＂,会给学生的主动学习制造障碍;有些老师一味追求的＂新、潮、怪＂的＂奇态课＂,也让学生云里雾里。本文以高中语文教学备课为例,谈谈如何让备课＂给力＂语文课堂。一、立足文本语言新课程改革以来,课堂形式发生了天翻地覆的变化,因此课堂的精髓在于教师首先要明确：＂语文课要教的是什么。＂

预设之险 生成之利——以《品质》为例

细品当前的课堂教学,无论是观摩课,还是常态课,教师都会或多或少地存有预设。近来,拜读了北京大学曹文轩教授的一篇文章《自然是语文教学的最高美学原则》,对其中的＂预设与落空＂颇有感触,聊以高尔斯华绥的《品质》为例,谈谈我对＂预设＂和＂生成＂的看法。一、预设之险1.教学目标之＂一网打尽＂。

浅谈议论文教学内容的序列性问题

议论文写作是高中阶段作文教学的重要任务，更是培养学生思辨能力的最佳途径。对高中议论文教学内容的序列性问题的探讨，不仅仅是为了提高学生在考试中的得分率，更是为了培养其写作能力和逻辑思维能力。

从语言视角激活个性化阅读——以《拿来主义》为例

鲁迅先生的经典杂文《拿来主义》被各个版本的语文教材选录。而苏教版教材将其定位为高中必修教材的文章，把教学重点落实到思路结构上。课前单元提示要求学生在阅读时从文章结构人手，以作者的思路为切人点，论述作者是如何提出问题，并分析解决问题的，而课后练习要求学生阅读时要理清作者思路，从整体上把握“拿来主义”的含义。可见，理顺文本是教学《拿来主义》的重中之重，下面笔者从语言视角切人，浅析如何激活个性化阅读。

新疆5个品种羊不同月龄MSTN基因mRNA表达水平及其与生长性状相关性分析

为了探讨不同品种绵羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)表达水平及其与生长性状(体重、体高、体长、胸围和管围)的关联性,试验采用实时荧光定量PCR方法比较阿勒泰羊、吐鲁番黑羊、也木勒白羊、哈萨克羊、巴什拜羊不同月龄(初生及1、2、3、4、5月龄)肌肉和脂肪MSTN mRNA的表达水平,运用SPSS 19.0软件分析与其生长性状的相关性。在肌肉中:初生时,阿勒泰羊、哈萨克羊、巴什拜羊MSTN基因mRNA表达水平均明显低于其他各月龄;也木勒白羊3月龄MSTN基因mRNA水平均显著低于其他各月龄(P<0.05);阿勒泰羊、吐鲁番黑羊MSTN基因mRNA在4月龄表达水平最高;哈萨克羊MSTN基因mRNA初生时表达水平最低,5月龄表达水平最高。在脂肪中:也木勒白羊MSTN基因mRNA表达水平初生时显著低于其他各月龄(P<0.05);阿勒泰羊、也木勒白羊、巴什拜羊MSTN基因mRNA 5月龄表达水平最高,巴什拜羊MSTN基因mRNA 5月龄显著高于其他各月龄(P<0.05);哈萨克羊MSTN基因mRNA 2月龄表达水平最高,显著高于5月龄(P<0.05)。相关性分析结果发现,MSTN基因mRNA表达水平与生长性状多呈负相关关系。阿勒泰羊在肌肉和脂肪中MSTN基因mRNA表达水平与其生长性状均呈负相关关系;吐鲁番黑羊MSTN基因mRNA在肌肉中的表达水平与体高、体长呈负相关,其余均呈正相关;也木勒白羊MSTN基因mRNA在肌肉中的表达水平与胸围、管围呈正相关,在脂肪中表达水平与体长呈正相关,其余均呈负相关;哈萨克羊在肌肉和脂肪中除与体长呈正相关外,其余均呈负相关;巴什拜羊在肌肉中MSTN基因mRNA表达水平与体长、管围呈正相关,其余均呈负相关。MSTN基因mRNA在不同月龄不同品种间的表达水平存在差异性,无固定表达模式;且与生长性状多呈负相关关系,与部分体尺性状呈正相关关系。MSTN基因mRNA表达水平可能与生长性状和骨骼生长有直接关系。

新疆巴什拜羊肌肉生长抑制素基因DNA甲基化与mRNA表达量分析

为了探究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因在肌肉和脂肪中的DNA甲基化模式及mRNA表达水平,试验以5月龄巴什拜羊羔羊为研究对象,采用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测MSTN基因启动子区和第1外显子甲基化模式,并通过实时荧光定量PCR检测MSTN基因在巴什拜羊股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌和尾脂中的mRNA表达水平。结果显示,肌肉组织甲基化概率高于脂肪组织,其中,股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌和尾脂的甲基化概率分别为74.2%、74.2%、83.2%、83.7%、82.1%和25.3%,MSTN基因在股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌中的表达水平显著低于尾脂(P<0.05),股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌和背最长肌之间差异不显著(P>0.05),巴什拜羊肌肉和脂肪MSTN基因DNA甲基化水平与MSTN基因表达量呈显著负相关(r=-0.886,P<0.05)。

现代教育技术在语文教学中的应用——以高中古典诗歌教学为例

在教学中对于现代技术的应用已经越来越广泛了。对学生来说，现代技术的运用能够使得学生对于学习有一个重新的认识。在高中语文的学习中也是如此，对各种现代技术的运用是比较多的，结合传统的教学内容，将以往的教学变得活起来，让学生对于学习有更多的兴趣。本文就围绕着“现代教育技术在语文教学中的应用——以高中古典诗歌教学为例”做出了一些探究。

教师启动,师生互动,学生主动——新课程理念下高中语文阅读教学模式探究

在新课程理念教学背景下,越来越多的教师开始对高中语文阅读教学的影响力和价值力进行探究和钻研。对高中生而言,其普遍具有的鉴赏能力和探究能力,能有效地推进语文阅读教学的发展与进步,并使学生能够在阅读教学的滋养下,实现终身学习的目标。但是,传统的语文阅读教学模式的应用却大幅度地降低了阅读教学的有效性,阻碍了学生个性的发展。为了改变这一教学现状,教师就要积极探究新型的阅读教学模式,并从教师启动、师生互动、学生主动等多个层面深入探究,以推进高中语文阅读教学课堂的快速发展。