牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用

用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%(926/2012),而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。

洼地绵羊羔羊O型口蹄疫疫苗免疫程序的优化

为优化洼地绵羊羔羊O型口蹄疫疫苗免疫程序,为洼地绵羊口蹄疫综合防控措施的制定提供参考依据,试验采用阻断ELISA方法分析了羔羊母源抗体消长规律、不同剂量疫苗免疫抗体消长规律、疫苗加强免疫不同间隔时间抗体消长规律。结果显示:(1)随着羔羊月龄的逐渐增加,其体内的母源抗体效价迅速降低,3月龄的母源抗体效价已经远远低于完全保护性抗体效价(1∶128);(2)在疫苗免疫后14 d、21 d、28 d、60 d、90 d、120 d、150 d、180 d、210 d,双倍剂量组的抗体效价均显著高于单倍剂量组(P<0.05);(3)在疫苗首免后90 d、120 d、150 d、180 d、210 d,加强免疫间隔1个月组的抗体效价均显著高于间隔半个月组(P<0.05)。确定该羊场羔羊的最佳免疫程序为:羔羊3月龄免疫O型口蹄疫灭活疫苗双倍剂量,首免后间隔1个月加强免疫O型口蹄疫灭活疫苗。

表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。

植酸酶对鲤鱼生长及磷利用率的影响

选用300尾体重为50 g左右的鲤鱼鱼种,随机分为5组:对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。对照组饲喂基础饲料,Ⅰ组饲喂每千克添加1500 U植酸酶的基础饲料,Ⅱ组饲喂每千克添加3000 U植酸酶的基础饲料,Ⅲ组饲喂每千克添加4.5 g Ca(H2PO4)2的基础饲料,Ⅳ组饲喂每千克添加8.9 g Ca(H2PO4)2的基础饲料。结果显示:饲料中添加3000 U/kg和1500 U/kg植酸酶显著地促进了鲤鱼生长,降低了饲料系数,提高了饲料中磷的利用率。与对照组相比,3000 U/kg和1500 U/kg植酸酶组鲤鱼的增重率分别提高61.06%和52.81%,鲤鱼对饲料中磷的表观消化率分别提高65.63%和61.65%,粪磷含量分别下降24.58%和22.88%。本试验表明:植酸酶可以显著地促进鲤鱼的生长和提高磷的利用率。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定

利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定。然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌。取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础。

猪链球菌2型毒力因子研究进展

猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,其主要毒力因子包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、溶血素、纤连蛋白结合蛋白、谷氨酸脱氢酶等,但是这些经典的毒力因子不足以解释猪链球菌病发病的临床症状,而且毒力表型往往与实际毒力及临床症状不符。近年来随着研究的深入,鉴定出一系列毒力相关元件,主要有Sao蛋白、存在于89K毒力岛的双信号转导系统(salk-salR)、dltA基因、pgdA基因、srtA基因、Ⅳ型二肽基肽酶(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPPⅣ)、毒力调控子R(control of virulence R,CovR)、烯醇酶(enolase)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GlnA)等。论文对以上毒力因子研究进展进行综述,以期为SS2毒力因子及致病机制研究提供参考。

猪瘟强毒与弱毒鉴别检测方法的研究进展

猪瘟（Classical swine fever,CSF）以前又名烂肠瘟,是由黄病毒科黄病毒属的猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征。猪瘟具有高度传染性,主要通过呼吸道和消化道传播,传播速度快、发病率和死亡率高,给养猪业造成了巨大的经济损失;

2020—2022年山东省淄博市羊布鲁氏菌病血清学监测

为掌握山东省淄博市羊布鲁氏菌病流行情况,2020—2022年每年从辖区内的种羊场、商品代规模羊场和散养户中,随机抽取不同数量的羊血清进行实验室抗体检测。共采集11个县区464个养殖场户17660份血清样品,用虎红平板凝集试验(RBT)进行初筛,初筛阳性样品再用试管凝集试验(SAT)进行确诊。结果显示:2020—2022年淄博市羊布鲁氏菌病群体阳性率分别为3.67%、4.05%和5.26%,个体阳性率分别为2.31%、0.55%和1.49%,经卡方检验,各年份群体阳性率差异不显著(P>0.05),各年份个体阳性率存在统计学差异(P<0.001)。种羊场个体阳性率为0,商品代规模羊场为1.18%,散养户为1.15%,经Fisher’s精确检验,个体阳性率差异不显著(P>0.05)。结果表明:近3年淄博市羊布鲁氏菌病流行情况总体稳定,流行率维持在较低水平,出现区域性流行的风险较小,但仍有疫情散发风险,需要进一步加强相关部门的沟通协作,加大活羊调运的检疫监管,持续强化监测净化,保障食品安全和公共卫生安全。

猪瘟病毒E2基因原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性的致死传染病。其病原体猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）中的成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒。E2蛋白是猪瘟病毒的跨膜结构蛋白,是诱导被感染动物机体产生免疫保护与CSFV中和抗体的主要病毒结构蛋白，

应用逆转录套式PCR检测猪流行性腹泻病毒

根据已发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因核苷酸序列,设计合成2对引物,其中外引物扩增片段长度为297bp,内引物扩增片段长度为212bp,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测PEDV的套式RT-PCR检测方法,该方法较普通RT-PCR更加灵敏、可靠,能有效降低假阳性和污染,可用于PEDV的快速诊断和流行病学调查。

猪瘟疫苗质量的替代检验方法研究进展

国标的猪瘟疫苗效力检验、支原体检验、外源病毒检验等质量检验方法均存在试验周期长、操作繁琐、敏感性较低等缺点,随着现代免疫学与分子生物学技术的快速发展,猪瘟疫苗质量检验的新兴替代检验方法日臻发展和完善。论文就近年来针对猪瘟病毒的病毒含量测定、猪瘟疫苗效力检验、支原体检验、外源病毒检验等免疫学与分子生物学新兴检测方法的研究进展做一综述,以期为提高猪瘟疫苗的质量检验水平、保障猪瘟疫苗质量提供参考依据。

流行性乙型脑炎病毒E蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。

犬瘟热病毒在不同组织细胞上增殖特性的研究

将犬瘟热病毒(CDV)分别接种于长满单层的鸡胚成纤维细胞(CEF)、非洲绿猴肾细胞系(Ve-ro)、犬肾细胞系(MDCK),观察其病变时间、病变特征,并对其进行RT-PCR鉴定和TCID50测定。结果表明,CDV在这3种细胞上均能增殖,并产生明显的细胞病变(CPE),但在Vero细胞上产生病变的时间短,病变明显,且TCID50最高;RT-PCR检测CDV在不同细胞上的病毒培养液,均能扩增出337bp的片段;CDV在Vero细胞上的增殖滴度明显高于在CEF、MDCK细胞上的增殖滴度。表明本试验所选用的3种细胞中,Vero细胞最适宜培养CDV,所获得的CDV的毒价最高,病变最明显。

一株鸭星状病毒的分离鉴定

为对发病鸭场找到致病原,并对病原分离鉴定,丰富病原分子流行病学以及为新型诊断试剂和疫苗的研究奠定基础。通过对发病鸭场病鸭临床症状和病理变化观察,鸭胚传代分离培养及一步RT-PCR检测和扩增序列比对分析,最终确定该鸭场发生鸭病毒性肝炎,病原为鸭星状病毒。鸭星状病毒感染导致鸭肝炎的报道不多,但确是导致鸭肝炎的病原之一,应该引起对该病毒的重视。

非洲猪瘟流行现状分析及诊断方法研究进展

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、高度致死性传染病,已在全球多个国家发生和流行,对发病国家的养猪业造成了灾难性的打击,我国已发生首例非洲猪瘟疫情,开展非洲猪瘟相关诊断技术的研究与储备工作至关重要。文章分析了非洲猪瘟流行现状,并综述了我国研究学者在非洲猪瘟各种诊断技术方面的研究进展,对加强我国非洲猪瘟诊断技术的储备与制定非洲猪瘟防控措施均具有一定的参考价值。

11株血清4型禽腺病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为了阐明Ⅰ群禽腺病毒在我国部分地区鸡群的感染状况,对2015年10月~2016年10月采集自山东、河北等鸡场疑似禽腺病毒感染病鸡的肝脏样品,通过病毒分离、PCR、动物回归试验等进行分离鉴定,最终鉴定出11株血清4型禽腺病毒。根据Gen Bank上发表的Ⅰ群禽腺病毒(FAd VⅠ)Hexon基因序列设计引物,对分离的11个毒株测序,并与其他血清型参考毒株进行比较分析。结果表明:分离的11株FAd V同源性高达99.7%以上,与FAd V-4参考毒株的核苷酸序列的同源性在98.3%~99.7%之间,与FAd V-10血清型序列同源性较近,为97.2%,而与FAd V-5、FAd V-8血清型同源性较低,仅在66.4%~87.2%之间。研究结果为FAd V的防控和新疫苗研发提供了可靠的理论依据。

非洲猪瘟传入中国的风险分析及诊断方法研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、高度致死性传染病,已在全球多个国家发生和流行,对发病国家的养猪业造成了灾难性的打击,对中国的威胁也与日剧增,开展相关ASF诊断技术的研究与储备工作至关重要。文章分析了ASF传入中国的潜在风险,并综述了国内研究人员在ASF各种诊断技术方面的研究进展,对加强中国ASF诊断技术的储备与制定ASF防控措施均具有一定的参考价值。

胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断上的应用

胶体金免疫层析技术是在胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术基础上发展起来的一种新型免疫学诊断技术。因其具有简便、快速、无污染、不需特殊仪器、特异性强、敏感性高、结果判断直观等优点,成为当前广泛采用的动物疫病免疫学诊断技术。胶体金免疫层析技术在动物病毒病、细菌病、寄生虫病及水产动物疫病诊断方面都有非常广泛的应用,在未来的动物疫病诊断中将发挥越来越重要的作用。论文就胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断上的应用进行综述。

我国猪伪狂犬病的流行情况分析

猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的以种猪繁殖障碍、新生仔猪急性死亡为主要特征的一种急性、败血性传染病[1]。我国于1947年首次发现此病,于20世纪90年代开始推广应用PRV gE基因缺失弱毒疫苗免疫接种,

我国猪口蹄疫免疫现状及疫苗免疫效果的影响因素分析与对策

强制免疫工作作为当前防控猪口蹄疫的有效措施,是避免和减少口蹄疫疫情发生的关键,笔者就近10年来我国猪O型口蹄疫强制免疫后的免疫现状与特点进行了总结与概述,并对影响猪口蹄疫疫苗免疫效果的因素进行了分析,进而提出了提高疫苗免疫效果的对策,对掌握我国猪O型口蹄疫的免疫现状,及时发现疫情隐患和疫病防控工作中的薄弱环节,为优化猪口蹄疫免疫程序和更好地科学防控猪口蹄疫提供技术保障。