CD8^+细胞毒性T细胞的反应质量在EV71HFMD病程发展中的作用

目的研究中国EV71感染手足口病(HFMD)中CD8+细胞毒性T细胞的活化和第二信号的表达,探讨EV71感染的病程发展机制。方法选取48例EV71HFMD患儿分为轻症组、重症组(其中包括中枢神经病变组、中枢神经病变伴自主神经失调组、神经源性肺水肿组),应用流式细胞术检测CD8+T细胞上CD28和CD38的表达水平,分析CD8+T细胞的质量水平在EV71感染病程发展中的作用。结果 CD8+CD28+细胞、活化分子CD38的表达轻症组与健康同龄对照组、重症各组比较增高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD8+细胞毒性T细胞在EV71感染中的反应质量可能是病程发展的原因之一。

川芎嗪改善东莨菪碱致大鼠学习记忆障碍研究

实验采用三门迷路法研究川芎嗪对东莨菪碱所致大鼠学习记忆障碍的改善作用,并进一步探讨其可能的作用机制.实验结果表明:东莨菪碱能使训练后大鼠的获得性学习记忆能力下降,川芎嗪能改善由东莨菪碱所致大鼠的记忆障碍,统计结果有显著性差异.其作用机制可能是激活胆碱能神经系统的活性,提高脑内乙酰胆碱的含量.

支气管哮喘患儿细胞因子抑制因子1/细胞因子抑制因子3调控失衡与单核/巨噬细胞异常活化

目的探讨哮喘患儿急性发作期细胞因子抑制因子(SOCS)1/SOCS3调控失衡与单核/巨噬细胞(MC)异常活化的关系,进一步了解哮喘呼吸道慢性炎症发生发展的分子机制。方法观察哮喘患儿及同龄对照组各20例。用流式细胞术检测其外周血CD14+细胞表面CD80、CD86;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR检测MC中SOCS1、SOCS3mRNA表达。结果哮喘患儿CD14+细胞表面共刺激分子CD80、CD86明显高于同龄对照组(P<0.01)。MC中SOCS1mRNA表达显著降低(P<0.001),而SOCS3mRNA表达显著升高(P<0.001)。结论MC过度活化参与哮喘患儿呼吸道慢性炎症发生发展过程,SOCS1/SOCS3调控失衡可能是哮喘MC异常活化的分子机制之一。

两种血吸虫病疫苗候选分子在原核细胞的融合表达

目的 在原核细胞中表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3的融合蛋白。 方法 RT- PCR法从日本血吸虫成虫总 RNA中扩增出 Sj14- 3- 3基因 ,亚克隆至原核表达载体 p GEX- 4T- 1,并转化 E.coli BL2 1 ,IPTG诱导表达 ,Western- blot鉴定表达产物。 结果 扩增产物约为 76 5 bp,重组质粒经 Bam H 和 Xho 双酶切后可得到一与 PCR产物大小相同的 DNA片段 ,经 IPTG诱导后在 5 5 ku附近出现一新增蛋白条带 ,Western- blot结果显示 ,表达产物可被兔抗鼠 14- 3- 3ε多克隆抗体识别。 结论 在原核细胞融合表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3成功。

东北地区少数民族传统体育冬季项目资源发展研究

东北地区少数民族传统体育冬季项目历史悠久、种类繁多,具有极高的文化价值和健身价值,挖掘、保护、传承、创新这些项目具有重要的现实意义。系统研究了东北地区满族、蒙古族、达斡尔族、鄂伦春族、鄂温克族、赫哲族、朝鲜族等主要少数民族的传统体育冬季项目资源。目前我国冬季运动项目发展以西方现代体育项目一家独大,对于少数民族传统体育冬季项目的传承任重道远。将东北地区少数民族传统体育冬季项目引入大、中、小学校体育教学中,不仅可以解决东北冬季体育课程资源不足的问题,更能更好地传承发展东北地区少数民族传统体育冬季项目。东北地区少数民族传统体育冬季项目随着时代的变迁,应走向大众化、健身化和娱乐化。

神经元细胞信号传导蛋白质14-3-3ζ编码基因的扩增和克隆

目的 克隆神经元信号传导蛋白质 14 3 3ζ编码基因 ,以研究其在人神经退行性病变中的诊断价值、细胞信号传导过程中的作用及对细胞分裂、细胞凋亡的影响。方法 提取人脑胶质瘤细胞总mRNA ,以其为模板逆转录合成cD NA第一链 ,设计合成引物 ,用PCR扩增 14 3 3ζ基因编码序列 ,将其插入 pGEM T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的PCR进行鉴定。结果 RT PCR扩增出一条约 75 0bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR获得了一条与RT PCR大小相同的条带。经DNA测序证明所克隆的DNA片段与GenBank收录序列一致。结论 信号传导蛋白质 14 3 3ζ重组 pGEM T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供了条件。

信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定

目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 。

高校冬季开展阳光体育运动的影响因素

开展"阳光体育运动"是新时期加强学校体育工作的战略举措,增进学生健康,提高全民族素质具有重要的价值。不同的历史时期高校体育的教学的指导思想具有变动性、现实性和阶段性等特点,不同的教育指导思想对青少年的身体素质具有不同的影响,冬季体育的教学的指导思想、冬季体育的教育观念和冬季体育教学的目标是影响高校冬季阳光体育运动开展的主要因素,对培养学生体育的兴趣,养成锻炼的习惯,培养终身体育的意识起着主导作用。

高校冬季冰上课程的安全措施

冰上体育课是黑龙江高校冬季体育教学的主要教学内容之一,由于冰上滑冰运动技术难度高、技术动作复杂,大学生在掌握滑冰技术的过程中经常会发生运动损伤现象,探究导致大学生运动损伤产生的原因,制定科学合理的预防措施对提高冰上体育课教学质量具有重要作用。冬季冰上体育课教学中运动损伤的部位包括踝关节、膝关节、腰部、髋关节、肌肉、韧带、肩部、上下肢及切割伤等,运动损伤的性质有开放与闭合性软组织损伤、关节扭伤或脱位等,教师没有发挥主导作用与教学课程安排不合理、学生未能做好课前准备活动、学生技术基础不同步或技术动作不规范、安全知识教育不够及缺乏有效的场地管理是产生运动损伤的主要原因。提出制定合理的教学计划,科学安排教学过程,强化安全知识教育,加强场地与器材的维护等高校冬季冰上滑冰课程的安全措施。

大冬会雪上项目赛后场地营销策略

很多重大赛事的场地和设施在赛事结束后没有得到预期的经济回馈。为确保大冬会雪上项目场地赛后进行更好的经营,分析和探讨了大冬会雪上项目赛后场地营销管理现状、存在的问题和营销策略。指出经过大冬会的锤炼,雪上项目赛后场地的经营应尽快进入集约化更高的开发阶段。从多元开发赛后经营资源,推行高效营销组合,以品牌营销为核心,融入文化营销、体验营销和绿色营销,论述了多元化立体式营销策略。

借助冰雪体育运动促进黑龙江省冰雪旅游经济发展

分析了黑龙江省冰雪体育运动发展的情况及借助冰雪体育运动发展黑龙江省冰雪旅游经济的意义。冰雪旅游对黑龙江省经济发展具有重要的意义,可以优化产业结构,带动相关产业发展;提高区域经济水平;扩大就业机会;为经济合作提供了必要的物质条件;扩大国际交流,进而促进经济合作与发展。对冰雪体育运动和冰雪旅游经济的管理非常重要,对冰雪旅游资源的开发要合理和适度,只有这样才能促进黑龙江省冰雪旅游经济的持续发展。

试论体育教学中备课环节对教学质量的重要性

从体育教学师生的角色作用、体育教学备课过程的主要内容和备课方法论述了高校体育教学中备课的作用,它是影响体育教学质量的重要环节。提出高校体育教学备课的主要内容和合理有效的备课方法。

日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3在原核细胞的高效融合表达和特性鉴定

目的 构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法 用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Westernblot分析。结果 获得pET2 8a -Sj14 - 3- 3重组表达载体 ,SDS -PAGE和Westernblot显示Sj14 - 3- 3基因在 pET2 8a中表达的融合蛋白约为 32 4kDa ,与天然 14 - 3- 3蛋白具有相同的免疫活性。 结论 日本血吸虫信号蛋白14 - 3- 3在原核细胞中得以高效表达 ,表达产物具有免疫活性 。

葛根素对实验性代谢综合征影响的研究

目的观察葛根素对实验性代谢综合征的影响。方法10%果糖水喂养Wistar大鼠6周后,检测血甘油三酯及空腹血糖、空腹胰岛素浓度,计算胰岛素敏感指数。然后腹腔注射葛根素高剂量(100 mg.kg-1)和低剂量(50 mg.kg-1),以二甲双胍为阳性对照,连续给药6周后,检测血压、口服葡萄糖耐量、葡萄糖输注率、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇。结果模型组大鼠血糖升高,胰岛素敏感指数下降。葛根素干预后,与模型组比较,口服葡萄糖耐量降低,葡萄糖输注率增加(P<0.01);血压、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇降低,高密度酯蛋白胆固醇升高(P<0.05)。结论葛根素对果糖诱导的代谢综合征有治疗作用。

双歧杆菌对过敏性哮喘儿童DC成熟及其分泌细胞因子的影响

目的研究青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)表达CD86和HLA-DR及其分泌IL-1βI、L-6I、L-10、IL-12、IL-23和IFN-γ的影响。方法从15名过敏性哮喘儿童和15名非哮喘儿童的外周血单个核细胞诱导生成未成熟DC,分别加入青春型双歧杆菌或脂多糖(LPS)后继续培养DC 2天,①每天于倒置显微镜下观察DC形态;②用流式细胞仪检测各组DC表面CD86和HLA-DR的分子表达;③用ELISA方法检测培养上清中IL-1βI、L-6I、L-10、IL-12I、L-23和IFN-γ的水平。结果①DC经双歧杆菌和LPS分组处理后第2天,于倒置显微镜下观察到双歧杆菌组和LPS组的DC突起均较空白组明显,具有突起的细胞数量较空白组增多,而双歧杆菌组与LPS组比较,LPS组有突起的细胞数量明显增多,提示DC过度生长。②双歧杆菌刺激后,哮喘儿童DC表面CD86表达明显增高,HLA-DR表达无明显变化,非哮喘儿童CD86和HLA-DR表达均无明显变化;LPS刺激可明显增加哮喘儿童和非哮喘儿童CD86和HLA-DR的表达。③双歧杆菌刺激哮喘儿童DC分泌IL-12、IFN-γI、L-1β及IL-6水平增高,刺激非哮喘儿童DC分泌IL-12I、L-10I、L-1β及IL-23水平增高。结论①过敏性哮喘儿童DC表面CD86的表达可能存在缺陷,双歧杆菌能适度上调其表达,在DC的成熟过程中可能起调节作用。②双歧杆菌能刺激过敏性哮喘儿童DC分泌IL-12和IFN-γ,从而改变Th2优势分化,纠正Th1/Th2失衡。③过敏性哮喘儿童DC分泌IL-10可能存在缺陷,从而影响免疫耐受的形成。④双歧杆菌可能通过刺激哮喘儿童DC分泌IL-1β及IL-6增高,达到促进Th17细胞分化的作用。

Toll样受体在脓毒症患儿炎性反应中的作用

目的探讨Toll样受体(TLRs)信号传导途径分子在脓毒症儿童异常炎性免疫反应发病机制中的作用。方法选取脓毒症患儿10例为脓毒症组,严重脓毒症、脓毒性休克和多器官功能不全患儿13例为严重脓毒症组,健康儿童17例为健康对照组。抽取各组儿童外周静脉血5 mL,抗凝,密度梯度离心法分离其外周血单个核细胞(PBMC),采用实时荧光定量PCR检测PBMC内TLRs信号传导途径分子TLR2、TLR4及前炎性反应细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结果1.脓毒症组和严重脓毒组患儿PBMC前炎性反应细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达均明显高于健康对照组(Pa<0.01),严重脓毒症组患儿显著高于脓毒症组(Pa<0.01)。2.脓毒症组和严重脓毒症组患儿PBMC TLRs信号传导途径分子TLR2、TLR4 mRNA表达与健康对照组比较均显著增高,严重脓毒症组患儿显著高于脓毒症组(Pa<0.01)。结论脓毒症患儿存在TLRs信号传导途径分子的异常活化及前炎性反应细胞因子的异常高表达,TLRs信号传导途径分子的异常活化可能通过影响TNF-α、IL-1β、IL-6等前炎性反应细胞因子的表达,参与脓毒症患儿炎性反应的发生发展。

芎麻滴丸对血管性痴呆大鼠学习记忆功能的影响

目的:研究芎麻滴丸对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能的影响。方法:采用永久性结扎双侧颈总动脉法建立VD大鼠模型,穿梭箱法检测各组大鼠学习记忆能力,HE染色法和尼氏染色法观察大鼠锥体细胞形态和正常神经元计数。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习记忆成绩明显下降,海马CA1区锥体细胞排列稀疏,胞核固缩,正常神经元数量显著减少;与模型组比较,芎麻滴丸中、低剂量组大鼠学习记忆成绩明显提高,海马CA1区锥体细胞损伤减轻,正常神经元数量增加。结论:芎麻滴丸可改善VD大鼠学习记忆障碍,其机制可能与减轻海马CA1区锥体细胞损伤有关。

过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞共刺激分子的表达及意义

目的探讨共刺激分子的表达与过敏性紫癜(HSP)的关系。方法以本院肾脏免疫科住院治疗的31例初发HSP患儿和14例健康儿童为研究对象,病例采血前均无用药史、急性感染性疾病史及其他合并症;采用流式细胞仪直接计数法测定HSP患儿和健康对照组儿童外周血CD4、CD8、CD28、CD152、CD80和CD86的表达;2组间差异比较采用SPSS12.0软件进行处理。结果HSP组外周血单个核细胞表面CD4、CD8、CD80、CD86、CD28和CD152的表达分别为(40.56±3.23)%、(30.61±4.21)%、(6.92±2.31)%、(12.43±4.16)%、(60.38±10.12)%和(0.52±0.47)%,健康对照组CD4、CD8、CD80、CD86、CD28和CD152的表达分别为(41.96±4.46)%、(30.60±4.42)、(2.51±1.67)%、(2.34±1.43)%、(47.62±7.63)%和(0.45±0.14)%;HSP组外周血单个核细胞表面CD4、CD8和CD152的表达与健康对照组比较均无显著性差异;HSP组外周血单个核细胞表面CD80、CD86和CD28的表达显著高于健康对照组。紫癜性肾炎组外周血单个核细胞表面CD4、CD8、CD80、CD86、CD28和CD152的表达分别为(41.55±2.11)%、(31.55±3.17)%、(6.56±2.22)%、(11.91±4.52)%、(59.79±8.92)%和(0.46±0.31)%,非紫癜性肾炎组CD4、CD8、CD80、CD86、CD28和CD152的表达分别为(40.07±2.83)%、(29.52±3.58)%、(7.09±2.48)%、(12.68±3.55)%、(61.33±10.21)%和(0.58±0.40)%,2组比较均无显著性差异。结论外周血单个核细胞抑制性共刺激分子CD152的表达相对降低,不能抑制刺激性共刺激分子CD28的作用,导致免疫细胞过度活化可能是促进HSP发生的因素之一,外周血单个核细胞共刺激分子的表达异常参与紫癜性肾炎的发生。

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析

目的 :纯化日本血吸虫信号蛋白质 14 3 3编码基因的原核表达产物 ,分析纯化产物的免疫学特性。方法 :SDS PAGE鉴定重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)蛋白包涵体 ,超声破碎细胞收集包涵体 ,尿素溶解包涵体 ,NiSO4平衡层析柱 ,亲和层析纯化rSj14 3 3,Western blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果 :rSj14 3 3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达 ,通过亲和层析在 32 .5kDa附近得到单一蛋白条带 ,Western blot证实纯化产物为rSj 14 3 3,且具有与天然Sj 14 3 3相同的抗原表位。结论 :成功纯化了rSj14 3 3蛋白 ,为研究 14 3 3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。