Fas基因转染联合应用顺铂对舌鳞癌细胞的杀伤作用

目的探讨Fas基因转染联合应用顺铂对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法实验细胞分为未转染Fas基因组和转染Fas基因组,各加入100μl顺铂,使其终浓度分别为1、5、10、20、40μg/ml,观察顺铂作用下转染前、后Tca8113细胞的形态学变化,绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测顺铂对转染前、后Tca8113细胞的抑制率,流式细胞仪测定转染前、后不同浓度顺铂诱导Tca8113细胞的凋亡情况。结果转染Fas基因组可观察到细胞凋亡;转染组Tca8113细胞生长速率低于未转染组;转染组和未转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用均随着顺铂浓度的增加而增强;顺铂浓度相同时,转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用高于未转染组;未转染Fas基因组顺铂诱导Tca8113细胞,统计分析差异无显著性,而转染组Tca8113细胞的凋亡率随顺铂浓度增加而升高。结论通过Fas基因转染联合应用顺铂,可增加舌鳞癌Tca8113细胞的抑制率,并可提高其对顺铂诱导凋亡的敏感性,顺铂终浓度为20μg/ml时可获得最大细胞凋亡率,同时减少大剂量用药带来的毒性反应。

真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应

目的研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序。脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测FasmRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达。通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应。结果PCR扩增后的产物在约1008bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段。经检测Fas基因转染能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01)。Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性。软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低。结论Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点。Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长。

口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞的Fas/FasL表达

目的研究口腔鳞状细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)Fas/FasL的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法和脱氧核糖核酸末端转移酶(TDT)介导的原位末端标记(TUNEL)技术,对38例口腔鳞癌TIL的Fas/FasL表达及TIL和癌细胞的凋亡进行检测,观察TIL的Fas/FasL表达与TIL和癌细胞凋亡的关系。结果TIL的Fas和FasL均有广泛的表达,TILFas表达阳性组的TIL凋亡指数(AI)明显高于Fas表达阴性组(P<0.05),TILFasL表达阳性组的癌细胞凋亡指数与FasL表达阴性组差异无显著性(P>0.05)。结论口腔鳞癌TIL的Fas阳性表达与其凋亡有密切关系,而FasL的阳性表达则与癌细胞凋亡无关。癌细胞可能通过Fas凋亡系统诱导TIL的凋亡并通过某种机制逃避TIL的杀伤。