猪2型圆环病毒广东株ORF2基因在大肠埃希氏菌中的表达

应用PCR扩增猪 2型圆环病毒广东株ORF2后部一段基因 ,将PCR产物用KpnⅠ和HindⅢ酶切后与同样处理过的 pBAD/gⅢB载体连接 ,转化TOP1 0细胞后挑取阳性克隆 ,酶切鉴定和测序后 ,用L 阿拉伯糖诱导 ,经SDS PAGE和Western blotting分析 ,表明ORF2基因在大肠埃希氏菌中得到了表达 ,表达的多肽为 2 8ku。

油气管道典型渐变缺陷的漏磁特征研究

基于漏磁检测技术,建立了油气管道典型渐变缺陷的有限元仿真模型,通过分析缺陷类型、几何尺寸对漏磁场的影响,进一步探究了缺陷截面形状特征参数与漏磁信号的对应关系,分析不同缺陷漏磁信号特征的变化规律,对于提高缺陷识别与量化的精度、丰富缺陷样本数据库至关重要。以梯形、阶梯形典型渐变缺陷为研究对象,通过开展仿真模拟研究,进一步探究梯形缺陷与阶梯形缺陷特征参数与漏磁信号的对应关系,为缺陷漏磁场的定性和定量分析提供参考。

猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果

【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在细菌BJ5183内完成重组,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶线性化后转染293细胞,包装成重组腺病毒,然后从致细胞病变、荧光检测及PCR检测等方面对该重组腺病毒进行了鉴定。以该重组腺病毒免疫小鼠,对免疫鼠血清中PCV2的特异性抗体进行检测。【结果】得到了PCV2的ORF1和ORF2基因,pMD18-ORF1-ORF2和pAdCMV-ORF1-ORF2载体构建成功,获得了含有PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒。该重组腺病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中可检测到PCV2的特异性抗体。【结论】成功构建了含PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒,此腺病毒可诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体。

甲基汞对大鼠脑突触体谷氨酸摄取的抑制作用

应用高亲和性摄取试验研究了甲基汞在体外对大鼠脑突触体谷氨酸摄取的影响。结果表明，１×１０－９～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ甲基汞可使大鼠大脑皮层、海马、纹状体和小脑突触体３Ｈ－Ｌ－谷氨酸摄取量分别下降０．７％～７４．４％、７．５％～９１．１％、１．４％～７６．６％和４．４％～７７．０％，其中在１×１０－６～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ范围内均有显著性意义（Ｐ＜０．０５），且均存在明显的剂量—效应关系，其抑制作用的ＩＣ５０分别为７．９、３．６、２．２和４．３×１０－６ｍｏｌ／Ｌ。本研究结果提示甲基汞可明显抑制大鼠脑突触体高亲和谷氨酸摄取功能。

甲基汞对急性分离小脑神经细胞内游离钙水平的影响

[目的 ]研究甲基汞对急性分离的小脑神经细胞 [Ca2 + ] i 水平的影响及其机理。 [方法 ]利用 Fura- 2双波长荧光检测技术。 [结果 ] 1× 1 0 -7～ 5× 1 0 -6mol/ L甲基汞可使大鼠小脑神经细胞 [Ca2 + ] i 水平显著升高 (P<0 .0 1 ) ,且有良好的剂量 -效应关系。[结论 ]甲基汞升高神经细胞 [Ca2 -] i 的作用与胞外 Ca2 +大量内流和胞内储 Ca2 +释放有关 ,且以胞外 Ca2 +内流为主。胞外 Ca2 +内流与 NMDA受体门控 Ca2 +通道以及电压门控 Ca2 +通道有关 ,而与电压依赖性

氧化应激、兴奋性毒性与神经毒性

本文对产生神经毒性的氧化应激和兴奋性毒性机制进行了综述，并讨论了两者在导致神经损伤过程中的相互关系和相互作用。

甲基汞对大鼠脑片谷氨酸释放的影响

用体外放射性标记神经递质释放试验，研究甲基汞对大鼠脑片谷氨酸释放的影响。结果发现１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ甲基汞对大鼠大脑皮层脑片高钾去极化谷氨酸释放无明显影响，而相同剂量的甲基汞可分别使大脑皮层、海马和小脑脑片的自发性谷氨酸释放率增加１９４０％、１１１１％和１８０２％（Ｐ均＜００１）。

单螺杆挤出机分散混炼的改进

对单螺杆挤出机分散混炼机理进行了分析 ,并讨论了目前应用的分散混炼元件 ,解释了其缺乏有效混炼的原因 ,探讨了改善单螺杆挤出机分散性能的方法。

应用ANFIS预测混炼胶粘度

混炼胶粘度是影响混炼胶后序加工过程的最重要的因素之一 ,同时也是影响橡胶制品质量的重要因素 ,因此 ,根据混炼胶的粘度来控制混炼过程是非常必要的。但由于混炼胶的粘度在线测量难度大 ,通过建立有效的预测模型 ,采用计算的方法来预测混炼胶的粘度是一种行之有效的方法。首次探讨了通过应用自适应模糊推理系统 (ANFIS)来建立混炼胶粘度的预测模型 ,并根据已有的实验数据预测了混炼胶粘度 。

铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用

目的 探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn 3a的表达和致凋亡作用。方法 采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型 ,醋酸铅的染毒浓度分别为 0 1、1、10、10 0、10 0 0 μmol L ,对照组给予等量培养液。染毒后 2 4h及 4 8h时MTT法测定各组细胞的存活率 ;免疫组织化学法测定Brn 3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果 引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的最低浓度是 10 μmol L ,醋酸铅浓度越高 ,细胞存活率越低。1μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性细胞积分光密度显著下降 (P <0 0 5 ) ,10 μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性面积比的显著下降 (P <0 0 1)。 1μmol L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的最低浓度 ,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应。结论 铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的 ,并且铅导致培养海马神经细胞Brn

陕西省PCV2感染的血清学调查

2004-01～2005-06，从陕西榆林、宝鸡、西安、渭南、汉中、商洛、安康等7个地区的猪场采集不同口龄猪血清样品237份，用间接ELISA方法进行猪圆环病毒2型（PCV2）感染的血清抗体检测，并用阻断ELISA方法对部分血清样品进行了猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因蛋白的抗体检测。结果表明，未断奶仔猪PCV2血清抗体阳性率为0％（0／40），断奶仔猪为28．6％（2／7），肥育猪为43．7％（31／71）。种公猪为7．7％（1／13），后备母猪为15．6％（7／45），经产母猪为60．4％（29／48），临床上有多系统衰竭综合征（PMWS）疑似症状的13头断奶仔猪的阳性率为61．5％（8／13），237份血清的总阳性率为32．9％（78／237）；PCV2弓PRV混合感染卑为21．7％（5／23）。

陕西省猪伪狂犬病流行病学调查和WG株的分离鉴定

应用gE-EL ISA法对陕西省部分地区6个集约化猪场的187份猪血清进行了伪狂犬病毒(P seu-dorab ies v irus,PRV)野毒感染检测,并对疑似伪狂犬病发病仔猪的内脏及脑组织进行了病毒分离鉴定。结果显示,陕西省猪PRV野毒抗体平均阳性率为28.76%,最高为48.98%,最低为0;分离毒株可致PK-15细胞出现典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20 h左右;细胞培养物和病料混悬液接种家兔均出现典型奇痒症状,PCR反应扩增出PRV gE基因中长度为612 bp的特异性片段。表明本试验分离的病毒为PRV,并将其命名为PRV W G株。

广东省猪生殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因的变异分析

根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近.

猪PRRSV、PCV2、大肠杆菌与沙门氏菌四重混合感染的报道

应用RT-PCR、PCR和细菌分离等方法,对陕西某规模化养猪场发生的仔猪渐进性消瘦、呼吸困难和母猪繁殖障碍为主要特征的疾病进行了流行病学调查和病原分离鉴定。结果表明,该猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)感染相当严重,从出现胸肺粘连的病猪实质脏器中可分离到致病性大肠杆菌和沙门氏菌,未分离到胸膜肺炎放线杆菌。该猪场此次疫情主要是由于猪PRRSV、PCV2、大肠杆菌和沙门氏菌四重混合感染而引起。

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的致病性试验

【目的】研究从江西、湖南发生持续高热的病猪体内分离的4株NSP2基因缺失的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）Jiangxi-3、Jiangxi-4、Hunan-1、Hunan-2的致病力。【方法】通过Reed—Muench法，测定4株PRRSV（第3代）的TCID50，将毒株分别接种PRRSV和猪圆环病毒2型（PCV2）抗原与抗体均为阴性的健康猪，各设同居试验猪，通过检测体温、临床症状观察、RT—PCR、ELISA、病理切片等方法检测病毒的致病性。【结果】4株病毒的TCID50为10^-3.75～10^-4.5／mL。攻毒试验猪和同居试验猪均表现典型猪繁殖与呼吸综合征临床症状，最后试验猪均死亡。病理切片也显示典型的猪繁殖与呼吸综合征病理变化，并在脑组织内检测到PRRSV核酸。【结论】4株PRRSV分离株的致病力增强。

雌性SD大鼠围产期铅染毒对仔鼠脑细胞Brn-3a表达及凋亡的影响

目的探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a表达的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法20只受孕SD大鼠随机分为4组,经围产期饮水染铅(0、0.5、1.0、2.0g/L)后,对其21日龄仔鼠不同脑区的Brn-3a蛋白表达水平进行观察,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率及应用间接免疫荧光反应测定Bcl-2蛋白的表达情况。结果染铅组大鼠大脑皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比、平均灰度与对照组比较,其差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性的变化,Brn-3a表达低于对照组;染铅组大鼠海马组织细胞凋亡率高于对照组(P<0.01);染铅组大脑皮层、海马、小脑部位Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01)。结论铅对发育期神经组织的损害可能与其诱导的神经细胞凋亡相关联,铅致Brn-3a蛋白表达下降可能是铅致神经细胞凋亡的途径之一。

混炼胶中炭黑分散度测定方法的改进

根据胶料混炼的基本原理 ,对炭黑分散度测定方法进行分析 ,并提出改进途径。目前炭黑分散度测定方法主要是直接测定法 ,包括表面观察法、粒径直接测量法、表面粗糙度分析法和改进的显微照相法等。这些方法存在的主要问题是不能综合反映炭黑粒子的分散与分布情况 ,信息量小。可通过建立数学模型计算 (包含“分布因子”)、彩色摄影、对图像进行预处理等方法对显微照相法进行改进 。

母鼠围产期铅暴露对仔鼠不同脑区POU域蛋白表达的影响

目的探讨POU域蛋白在铅的神经毒性机制中的作用。方法受孕雌性大鼠从妊娠第15天开始经饮水染铅(对照饮蒸馏水,试验组醋酸铅低0.5g L、中1.0g L、高2.0g L),至仔鼠出生后21日断乳为止。分别取21日龄仔鼠大脑皮层、海马、小脑部位组织制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法测定不同脑区的Oct2和Brn3a蛋白表达水平。结果显微图像分析表明,染铅组脑组织皮层、海马及小脑的Oct2和Brn3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度与对照组相比其差异有不同程度的显著性(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性的变化。染铅组Oct2表达高于对照组,而Brn3a表达低于对照组。结论POU域蛋白作为转录调节因子参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。