基于铁死亡和自噬研究酒精的致肝脏细胞损伤作用

目的:探索不同浓度酒精作用不同时间对肝细胞、肝星状细胞和肝母细胞瘤细胞铁死亡和自噬的作用及机制。方法:采用不同浓度(0~800 mmol/L)酒精处理AML12小鼠肝细胞株24、48和72 h,处理JS-1小鼠肝星状细胞株和HepG2人肝母细胞瘤细胞株24和48 h;CCK-8法检测细胞活力;油红O染色检测细胞脂质沉积;乳酸脱氢酶(LDH)释放测定细胞损伤水平;Western blot检测细胞活化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1),胶原沉积相关蛋白Ⅰ型胶原(Col Ⅰ),铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1),以及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白水平。结果:(1)酒精抑制AML12细胞活力与时间的延长和浓度的升高相关,脂质沉积呈浓度和时间依赖性增加(P<0.05),酒精作用24 h后LDH释放显著增多(P<0.01),FTH1和SLC7A11蛋白表达在24 h显著下调(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间延长而升高(P<0.01)。(2)50、100和150 mmol/L酒精处理24 h后JS-1细胞活力增强,而酒精处理48 h后细胞活力则受到显著抑制;50和100 mmol/L酒精处理JS-1细胞24和48 h后TGF-β1、α-SMA和SLC7A11蛋白表达均显著上调(P<0.05),各浓度酒精处理后Col Ⅰ蛋白表达均显著上调(P<0.01),GPX4和FTH1表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间延长而降低(P<0.01)。(3)酒精对HepG2细胞活力的抑制作用随时间延长而增强,细胞脂质沉积呈浓度和时间依赖性增加(P<0.01),FTH1和GPX4蛋白表达随时间延长而下调(P<0.01),随酒精浓度增加而下调(P<0.05),酒精处理组SCL7A11蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与对照组相比均显著降低。结论:(1)酒精抑制AML12细胞活力时,铁死亡减弱,自噬增强。(2)低浓度酒精通过增强自噬促进JS-1细胞的活化增殖,而高浓度酒精抑制其活化增殖,且增强SLC7A11下调所致的铁死亡;酒精处理的JS-1细胞自噬强度随时间延长而减弱,铁死亡则依赖时间积累而增强。(3)酒精通过铁死亡增强和自噬受损而抑制HepG2细胞活力和促进脂质沉积。

食管胃结合部腺癌生物信息学分析及Involucrin基因突变位点筛选

目的检测食管胃结合部腺癌(AEG)患者基因突变情况,分析内披蛋白(IVL)突变对肿瘤细胞生物学功能的影响。方法将22例山西地区食管胃结合部腺癌患者的癌组织和癌旁组织进行全外显子组测序,分析IVL的突变情况并筛选IVL突变位点;整理汇总TCGA数据库中食管癌IVL的突变情况,进行GO功能注释和KEGG富集分析。构建IVL过表达质粒,转染食管癌细胞系KYSE150,测定细胞的增殖和迁移能力。体外合成不同突变位点的IVL寡肽,通过体外活性测试分析寡肽与转谷氨酰胺酶1(TGase1)的结合能力。结果测序结果发现在食管胃结合部腺癌中IVL有5处突变;GO分析显示IVL突变与上皮细胞分化、细胞分化调控的活性等生物学过程有关;KEGG信号通路分析显示IVL突变与cAMP信号通路等途径有关。过表达IVL可抑制食管癌细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。突变型IVL寡肽与TGase1的结合能力弱于野生型寡肽(P<0.05)。结论IVL重复基序第7位氨基酸的突变减弱IVL与TGase1的结合,影响多种与肿瘤相关的生物学过程和信号通路。

地铁上的一幕

一天早上,我坐地铁去上学。正值早高峰,车厢内站满了乘客。列车到站停下后,几个乘客下车,又有十多个人挤进了拥挤的车厢,其中有我和一位六七十岁的老奶奶。假如没有接下来发生的一幕,这个平凡的一天也许就这么过去了……“年轻人让让座,让我坐一下!”