脱氧核糖核酸酶1在肾细胞癌中的作用及机制研究

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)患者在手术后对放疗、化疗和靶向治疗均不敏感。前期研究证明,在肝癌中,脱氧核糖核酸酶1(deoxyribonuclease 1-like 3,DNASE1L3)可以分解包膜内的单链和双链DNA,通过弱化糖酵解的限速酶,抑制细胞周期、增殖和代谢。然而,DNASE1L3在肾癌中的作用和相关机制尚不清楚。从癌症基因组图谱数据库(the Cancer Genome Atlas,TCGA)中下载并分析了肾癌RNA测序数据;使用(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库、人类蛋白质图谱数据库和免疫印迹验证DNASE1L3的表达水平;运用免疫相关数据库分析、划痕和侵袭实验,探究了DNASE1L3的作用和潜在机制。结果发现,在TCGA肾癌数据中,DNASE1L3表达量与患者的临床特征显著相关,且与患者生存期呈正相关;过表达DNASE1L3会抑制ACHN和786-O细胞的增殖和侵袭能力。结果表明,DNASE1L3可能成为肾癌患者诊断和治疗的潜在生物标志物。

大鼠OX-62^+树突状细胞的体外诱导及生物学特性

目的 :从大鼠骨髓中有效地诱导、培养OX 6 2 + 树突状细胞 (dendriticcells,DC) ,观察其表型及功能特征。方法 :大鼠骨髓细胞培养 3h ,贴壁细胞加入含重组大鼠GM CSF和IL 4 ,继续培养 6～ 12d ,淘洗法去非粘附细胞中的Fc受体阳性细胞 ,流式细胞仪分析细胞表型及抗原摄取能力 ,混合淋巴细胞反应检测其刺激同种T细胞增殖能力 ,ELISA测定分泌IL 12水平。结果 :培养DC90 %以上表达OX 6 2。培养 6d的OX 6 2 + DCs具有不成熟表型 ,表达中等水平的MHCII抗原和低水平的CD80、CD86、ICAM 1;分泌少量IL 12 ;具有较强的摄取抗原能力 ,但刺激同种T细胞增殖能力极低。培养 12d的OX 6 2 + DC已经成熟 ,MHCII、CD8、CD86、ICAM 1表达明显增加 ;分泌IL 12增加 ;摄取抗原能力下降 ;刺激同种T细胞增殖能力明显增强。结论 :成功建立了体外大量扩增大鼠骨髓OX 6 2 + DC的新方法。

IκBα突变体的真核表达载体构建及表达

目的:构建NF-κB的抑制蛋白IκBα突变体(IκBαM)的真核表达载体,检测其在内皮细胞中的表达。方法:从克隆质粒pSP64TL-IκBαM中用限制性内切酶双酶切IκBαM cDNA片段,克隆到真核表达质粒pcDNA 3.1/myc-His A内构建pcDNA 3.1/myc-His A-IκBαM质粒,并酶切鉴定及测序分析。以脂质体法转染内皮细胞,观察其表达及活性。结果:pcDNA 3.1/myc-His A-IκBαM质粒含有大小正确的IκBαM cDNA碱基片段,其碱基序列为编码目的基因的正确序列。pcDNA 3.1/myc-His A-IκBαM质粒能在内皮细胞中表达,并抑制IL-6分泌。结论:真核表达质粒pcDNA 3.1/myc-His A-IκBαM构建成功,IκBαM蛋白在内皮细胞中表达,并具有良好的生物学活性。

IκBα突变体对激素难治性前列腺癌细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨转染IκBα突变体(IκBαM)基因对激素难治性前列腺癌放疗敏感性的影响。方法:将IκBαM基因转染入激素难治性前列腺癌PC-3M细胞系,采用Western blot法检测癌细胞IκBαM基因表达。X射线照射后,采用MTT比色法检测癌细胞体外生长活性;采用Annexin V-FITC和碘化吡啶双染色流式细胞仪法检测癌细胞凋亡率;采用NF-κB DNA结合ELISA检测癌细胞核内NF-κB活性。结果:Western blot证实转染IκBαM基因的PC-3M细胞表达高水平IκBαM蛋白。采用12GyX射线照射后,pcDNA3.1/IκBαM转染组PC-3M细胞生长活性较未转染组明显减弱;而其细胞凋亡率显著高于未转染组细胞。与未转染组相比,pcDNA3.1/IκBαM转染组细胞核内NF-κB DNA结合活性降低。结论:IκBαM能阻断放疗引起的激素难治性前列腺癌细胞NF-κB活化,增强放疗对癌细胞的诱导凋亡作用。

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对树突状细胞成熟的影响

目的:观察NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对树突状细胞(DC)成熟的影响。方法:利用PDTC作用于体外培养的大鼠不成熟DC,细菌脂多糖(LPS)刺激后,流式细胞仪检测DC共刺激分子CD80、CD86、CD40表达;ELISA分析DC分泌IL-12的变化,NF-κBDNA结合ELISA检测核内NF-κB活性。结果:PDTC抑制DC共刺激分子CD80、CD86、CD40表达;减少DC分泌IL-12;抑制核内NF-κBDNA结合活性。结论:PDTC抑制DC成熟。

基因修饰树突状细胞诱导移植免疫耐受研究进展

在移植免疫反应中 ,树突状细胞 (DC)作为专职抗原提呈细胞 ,既可活化T、B细胞生产免疫应答 ,同时某些类型DC由于缺乏共刺激分子或表达某些抑制性细胞因子而能诱导移植免疫耐受。针对DC提呈抗原及活化T、B细胞的多个环节 ,目前有许多策略将不同目的基因转染不同来源的DC ,让其表达不同的表面分子或分泌免疫抑制因子 。

DIM联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的探讨3,3-二吲哚基甲烷(DIM)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法CCK-8法测定DIM、TRAIL及DIM联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,同时用流式细胞术测定细胞凋亡率,Western印迹检测caspase-3表达水平的变化。结果各给药组与对照组比较均能不同程度抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡,且caspase-3表达上调;DIM与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用。结论DIM与TRAIL联用均可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。

1470 nm激光前列腺剜除术与等离子前列腺电切术对前列腺增生患者性功能的影响

目的:比较经尿道1470 nm半导体激光前列腺剜除术(DiLEP)与传统经尿道等离子前列腺电切术(PKRP)对BPH患者性功能的影响。方法:回顾性分析86例分别接受DiLEP和PKRP的BPH患者的临床资料,评价手术前后患者国际勃起功能评分(IIEF-5)、国际前列腺症状评分(IPSS)、阴茎勃起硬度、射精、性生活及勃起功能等情况。结果:①DiLEP组及PKRP组两组患者术后的IPSS差异无统计学意义(P>0.05);②两组患者术后的IIEF-5均有不同程度降低,PKRP组与术前比较,差异有统计学意义(P<0.01);③DiLEP组、PKRP组勃起功能下降的发生率分别为9.7%、34.2%,PKRP组患者术后勃起硬度下降较为明显,差异有统计学意义(P<0.05);④DiLEP术及PKRP术对BPH患者术后的射精量及性欲无明显影响(P>0.05)。结论:DiLEP术后导致性功能下降的概率较PKRP显著降低。

转染4-1BBL的前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用

目的:观察转染4-1BBL重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1BBL及Ad-eGFP。将Ad-m4-1BBL和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂霉素C(MMC)处理,制成肿瘤细胞疫苗(TCV,TCV-Ad-eG-FP,TCV-Ad-m4-1BBL),经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养,ELISA法检测脾细胞分泌细胞因子(IL-2,INF-γ)的影响,CCK-8试剂检测脾淋巴细胞特异性杀伤活性。结果:转染4-1BBL基因的小鼠前列腺癌细胞瘤苗TCV-Ad-m4-1BBL高表达4-1BBL蛋白,培养上清中细胞因子IL-2[(180.24±2.22)pg/ml]和INF-γ[(1 512.46±23.64)pg/ml]表达水平均明显高于TCV和TCV-Ad-eGFP组(P<0.05),TCV-Ad-m4-1BBL瘤苗诱导RM-1细胞特异性杀伤率[(34.24±2.64)%],相比TCV-Ad-eGFP[(14.65±3.21)%]和TCV[(9.82±1.48)%],差异有显著性(P<0.05)。但针对Hepal-6细胞,3种瘤苗均无效。结论:表达4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞瘤苗能诱导有效的抗肿瘤免疫反应。

犬前列腺组织中诱导型一氧化氮合酶与前列腺增生关系的实验研究

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)与犬良性前列腺增生 (benignprostatichyperplasia ,BPH)病理变化的关系。 方法 建立犬前列腺增生动物模型 ,用免疫组化法研究模型犬各时期iNOS在前列腺组织中的表达。结果 犬前列腺组织中iNOS阳性染色主要分布于腺泡上皮细胞及上皮下组织中 ,间质和平滑肌组织中均为阴性。iNOS的表达随雄激素注射时间延长而降低 ,各时段差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 雄激素对前列腺组织内的iNOS起负性调节作用 。

内皮细胞特异性分子在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的观察不同临床分期肾透明细胞癌的内皮细胞特异性分子(ESM-1)的表达差异,以探讨ESM-1与肿瘤发生及恶性程度的相关性。方法收集肾透明细胞癌组织、正常肾组织以及癌旁组织标本,进行免疫印迹和免疫组化染色,并根据蛋白条带的灰度值和免疫组化结果进行定量评分,同时监测患者血清中ESM-1的表达水平。结果免疫印迹显示肾透明细胞癌标本中ESM-1表达灰度为2.12±0.23,免疫组化显示肾透明细胞癌中ESM-1阳性染色评分为2.1±0.94,相比癌旁组织组和正常肾组织组,差异均有统计学意义(P<0.05);且ESM-1血清中表达量较正常组升高。结论检测ESM-1的表达有助于判断肾透明细胞癌的预后。

iNOS与NO在实验性大鼠慢性细菌性前列腺炎中的表达及意义

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与一氧化氮(NO)在实验性大鼠慢性细菌性前列腺炎中的表达及意义。方法:取30只Wistar雄性成年大鼠随机分为对照组和实验组,每组15只。实验组大鼠前列腺内注射大肠杆菌,制备大鼠慢性细菌性前列腺炎模型;对照组大鼠前列腺内注射0.9%无菌生理盐水。1个月后处死两组大鼠取双侧前列腺组织,一侧制片常规HE染色并应用免疫组化法检测iNOS表达,以HPLAS图像分析系统观察其平均灰度。同时采用分光光度计间接比色法检测另一侧前列腺组织NO含量。结果:iNOS在前列腺炎组织的表达比正常组织明显增多(P<0.01),NO在前列腺炎组织中的含量比正常组织明显增多(P<0.01)。结论:iNOS与NO参与前列腺炎的过程,可为前列腺炎的基础与临床研究提供参考。

蛋白亲环素D基因功能研究进展

蛋白亲环素D(CypD)是细胞器内线粒体的一个重要组成原件,定位于线粒体通透性转换孔。线粒体是细胞的发动机,在能量产生、钙离子(Ca 2+ )内稳态平衡以及细胞死亡、增殖等方面发挥重要作用。CypD是目前线粒体功能研究领域最重要的基因,一直是研究的热点。CypD基因与器官缺血再灌注损伤、氧化应激及肿瘤等病理生理过程密切相关,并干预细胞凋亡及坏死等细胞死亡过程。目前关于CypD在上述过程中的具体机制及潜在的临床治疗作用尚不完全明确,需进一步探明。

囊性肾癌的诊断和治疗现状分析

肾脏囊性变性在肾脏病变中比较常见,是以肾脏出现“囊性病变”为特征的一类疾病。流行病学调查研究显示,60岁以上的人群中至少有1/3发生肾脏囊性病变[1]。肾脏囊性病变可分为单纯性肾囊肿与复杂性肾囊肿,其中以良性单纯性肾囊肿最为多见,可单发或多发于单侧或双侧肾脏,但通常无明显症状[1]。良性单纯性肾囊肿有一系列严格标准定义,任何不符合这些标准的囊性病变均应归类为“非典型”或“复杂性”病变,并将其视为可疑恶性病变[2-3]。

基因干扰技术抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP基因mRNA表达并诱导细胞凋亡

目的研究人前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP基因干扰后其mRNA表达水平及细胞凋亡的效果。方法设计、构建多个针对90K/Mac-2BP的干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA),转染前列腺癌PC-3细胞,筛选出对90K/Mac-2BP基因干扰效率最高的90K/Mac-2BP siRNA,采用RT-PCR、Western blot技术检测90K/Mac-2BP mRNA及蛋白表达,酶标仪测定PC-3细胞的增殖,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率。结果实验组和对照组前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA的表达强度分别为(19.23±1.33)%、(46.34±1.26)%,细胞凋亡率分别为(16.64±1.18)%、(2.52±0.19)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。表明构建的表达载体有效抑制了90K/Mac-2BP mRNA表达并诱导细胞凋亡。结论 RNA干扰可有效抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA和蛋白表达,并诱导细胞凋亡。

蹄铁形肾并粘液腺癌的临床特征(附1例报告并文献复习)

目的:探讨原发于蹄铁形肾的粘液腺癌的临床特征。方法:报告1例原发于肾脏的蹄铁形肾并粘液腺癌患者的临床资料,经行保留肾组织的肾癌切除术,术后病理报告为粘液腺癌。结合相关文献复习对本病其组织发生、临床特点等进行讨论。结果:术后随访1年,未见肿瘤复发。结论:原发于肾盂与输尿管上皮细胞的粘液腺癌罕见,其早期诊断较困难,CT扫描和病理检查有助诊断;手术治疗有较好疗效。

茵陈水溶性提取物体外抗巨细胞病毒效应的实验研究

目的:探讨茵陈水溶性提取物溶液体外抗人巨细胞病毒(HCMVAD169)的效应。方法:采用细胞病变(CPE)抑制法观察茵陈水溶性提取物溶液对HCMVAD169毒株的抑制作用,使用MTT比色法检测细胞的损伤程度,并利用吸光度(A)值评价茵陈水溶性提取物溶液的抗HCMV的效应。结果:茵陈水溶性提取物溶液半数中毒浓度(TC50)为904.49mg·L-1,半数有效浓度(IC50)为195.11mg·L-1mg·L-1,治疗指数(TI)为4.64。茵陈水溶性提取物溶液具有抗HCMV的作用,且其作用随药物浓度的增高而增强。结论:体外实验证实,茵陈水溶性提取物是理想的抗HCMV中药。

IDO基因转染延长同种异基因大鼠移植心脏的存活

目的:了解逆转录基因载体介导的吲哚胺-2,3-加双氧酶(IDO)基因转染能否延长同种异基因大鼠移植心脏的存活时间及机理。方法:把同种异基因大鼠心脏移植模型(Lewis→BN)分成4组,A组为对照组,同种异基因大鼠心脏移植(Lewis→BN);B组:IDO基因转染后的供体心脏移植给受体大鼠;C组:空载体转染供体心脏,再移植给受体大鼠;D组:同种异基因大鼠心脏移植+CsA组(CsA5mg/kg/d×7天)。观察记录移植心脏的存活时间及术后6天组织病理学检查明确排斥反应的诊断和分级,RT-PCR检测术后6天移植心脏TNF-α的mRNA表达,FCM检测外周血活化的T细胞(CD3+CD25+)、有核细胞CD86+表达等方法探讨其机理。结果:A、B、C、D组移植心脏平均存活时间为7.2±0.45、13.2±2.16、7.1±0.62和15.6±3.21天,其中B、D组术后6天CD3+CD25+、有核细胞CD86+表达、供心组织急性排斥反应的强度和TNF-α的mRNA表达较A、C组显著降低(P<0.05),A、C组具有典型重度急性排斥反应特征而B、D组最轻。结论:逆转录基因载体介导的IDO基因转染能够延长移植心脏存活时间的作用,其机理包括抑制反应性T细胞、抑制有核细胞共刺激信号CD86表达、抑制心肌组织表达TNF-α等。

4-1BBL重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建4-1BBL基因重组腺病毒载体,为前列腺癌的免疫治疗奠定基础。方法以质粒pcDNA3-m4-1BBL为模板,PCR法扩增出4-1BBL cDNA,并将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV-m4-1BBL,经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,挑选同源重组质粒,PacⅠ酶切线性化后,转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot法检测4-1BBL表达。结果目的基因经酶切分析,测序鉴定正确,RT-PCR和Western blot证实4-1BBL表达。结论成功构建了含4-1BBL基因的腺病毒载体,该载体可用于前列腺癌的免疫治疗。