反相高效液相色谱法测定两栖动物组织中还原型谷胱甘肽的含量

建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）并测定黑斑蛙（Rana nigromaculata）和中华大蟾蜍（Bufo bujfo gargarizans）幼体与成体组织中GSH含量.样本处理后经高氯酸沉淀,采用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生,338nm波长检测,以甲醇-乙酸盐缓冲液为流动相,测得GSH标准液浓度在25～300μmo/L范围内与峰面积有良好线性关系,相关系数达0.999.GSH外标回收率为99.44%±2.22%,日内和5日日间变异系数（CV）为≤2.21和≤2.35,最低检出限1.1μg/g.结果黑斑蛙和中华大蟾蜍幼体与成体GSH均为皮肤含量最高,达213.4、197.3μg/g和189.7、201.9μg/g,其次为肝脏、脑、全血、脾脏,肌肉组织含量最低,为51.3、16.2μg/g和40.3、14.9μg/g.本方法样本处理简单且具有良好检测灵敏度和精密度,能够满足两栖动物组织GSH含量测定要求.

硒盐对黑斑蛙蝌蚪红细胞微核及核异常的诱导

采用静态水质接触染毒法，研究硒酸钠和亚硒酸钠对黑斑蛙（Rana nigromaculata）蝌蚪红细胞微核及核异常的影响。结果显示，不同质量浓度的硒酸钠（1．25～20mg/L）和亚硒酸钠（0．25—4mg／L）染毒处理7d后，黑斑蛙蝌蚪红细胞的微核细胞率，随染毒剂质量浓度的升高呈先增大后减小的趋势，核异常细胞率、总核异常细胞率均随染毒剂质量浓度的升高而增大。亚硒酸钠的毒害作用明显强于硒酸钠，对黑斑蛙蝌蚪红细胞均存在较强的细胞遗传毒性。

反相高效液相色谱法测定芦笋各段芦丁的含量

采用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）测定芦笋（Asparagus Officnalis Linne）各段组织中芦丁（turin）的含量。芦丁经传统超声波提取法提取，360nm波长检测，以甲醇一磷酸缓冲液为流动相，过ZORBAX Eclipse XDB-C18（4．6mm×250mm）色谱柱直接测定。测得芦丁标准液浓度在2．5～40μg·mL^-1范围内与峰面积有良好线性莱系，相关系数达0．998。尖部、中部和底部的芦丁外标平均回收率为101．14％±1．88％，RSD为2．37％±0．92％，日内和5日日间相对标准偏差（CV）为≤2．27％和≤2．65％，最低检出限0．35μg·mL^-1。检测结果芦笋尖部芦丁含量最高，为1．762mg·g^-1；其次是中部为1．030mg·g^-1；底部最低，为0．320m mg·g^-1此方法样本处理简单且具有良好检测灵敏度和精密度，能够满足芦笋中芦丁含量测定要求。

温度与盐度对刺参(Apostichopus japonicus)生长的影响

采用实验生态学模拟方法,研究了经40d处理后温度与盐度对刺参生长的影响,以特定生长率(SGR)与净增重为参数反映生长状况。结果不同温度与盐度处理对刺参生长的影响均呈先升高后降低趋势。刺参SGR在温度为17℃时达最大值,为2.031±2.772%.d-1,体重净增长量达最大值9.247±12.179g;在盐度为30时达最大值3.067±2.069%.d-1,净增长量12.668±12.717g。根据回归曲线得出刺参最快生长温度是16.8℃,盐度是31。

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49×104,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。

优化条件对蛹虫草菌丝体与胞外多糖得率研究

采用摇瓶法对蛹虫草无性型菌种(ACCC 50383)菌丝体发酵培养,以菌丝体与胞外多糖得率为指标,通过单因素方差分析、S-N-K多重比较和回归方程分析,分别考察6种碳源和6种氮源,确定最适碳源为蔗糖,最适氮源为大豆蛋白胨;对发酵条件的研究表明,获得较高产率的发酵时间为6 d,最适发酵温度为(26.3±0.9)℃,发酵液初始pH值对发酵产率无影响,获得最大发酵产量时装液量为(208±28)mL。

大鼠束缚-浸水应激模型体温降低与应激性胃溃疡的关系

为探讨"束缚刺激"和"冷水刺激"在束缚-浸水应激性胃溃疡形成中各自的作用及体温降低与应激性胃溃疡的关系,本研究检测了束缚-浸水应激和不同温度下单纯浸水应激对胃粘膜和腹腔温度的影响。相同水温下束缚-浸水应激和单纯浸水应激导致大鼠产生同等程度的胃溃疡,表明"冷水刺激"在束缚-浸水应激导致的胃溃疡中起重要作用,而"束缚刺激"不起重要作用。浸水的水温越低,腹腔温度就越低,胃溃疡也就越严重,说明大鼠束缚-浸水应激模型中冷水刺激引起体温降低是胃溃疡的诱发因素。

大鼠束缚-浸水应激不同时间段下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴c-Fos蛋白的表达

研究大鼠束缚-浸水应激过程中下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴c-Fos蛋白表达的时空模式.分别给予雄性大鼠束缚-浸水应激0、30、60、120、180min,0 min作为对照组,然后用免疫组化技术检测HPA轴中c-Fos蛋白的表达.与对照组相比,应激30、60、120、180min组下丘脑室旁核、腺垂体中的c-Fos阳性细胞数显著增多(P<0.05),但对每一部位来说,这4个不同时间段c-Fos舶蛋白的表达均无明显差异.5组大鼠的肾上腺皮质束状带中均未观察到c-Fos蛋白的表达.这些结果提示室旁核和腺垂体参与束缚-浸水应激反应.

“ARTP诱变筛选大肠埃希氏菌营养缺陷型”虚拟仿真实验的构建

“ARTP诱变筛选大肠埃希氏菌营养缺陷型”虚拟实验教学项目的课程软件基于安全、成熟、易用、高性能、先进的虚拟仿真平台架构进行构建。项目具有“实验内容涵盖诱变育种全周期”“避免不良实验结果影响后续实验”“有效缩短实际实验周期”等优势。虚拟实验过程由“虚拟环境+虚拟仪器+虚拟试剂”构成。实验包含4大模块,诱变处理、营养缺陷型浓缩、营养缺陷型检出、营养缺陷型鉴定以及6个主要操作步骤及29个具体操作步骤。学生可通过自主式、案例式的在线学习,掌握等离子体(ARTP)诱变技术的基本原理;学习营养缺陷型菌株的概念及重要意义;学习了解营养缺陷型菌种筛选、鉴定的原理及常用方法;系统学习、掌握通过ARTP技术诱变大肠杆菌并筛选、鉴定其营养缺陷型的方法及操作等实验目的。

埃博霉素-菌蜕系统抑制肿瘤细胞增殖作用

利用大肠杆菌菌蜕搭载埃博霉素B(BG-Epo B),研究其对Hela细胞增殖的抑制作用,并且对搭载条件进行优化。MTT实验结果显示,BG-Epo B对Hela细胞的毒性作用显著大于游离埃博霉素B(Epo B,p<0.05),IC50值为8.2 mg/L,透射电镜观察发现,BG-Epo B对Hela细胞的杀伤力增强。

莲子酸枣仁酵素的功能研究

研究以莲子酸枣仁酵素为目标材料,从酵素成分分析,小鼠睡眠实验验证,抗氧化能力测试和肠道菌群组学解析等物质成分与功能范畴,探究本酵素对改善睡眠质量的功效并进行生物活性评价,旨在为该酵素的潜在功能阐述提供理论依据,同时也为酵素类助眠食品研究提供科学依据,丰富酵素产品类的理论基础,促进人们对酵素和行业的科学认知,扩大酵素的推广应用。

生物技术专业“现代生物技术概论”课程教学改革及实践

伴随着生物技术的迅速发展,新理论、新技术不断更新,其研究和应用范围变得更加广泛,涉及到医学、环境、农业等学科,以及新形成的前沿交叉学科。这使得“现代生物技术概论”课程具有综合性强、涉及面广的特点,也为达到理想的授课效果增加了难度,给授课教师带来了极大的挑战。“现代生物技术概论”课程在不同类型和层次的院校均有开设,使用教材也不尽相同。作者结合自己的教学体会,从教学内容、教学模式等方面对课程改革进行了探讨和总结,以期提高本课程的教学水平,同时为其他院校相关课程的开展提供参考。

RACE法克隆日本三角涡虫β-actin基因

采用cDNA末端快速扩增法(RACE),以日本三角涡虫cDNA为模板扩增β-肌动蛋白(β-actin)基因,对聚合酶链式反应(PCR)产物进行测序和拼接。经与NCBI核酸数据库进行序列比对,结果表明:产物的cDNA长度为1168 bp,开放阅读框ORF长999 bp,编码332个氨基酸,具有actin蛋白家族典型特征。

微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件优化研究

通过稀释涂板法和划线法,从河道污泥、花园土壤、鲈鱼肠道内分离筛选到5株产絮凝剂细菌,经过复筛,得到一株高效产絮凝剂菌株DK-1。其适宜培养条件为：乳糖20 g/L,尿素0.5 g/L,酵母膏0.5 g/L,K2HPO45 g/L,KH2PO42 g/L,NaCl 0.1 g/L,（NH4）2SO40.2 g/L,琼脂15～20 g,双蒸水1000 mL,pH值为7.5～9.5,装液量30～60mL/250 mL,摇床转速160 r/min,37℃培养48～72 h。其发酵液对高岭土悬液的絮凝率高于80%。该菌在3%～5%接种量条件下可获得最短2天的高效产絮凝剂周期,絮凝成分以多糖和蛋白质为主且具有较好的热稳定性,结果表明该菌具有重要的研究前景和应用价值。

产埃博霉素B纤维堆囊菌发酵条件的优化

埃博霉素是纤维堆囊菌产生的一种和紫杉醇具有相同抗癌作用的大环内酯类次级代谢产物。以So ce2161为出发菌株,通过一系列单因素实验确定了对产量影响最大的四个因素,即温度、初始pH、转速、接种量。对四个因素设计正交实验进行发酵条件优化,最终得到最佳实验条件为使用250 m L挡板三角瓶,在温度32℃、初始pH=7.2、转速180 r/min、接种量6%、装液量60 m L/250 m L、发酵时间6 d、种龄60 h条件下,埃博霉素B的产量为46.83 mg/L。

红枣玉竹酵素的功能研究

酵素是以动物、植物、菌类等为原料,经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分的产品,以中药为原料酵素的功效合理评价受到广泛关注。本研究以红枣玉竹酵素为研究样本,基于成分分析、体外和体内生化指标以及小鼠肠道蠕动实验,探究对美容养颜酵素的功效评价。结果根据所得实验数据,推断该酵素具有一定的美容养颜功效。为该类酵素的潜在功能阐述提供理论依据,同时也为酵素类功能食品研究提供科学依据,促进人们对酵素和酵素行业的科学认知,扩大酵素的推广应用。

纤维堆囊菌So ce2161限制修饰系统研究

采用双向电泳技术从So ce2161中未获得内源性质粒,通过对So ce2161培养液、细胞壁及菌体内部DNA核酸酶进行提取纯化,并与外源基因孵育,发现了有较强活性的DNA核酸酶,对DH5α基因组DNA、质粒pET-32a均有降解作用。

低聚半乳糖的研究进展

低聚半乳糖(GOS)是一种具有天然属性的功能性低聚糖,因其具有的理化性质及生理功能独特,在食品、调味品、保健品、医药等领域应用广泛,市场前景非常广阔。文章综述了低聚半乳糖的生产工艺、分离纯化方法以及应用,最后对高纯度的GOS的制备工艺进行了展望。

粘细菌的分离纯化与鉴定

粘细菌的次级代谢产物药用潜力巨大,粘细菌的分离纯化及鉴定对粘细菌的研究而言意义重大。常用的分离方法有食草动物粪便诱导法、滤纸诱导法和细菌划线法;纯化方法有直接纯化法和间接纯化法;鉴定方法除传统的镜检法外目前比较通用的是16S r DNA测序比对法。