银杏叶片可溶性蛋白质测定非直线性原因分析

曾报告用考马斯亮蓝法测定银杏叶片可溶性蛋白质含量缺乏直线性,猜想其可能具有较高的蛋白水解酶活性.研究表明,银杏叶片蛋白水解酶用pH 7.0缓冲液提取时活性最高,酶活最适pH 5.5～6.0,因而不能解释pH 8.3缓冲液提取出的蛋白质含量下降的原因.比较不同的蛋白质测定方法表明,双缩脲法测得的OD540值相当稳定.而考马斯亮蓝法测定的OD595值随时间延长而升高;同样比色5 min.双缩脲法测得的蛋白质浓度比考马斯亮蓝法高20～30倍,说明银杏叶片蛋白质不能迅速溶解于酸性考马斯亮蓝显色液是其测定非直线性的主要原因.