硼替佐米与obatoclax双重阻断蛋白质降解途径对人急性T淋巴白血病细胞具有协同抗肿瘤作用

目的探讨硼替佐米联用obatoclax对人急性T淋巴白血病细胞Jurkat是否具有协同抗肿瘤作用。方法 MTT法检测单用硼替佐米和联用Bcl-2抑制剂(obatoclax,AT-101和ABT-199)对Jurkat细胞活力的影响。采用Western blot方法检测药物对Bcl-2家族蛋白、LC3B、p62、ubiquitin、BiP/Grp78、p-JNK、p-p38和CHOP蛋白表达的影响。硼替佐米和Bcl-2抑制剂对细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR检测未折叠蛋白反应(UPR)关键调节因子的mRNA表达水平。斑马鱼异种移植模型研究单药以及两药联用的体内抗肿瘤作用。结果单用硼替佐米和Bcl-2抑制剂均可抑制Jurkat细胞活力,但联用时仅obatoclax与硼替佐米具有协同细胞毒作用,引起细胞凋亡增多。obatoclax阻断自噬流,伴随LC3B-II和p62的蓄积。此外,单用硼替佐米和obatoclax可诱导泛素化蛋白的蓄积,两药联用对泛素化蛋白蓄积具有协同作用,与药物联用的协同细胞毒作用实验结果一致。硼替佐米和obatoclax联用对蛋白酶体和自噬的双重阻断触发了未折叠蛋白反应,诱导细胞凋亡。内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)可减弱硼替佐米和obatoclax联用的细胞毒作用,减少细胞凋亡。在斑马鱼体内联用硼替佐米和obatoclax显著地减少肿瘤灶形成。结论硼替佐米与obatoclax联用双重阻断蛋白质降解途径对人急性T淋巴白血病细胞具有协同抗肿瘤作用。

基于指纹图谱和多指标定量测定的心脉安浸膏质量研究

目的:采用指纹图谱和多指标定量测定法对心脉安浸膏进行质量控制。方法:采用HPLC法建立心脉安浸膏指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析及主成分分析;对其中儿茶素、芍药苷、人参皂苷Rg_(1)、山柰酚、人参皂苷Rg_(3)、丹参酮Ⅱ_(A)的含量进行测定。结果:建立的指纹图谱和含量测定方法的重复性良好,指纹图谱共确定了18个共有峰,指认出6个成分。10批心脉安浸膏指纹图谱与对照图谱之间的相似度为0.985~0.995,聚类分析和主成分分析均可将样品分为3类;10批心脉安浸膏中儿茶素、芍药苷、人参皂苷Rg_(1)、山柰酚、人参皂苷Rg_(3)、丹参酮Ⅱ_(A)的含量分别为0.916~1.100 mg/g、8.868~9.758 mg/g、44.810~50.812 mg/g、6.628~7.321 mg/g、10.629~11.105 mg/g、12.781~13.189 mg/g。结论:该研究建立的心脉安浸膏HPLC指纹图谱及含量测定方法可为其质量评价提供参考。

阿霉素-甘草酸分子复合物的制备及体外抗肿瘤活性

目的以中药组份甘草酸为载体,按照阿霉素与甘草酸的不同比例制备阿霉素-甘草酸分子复合物(ADR-GL复合物),探究其在pH=7.4下的溶解度差异并初步评价其抗肿瘤效果。方法按照阿霉素与甘草酸摩尔比2∶1,1∶1,1∶2的量(ADR∶GL=2∶1,1∶1,1∶2)投料,采用旋蒸法制备ADR-GL分子复合物并经红外光谱(FT-IR)和差式扫描量热(DSC)分析鉴定所得固体复合物。将ADR-GL复合物溶解于pH=7.4的磷酸盐缓冲液中,过夜超声后3000 r/min离心5 min得ADR-GL复合物饱和溶液,采用高效液相色谱法测定其中的阿霉素溶解度。最后,MTT法测定ADR-GL对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用,及经流式细胞仪测定CD44+MDA-MB-231干细胞所占总MDA-MB-231细胞的比例以初步探究其抗肿瘤活性。结果ADR-GL复合物中阿霉素1525 cm-1红外光谱吸收峰消失,且DSC分析显示ADR-GL在86℃处出现一个明显的新的吸收峰,表明阿霉素可能被甘草酸所包裹而以新的形式存在,称之为“ADR-GL分子复合物”。对照组盐酸阿霉素组在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中溶解度为0.844±0.011 mmol/L,ADR-GL复合物组与对照组相比溶解度均有显著性差异(P<0.05),其中阿霉素与甘草酸摩尔比为1∶2组溶解度最高,为5.562±0.049 mmol/L,是对照组的6.3倍。此外,与阿霉素对照组相比,ADR-GL分子复合物组对HepG2细胞活力的直接影响及对MDA-MB-231肿瘤干细胞群比负作用二者无显著差异。结论ADR-GL不降低阿霉素抗肿瘤活性,其可能是一种潜在的安全的具有开发价值的新颖递药系统。

基于甘草酸为载体的吴茱萸碱胶束的构建及抗肝纤维化活性

构建吴茱萸碱(evodiamine, EVO)-甘草酸(glycyrrhizic acid,GL)胶束,以增强吴茱萸碱的抗肝纤维化效果。首先采用薄膜分散法制备吴茱萸碱-甘草酸EVO-GL,以胶束的粒径、包封率、载药量、吴茱萸碱溶解度为指标,考察不同因素对所制备胶束的影响,筛选出最优处方及制备工艺;然后对最优处方工艺制备的EVO-GL的制剂学性质及对四氯化碳诱导的肝纤维化的治疗作用进行评价。试验结果显示采用薄膜分散法制备的EVO-GL大小均匀,平均粒径为(130.80±12.40)nm,Zeta电位为(-41.61±3.12)mV,包封率为91.23%±1.22%,载药量为8.42%±0.71%,4℃储存3个月内稳定,体外缓慢释放。在治疗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的实验结果显示,EVO-GL抗肝纤维化作用显著,可使肝纤维化大鼠的肝功能指标显著下降。综上,甘草酸作为载体所制备的EVO-GL具有潜在成为抗肝纤维化治疗新药剂的应用前景。

基于CYP3A4酶探讨心脉安片对西地那非的药动学的影响及机制

目的:探究心脉安片对西地那非的药动学的影响,从代谢酶的角度揭示心脉安片对西地那非药动学产生影响的机制。方法:采用HPLC及探针药物法测定心脉安片对西地那非在大鼠体内以及西地那非在肝微粒体孵育体系中的浓度,评价心脉安片与西地那非联用对CYP3A4酶活性的影响。RT-PCR法和Western blot用于评价CYP450的基因表达和蛋白表达水平。结果:心脉安片与西地那非联合用药后,西地那非在大鼠体内的血药浓度增大为原来的2.1倍,清除率降低为原来的54%,AUC升高为原来的1.81倍。与空白组比较,西地那非组的CYP3A4酶活性没有明显变化;心脉安片组及心脉安片+西地那非组与空白组比较发现均明显抑制CYP3A4酶活性;心脉安片组及心脉安片+西地那非组CYP3A4酶mRNA表达量均较空白组显著降低;CYP3A4酶蛋白含量结果表明,心脉安片组及心脉安片+西地那非组与空白组比较CYP3A4酶蛋白含量明显降低。结论:心脉安片与西地那非联用,心脉安片能够通过抑制CYP3A4的基因转录水平抑制其活性,使大鼠体内药动学过程发生变化,使西地那非药物的代谢减慢。