云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于NS组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。

云芝、丹参对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节的作用

目的研究云芝、丹参有效成分抗肿瘤作用及其免疫调节机制。方法建立EAC荷瘤小鼠,并随机分为6组,连续给药30d后,测定其抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数以及外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+。结果运用单因素方差分析进行统计学分析。结果云芝、丹参对肿瘤均有明显的抑制作用(P<0.01);云芝+丹参组胸腺指数高于NS对照组(P<0.05),各用药组胸腺指数明显高于阿霉素对照组(P<0.05);外周淋巴细胞分群:云芝组,云芝+丹参组CD3+、CD4+百分率高于NS对照组(P<0.05);各用药组CD3+、CD4+百分率明显高于阿霉素对照组(P<0.05);除云芝+丹参+阿霉素组外,各用药组CD4+/CD8+比值高于NS组(P<0.05),明显高于阿霉素组(P<0.01)。结论云芝、丹参具有明显的抗肿瘤作用和免疫调节作用,二者联用对免疫调节有一定协同作用,其抗肿瘤机制可能通过提高免疫力来实现。

基因芯片检测吴茱萸碱对小鼠DC细胞功能调控相关基因表达的影响

目的:利用基因芯片技术检测吴茱萸碱对小鼠骨髓来源DC功能调控相关基因表达的影响。方法:分离BALB/c小鼠骨髓细胞,经GM-CSF体外诱导培养10天的未成熟DC细胞(iDC)经不同因素处理并分为:对照组(Ⅰ)、吴茱萸碱组(EVO)(Ⅱ)、内毒素(LPS)组(Ⅲ)、EVO+LPS组(Ⅳ),24小时后收集各组细胞,抽提总RNA,利用SuperArray公司小鼠DC与抗原提呈细胞基因芯片MM-604对细胞功能相关基因进行检测。结果:Ⅱ/Ⅰ上调≥2倍基因7个,下调≥2倍基因10个;Ⅲ/Ⅰ上调≥2倍基因37个,下调≥2倍基因12个;Ⅳ/Ⅱ上调≥2倍基因46个,下调≥2倍基因7个;Ⅳ/Ⅲ上调≥2倍基因24个,下调≥2基因2个,对这些基因功能进行检索分类,主要涉及细胞因子分泌及其受体表达、抗原摄取、抗原提呈、细胞表面受体、信号传导。结论:吴茱萸碱对DC作用涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟,为进一步寻找药物靶点提供了线索。

云芝黄芪有效组分对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:应用云芝黄芪有效组分单方及复方治疗肿瘤小鼠,以此来验证云芝黄芪有效组分单方及复方抗肿瘤的免疫调节活性。方法:建立艾氏腹水癌(EAC)实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组,每组10只:生理盐水组(NS,0.1 mL.kg-1.d-1)、阿霉素单纯化疗组(AMD,4 mg.kg-1.d-1,0.2 mL,连续3 d)、云芝糖肽组(PSP,250 mg.kg-1.d-1,0.2 mL)、黄芪多糖组(APS,250 mg.kg-1.d-1,0.2 mL)、云芝黄芪复方组(PSP+APS,250 mg.kg-1.d-1,0.1 mL)和阿霉素云芝黄芪综合治疗组(AMD+PSP+APS,用量同上)。分别治疗30 d后采用免疫细胞化学法检测荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化情况,计算脏器指数、抑瘤率,并与对照组及化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组和云芝黄芪复方组小鼠的CD3+,CD4+T细胞百分率以及CD4+/CD8+均显著高于对照组(P<0.05),CD8+T细胞的百分率较阿霉素化疗组显著降低(P<0.05);综合治疗组CD3+,CD4+T细胞百分率显著高于单纯化疗组(P<0.05);单纯化疗组小鼠胸腺指数较对照组明显降低(P<0.05),而综合治疗组的胸腺指数显著高于单纯化疗组(P<0.01);并且各给药组肿瘤质量均显著低于NS对照组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、云芝黄芪复方对荷瘤小鼠及经化疗后的荷瘤小鼠均具有免疫增强作用。

基因芯片研究云芝糖肽对健康成人外周血单个核细胞Toll样蛋白受体信号转导通路的影响

目的利用基因芯片技术检测PSP对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)Toll样蛋白信号转导通路的影响,探索云芝糖肽的免疫调节作用机制。方法体外分离、培养健康成人外周血单个核细胞,摸索云芝糖肽的最佳作用浓度,再分为对照组、云芝糖肽组,72h后收获细胞抽提总RNA,应用Toll样蛋白受体信号转导基因芯片检测PSP对健康成人外周血单个核细胞TLRs信号传导通路中相关基因的变化。结果12.5μg/mL的云芝糖肽可显著促进健康成人PBMC增殖转化(P<0.01);经云芝糖肽作用后上调≥2倍的基因有22个,占18.8%(如γ-干扰素、干扰素-γ-诱导蛋白-10等),下调≥2倍的基因有23项,占19.7%(如Toll作用蛋白、共刺激分子CD86等)。结论云芝糖肽可以调节免疫细胞Toll样蛋白受体转导途径中相关基因的表达,为进一步探讨云芝糖肽的免疫调节作用机理提供了依据。

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4+),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8+),B淋巴细胞(CD19+),NK(CD16+CD56+)细胞的绝对数和百分率等的变化。方法收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4+细胞、CD8+细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析。结果四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P<0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P<0.05);但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P>0.05)。结论云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性。

云芝丹参的体外促增殖试验及其临床应用研究

目的通过云芝丹参的体外促增殖试验及对乳腺癌患者的临床应用研究，观察其对机体免疫调节活性的影响。方法采用MTT比色法、流式细胞分析法和ELISA法，分别检测云芝丹参对PHA刺激后的健康成人外周血单个核细胞增殖作用及服用云芝丹参胶囊后的乳腺癌患者外周血淋巴细胞亚群和血浆SIL-2R的浓度。结果体外实验，中低浓度的云芝丹参药液（6．25～200μg／mL）对健康成人PBMC有促增殖作用，高浓度（400μg/mL）时则产生抑制作用；而临床试验中，乳腺癌患者血浆sIL-2R浓度、CD8^＋细胞百分率均显著降低，而B淋巴细胞数量及百分率、CD4^＋／CD8^＋比值和Th细胞的百分率都明显升高。结论云芝丹参胶囊对正常人及乳腺癌患者都具有免疫增强作用。

RNA干扰enolase-1基因治疗胃癌的实验研究

目的:探讨RNA干扰enolase-1基因对人胃癌的治疗作用。方法:根据enolase-1mRNA序列构建表达enolase-1特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)真核表达质粒pMSCVU6/ENO-1si1,pMSCVU6/ENO-1si2,pMSCVU6/ENO-1si3。种植人胃癌SGC-7901细胞于裸鼠皮下建立裸鼠肿瘤模型。将构建成功的三种siRNA质粒分别转染SGC-7901细胞株,pMSCVU6/ENO-1si2和pMSCVU6/ENO-1si3转染裸鼠瘤体内。MTT法检测SGC-7901细胞增殖状况;测量荷瘤裸鼠的肿瘤体积,计算抑瘤率;RT-PCR检测SGC-7901细胞enolase-1mRNA表达;分别以免疫组化SP法和Western blot检测体内外enolase-1蛋白表达。结果:SGC-7901细胞株及裸鼠瘤体均被所采用的质粒成功转染。SGC-7901细胞受pMSCVU6/ENO-1si2转染后,其生长活性受到明显抑制(P<0.01),enolase-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。体内抑瘤实验表明,pMSCVU6/ENO-1si2组平均瘤体积为(380±26)mm3,pMSCVU6/ENO-1si3组与空白对照组分别为(993±124)mm3和(1102±131)mm3;pMSCVU6/ENO-1si2组抑瘤率为65.52%,pMSCVU6/ENO-1si3组为9.89%;pMSCVU6/ENO-1si2组肿瘤体积明显小于pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组,差异具有显著性(P<0.01);pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组之间肿瘤体积无显著差异(P>0.05);pM-SCVU6/ENO-1si2组与pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组相比,enolase-1蛋白表达减弱。结论:表达siRNA的enolase-1基因特异的真核表达质粒能成功转染体内、外胃癌细胞,其中pMSCVU6/ENO-1si2可有效抑制人胃癌细胞的生长。

血清肿瘤标志物检测在盆腔良恶性妇科肿瘤诊断与鉴别诊断中的意义

目的探讨血清肿瘤标志物检测在盆腔良恶性妇科肿瘤诊断和鉴别诊断中的价值。方法对108例健康女性、96例妇科良性肿瘤患者和60例妇科恶性肿瘤患者采用微粒子化学发光分析,检测癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原(CA)125、CA153和CA199浓度,并对结果进行统计学分析。结果恶性肿瘤组CA125、CA199、CA153浓度明显高于健康对照组和良性肿瘤组,差异具有统计学意义(P<0.01),良性肿瘤组CA125、CA199浓度高于健康对照组,其中CA199差异具有统计学意义(P<0.05)。CEA、AFP在3组中浓度差异无统计学意义(P>0.05)。CA125、CA199在良、恶性妇科肿瘤中均有较高的阳性率。结论联合检测CA125、CA199、CA153浓度有助于良、恶性妇科肿瘤的诊断和鉴别诊断。

儿童血液病患者血培养病原菌分布及耐药性分析

目的了解血液病患儿血培养标本中病原菌分布及耐药趋势,为临床合理用药提供参考。方法采用BD BACTTM FX及配套树脂瓶对1 005例患儿血标本进行培养,阳性菌株用VITEK-2Compact系统进行菌种鉴定和药物敏感试验。结果 1 005例血培养标本中检出91株病原菌,其中革兰阳性菌67株(73.7%),革兰阴性菌23株(25.2%);检出率最高的3种病原菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌。凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素、苯唑西林、红霉素、克林霉素和复方磺胺甲噁唑耐药率较高;肺炎链球菌对红霉素、克林霉素、复方磺胺甲噁唑和四环素耐药率较高;未发现耐万古霉素和利奈唑胺的革兰阳性菌;大肠埃希菌主要对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦和第一代头孢耐药比较高。结论凝固酶阴性葡萄球菌是引起血液病患儿合并败血症的主要病原菌,且耐药率较高。

川崎病患儿外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义

目的通过检测川崎病(KD)患儿不同阶段外周血中淋巴细胞亚群绝对值的变化,分析其临床意义。方法采用流式细胞术分别检测31例KD急性期(急性期组),30例KD恢复期患儿(恢复期组)和35例健康儿童(对照组)外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和CD56+水平,并对结果进行比较。结果急性期组CD3+、CD4+、CD8+明显低于对照组,CD19+明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);恢复期组CD3+、CD8+明显低于对照组,CD19+明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);恢复期组CD3+、CD8+明显高于急性期,CD19+明显低于急性期,差异具有统计学意义(P<0.05);CD4+/CD8+和CD56+在三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测淋巴细胞亚群对评估KD患儿免疫状况、诊断和治疗具有重要的临床价值。

单核淋巴细胞比值和红细胞分布宽度在儿童社区获得性肺炎中的临床价值

目的:探讨单核淋巴细胞比值(MLR)和红细胞分布宽度(RDW)在儿童社区获得性肺炎(CAP)中的临床价值。方法:纳入2018年我院呼吸内科收治的105例CAP患儿作为疾病组,根据疾病严重程度将其分为轻度肺炎组(n=92)和重度肺炎组(n=13),并选同期118例健康儿童作为对照组,回顾性分析两组外周血白细胞总数(WBC)、中性粒细胞绝对值(Neu)、淋巴细胞绝对值(Lym)、单核细胞绝对值(Mon)、血小板计数(PLT)、中性淋巴细胞比值(NLR)、MLR、血小板淋巴细胞比值(PLR)、RDW和血小板分布宽度(PDW)。采用非参数检验比较疾病组与对照组、轻度肺炎组与重度肺炎组间各指标差异,使用受试者工作特征曲线(ROC)评价有关指标对CAP的诊断价值。结果:疾病组WBC、Neu、Mon、NLR、MLR和RDW水平均显著高于对照组(P<0.05)。重度肺炎组RDW水平显著高于轻度肺炎组(P<0.05)。ROC分析结果显示MLR曲线下面积为0.864(95%置信区间:0.808-0.921),优于其它指标;最优临界值为0.14,灵敏度为81.00%,特异度为84.70%。结论:CAP患儿外周血MLR升高,对儿童CAP有一定的辅助诊断价值;RDW可作为评估CAP严重程度的参考指标。

EB病毒感染伴特发性血小板减少性紫癜患儿细胞免疫功能研究

目的观察EB病毒感染伴特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血淋巴细胞亚群变化特点,探讨其与ITP的关系及临床意义。方法采用流式细胞技术检测不伴EB病毒感染的ITP患儿、健康体检儿童的各淋巴细胞亚群的水平。结果 ITP伴EB病毒感染组(ITP-EBV组)与ITP非EB病毒感染组(ITP-N组)、对照组比较,CD3+T细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞减少,CD3+CD8+T细胞、CD19+B细胞增加(P<0.05)。结论 ITP伴EB病毒感染存在T淋巴细胞免疫功能异常,应同时进行抗病毒和免疫治疗。

妊娠肝内胆汁淤积症孕妇胎儿呼吸窘迫影响因素研究

目的研究妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎儿呼吸窘迫的影响因素。方法收集2012年1月至2015年3月成都市妇女儿童中心医院ICP患者336例,按照胎儿窘迫的发生情况分为观察组和对照组,分析两组间首次诊断为ICP时生化指标及妊娠结局的差异,并探索ICP患者发生胎儿窘迫的影响因素。结果发病时间、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)以及甘胆酸(CG)在观察组和对照组间的差异均存在统计学意义(P<0.05)。多元Logistic回归分析发现,发病时间、TBA、CG是ICP患者发生胎儿窘迫的影响因素。结论随着母体中TBA及CG的升高及在高胆汁酸环境中暴露时间越长更有可能增加引起ICP患者发生胎儿窘迫的风险。

应用室间质评数据评价实验室内分泌项目检测能力

目的:分析国家卫生计生委临床检验中心室间质量评价(EQA)内分泌项目结果,评价实验室检测能力,以提高实验室检测质量。方法:采用传统室间质量评价、Z比分数和六西格玛评价方法,分析2013-2015年国家卫生计生委临床检验中心室间质量评价内分泌项目结果。结果:2013-2015年共参加国家卫生计生委临床检验中心内分泌室间质评5次,共计350个检测结果。所有项目能力验证(PT)平均分均>80分,偏倚统计分析显示C肽(CP)项目偏差较大;Z比分数评价各项目满意率均>80%;六西格玛分析除2014年CP检测项目方法性能较差,其他项目方法性能均较好。结论:通过不同评价方法分析国家卫生计生委临床检验中心室间质量评价结果,可从不同角度评价实验室检测能力,有助于完善实验室质量管理。

肺结核快速检测技术对肺结核的早期诊断

目的:评价实验室快速检测技术联合临床对结核病患病可能性的早期诊断。方法:依据临床对结核病患病可能性程度的判断将患者分为高、低2组,收集患者痰液标本,同时进行涂片抗酸染色法、荧光定量PCR法和培养法检测,根据最终诊断对不同患病可能性患者的检查结果进行分析。结果:确诊肺结核患者25例;高可能性组涂片抗酸染色法、荧光定量PCR法和培养法阳性率分别为21.43%、28.57%和30.36%,与低可能性组比较差异有统计学意义(P<0.05)。高可能性组涂片抗酸染色法和荧光定量的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值均优于低可能性组。结论:将结核病实验室检测技术与临床对患病可能性的判断相结合,可提高诊断肺结核的准确性。

高危型人乳头瘤病毒感染与女性生殖道常见病原菌和宫颈病变的关系

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与女性生殖道常见病原菌以及宫颈病变的关系。方法:选取2017年1月至2018年6月于成都市妇女儿童中心医院进行宫颈癌筛查的732例妇女为研究对象,所有受试者均行HPV检测、生殖道病原菌检测,判定宫颈病变程度,统计高危型HPV感染及亚型分布特征,分析高危型HPV感染与女性生殖道常见病原菌和宫颈病变的关系。结果:732例妇女HPV感染率为44.95%,高危型HPV占85.11%,HPV-16在高危型HPV中占比最高。生殖道常见病原菌中感染率最高的是沙眼衣原体,感染率为18.99%,存在女性生殖道常见病原菌感染者高危型HPV的检出率高于未感染者(P<0.05),而低危型HPV检出率在女性生殖道常见病原菌感染者和未感染者无统计学差异(P>0.05)。高危型HPV检出率随着宫颈病变程度加重而升高(P<0.05)。结论:高危型HPV感染与女性常见生殖道病原菌感染和宫颈病变程度有关,高危型HPV感染率越高,发生宫颈癌的危险性越大。