20例ABO^(*)AW.37等位基因增强现象的分析

目的分析20例携带ABO^(*)AW.37等位基因的血清学和分子生物学特征,研究等位基因增强现象。方法采用血清学方法检测ABO表型,对ABO基因1~7外显子采用Sanger测序进行基因型检测。结果20例测序均存在ABO^(*)AW.37的特征性变异c.940A>G(p.Lys314Glu)。9例ABO^(*)AW.37与B等位基因同时遗传时正定型抗-A均有凝集,血清学表型均为A_(w)B。而11例ABO^(*)AW.37与O基因同时遗传时正定型抗-A均无凝集;吸收放散5例弱阳性,血清学表型为A_(el);6例吸收放散结果阴性,血清学表型为O型。结论ABO^(*)AW.37基因与B等位基因同时遗传时,存在等位基因增强现象。ABO^(*)AW.37基因与O等位基因同时遗传时,血清学表型为A_(el)或O型,血型鉴定时需注意避免误判。

达雷妥尤单抗治疗患者检出抗-K、抗-Wr^(a)的血清学分析

目的 通过对1例使用达雷妥尤单抗患者的抗-K、抗-Wr^(a)标本特点进行分析,以研究合理的血清学检测途径。方法 选取盐水法、凝聚胺、卡式抗人球蛋白方法、二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)处理、胰蛋白酶处理、木瓜蛋白酶处理等方法,对患者血浆、酸放散液进行意外抗体筛查和鉴定。用K抗原阴性红细胞吸收患者血清后热放散。分析抗体性质,持续检测效价。排除达雷妥尤单抗干扰后进行交叉配血。结果 患者血浆在盐水、凝聚胺介质中检出抗-K、抗-Wr^(a),患者自身放散液中应为达雷妥尤单抗。木瓜酶不能排除达雷妥尤单抗干扰;DTT、胰蛋白酶处理红细胞后可排除达雷妥尤单抗干扰。但DTT处理破坏K抗原,漏检Kell系统IgG抗体;胰蛋白酶处理不影响K抗原,可检出达雷妥尤单抗治疗患者血清中的Kell系统IgG抗体(抗-k)。该患者抗-K为IgM,盐水法效价4,39 d后减弱至盐水法室温不凝集;抗-Wr^(a)为IgG,凝聚胺法效价4,39 d后减弱为1;76 d后抗-K、抗-Wr^(a)均测不出。选择K、Wr^(a)抗原阴性的红细胞输注,安全有效。结论 DTT处理红细胞可排除达雷妥尤单抗干扰,但要注意Kell系统抗体的漏检。为避免达雷妥尤单抗掩盖同种抗体,可联合使用DTT处理、凝聚胺法、胰蛋白酶处理等多种方法。

B(A)04血型鉴定及家系分析

正确鉴定红细胞血型是保证安全有效输血的重要前提。ABO血型是其中最重要的血型系统,通常采用血清学方法正反定型鉴定,但在某些特殊情况下,如红细胞被致敏,同种抗体干扰,ABO亚型等导致血清学正反定型不符合时,可采用基因分型技术和遗传规律分析作为正确判断血型的辅助手段。

A201亚型患者输注A型血致配血不合1例

正确鉴定红细胞血型是保证安全有效输血的重要前提。ABO血型是其中最重要的血型系统,通常采用血清学方法正反定型鉴定。但在某些特殊情况下,如红细胞被致敏,同种抗体干扰,ABO亚型等导致血清学正反定型不符合时,可辅助采用基因分型技术正确判断血型,为临床安全输血提供保障。

P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠中表达的特点

目的:探讨不同P2X家族受体在小鼠急性T淋巴细胞白血病发展中的表达变化规律。方法:制备Notch1过表达小鼠GFP+T细胞急性淋巴细胞白血病移植模型,流式术分选CD45.2+GFP+白血病细胞,实时定量PCR检测P2X受体家族的表达变化,荧光分光光度计检测P2X7受体介导的钙离子浓度的变化。结果:对照组和白血病组小鼠骨髓细胞表达除P2X5外的其他6种P2X家族受体。Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中,P2X7的表达水平逐渐升高,P2X1和P2X3的表达水平逐渐降低,而P2X2、P2X4和P2X6表达水平没有显著变化;分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞中,P2X家族受体的表达呈现相同的规律。对照组和白血病组小鼠骨髓细胞中P2X7受体在激动剂苯甲酰-苯甲酸ATP(BzATP)的刺激下都能介导细胞内钙离子浓度升高,但白血病组小鼠骨髓细胞内钙离子处于持续高浓度状态,而对照组小鼠细胞内钙离子浓度短暂升高后逐渐下降;P2X7介导的这种钙离子反应可被其特异的拮抗剂KN62所阻断。结论:P2X受体家族中P2X1、P2X3和P2X7的表达变化与小鼠急性T淋巴细胞白血病的发展相关,提示其介导的细胞间通讯可能在白血病发展中发挥重要作用。

配体门控性离子通道P2X7受体在肿瘤中的意义

ATP等核苷酸类物质作为细胞间通讯的载体可结合细胞膜上的嘌呤受体调节细胞的功能。嘌呤受体根据结构不同分为P2Y和P2X。P2X7受体是P2X家族配体门控离子通道型嘌呤受体的一员,广泛表达于多种组织,生理功能呈多样性,可受多种因素调控。P2X7受体表达及功能异常与多种肿瘤尤其是血液肿瘤相关,进一步阐明P2X7受体在肿瘤发生、发展中的作用机制具有重要的理论意义和潜在的应用前景。

1939例ABO血型系统新生儿溶血病的血型分布

目的:探讨在母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病(HDN)中的血型分布。方法:对临床表现怀疑为HDN的1939例新生儿进行血清学试验检测,包括新生儿红细胞直接抗人球蛋白试验,红细胞抗体释放试验和游离抗体试验,同时检测母亲ABO血型和RhD血型。结果:1939例婴儿母亲血型均为O型RhD阳性。A型血新生儿818例,其中直接抗人球蛋白试验阳性率17.2%(141/818),红细胞抗体释放试验阳性率89.2%(730/818)。B型血婴儿1121例,其中直接抗人球蛋白试验阳性率10.9%(121/1121),红细胞抗体释放试验阳性率78.6%(881/1121)。结论:ABO血型不合引起的HDN中,A型新生儿比B型新生儿患病几率更大。

未使用新鲜标本交叉配血引起急性溶血性输血反应1例

我们在工作中遇到1例因未使用新鲜标本交叉配血引起的急性溶血性输血反应病例，现报告如下。

抗D抗体干扰ABO血型鉴定1例

笔者近期检测到抗D抗体干扰ABO血型鉴定1例,报道如下。1病历资料患者,女,40岁,无输血史,已生育2胎,第一胎健康,第二胎患抗D引起的新生儿溶血病,经换血治疗后痊愈,第3、4胎为自然流产,现为第5胎足月生产（产后1 h婴儿死亡,未作新生儿溶血病检测）。

抗-M引起的新生儿溶血病1例

目的通过1例由抗-M引起的新生儿溶血病的诊断,探讨孕期进行血型血清学检查的重要性。方法所有试验为血清学方法,按照试剂使用说明书操作。结果新生儿溶血病由母体抗-M引起。结论IgG类型的抗-M能够通过胎盘,进入胎儿体内,引起新生儿溶血病。

膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-SCF和m-SCF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均P<0.01)。K562-M集落形成率显著高于K562-V和K562-S(均P<0.01),且集落形态大于其他两种细胞。结论:m-SCF与C-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。

白血病细胞系来源的P2X_7受体的功能研究

P2X7受体是ATP门控的离子通道。从白血病细胞系J6-1细胞中扩增P2X7受体编码区全序列,克隆到pTARGET真核表达载体,经DNA序列分析后转染Ramos细胞,获得稳定表达细胞株;应用RT-PCR、Westernblot和流式细胞术检测P2X7受体在Ramos中的表达;荧光分光光度计检测P2X7受体介导的胞内钙离子浓度变化。结果显示,J6-1细胞来源的P2X7受体在第559位有一个A→G的有义突变,导致Asn187→Asp187,可在Ramos细胞中表达,在特异性激动剂BzATP作用下可引起胞内钙离子浓度的升高,但所需激动剂浓度高于常规浓度。

重组人凝血因子Ⅷ表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的:构建含有B区缺失型(△760aa-1639aa)人凝血因子Ⅷ(B domain-deleted human FⅧ,BDDhFⅧ)的真核表达质粒,转染HepG2细胞使其稳定表达人凝血因子Ⅷ。方法:将BDDhFVIII基因片段插入pcDNA4/v5-his空载体中构建重组真核表达质粒,测序正确后电转入HepG2细胞,经Ni-NTA纯化,利用Western blot检测凝血因子Ⅷ在HepG2细胞中的表达,持续培养获得稳定表达BDDhFⅧ蛋白的细胞株。结果:经限制性酶切和测序鉴定均证实重组真核表达质粒pcDNA4/v5-his-BDDhFⅧ成功构建,在转染HepG2细胞后,Western blot检测证实人凝血因子Ⅷ可以在HepG2细胞中正确表达。结论:成功构建了人凝血因子Ⅷ的稳定细胞株,并能在HepG2细胞表达目的蛋白。

抗-D免疫球蛋白致敏DEL型孕妇及新生儿红细胞1例

临床资料2017年收检1例新生儿溶血病标本,患儿母亲为O型RhD阴性,无输血史,有2次人工流产史,此为第3胎,孕28周左右进行的不规则抗体筛查结果为阴性,随后自行购买并注射抗-D免疫球蛋白1支。患儿系剖宫产,当天检测非结合胆红素为44μmol/L,2d后出现轻微黄疸。患儿为A型RhD阴性,提示可能有常见的ABO新生儿溶血症。患儿综合治疗19d后出院,出院时非结合胆红素为16.4μmol/L。

母亲抗体筛查阳性与新生儿溶血病发生的分析

目的对送检的14961例疑似新生儿溶血病标本检测,分析患儿母亲抗体筛查结果,查找患儿黄疸原因,为临床诊断治疗和输血提供实验室检测依据。方法选取2012年2月~2017年2月收检疑似新生儿溶血病标本共计14961例,标本均由天津市各级医院新生儿科医师开具医嘱,血型血清学方法检测标本血型;盐水法和微住凝胶法进行意外抗体筛查和抗体特异性鉴定;溶血三项试验检测患儿由血型不合导致的溶血病。结果14961例标本中母亲抗体筛查阴性者共14692例,占98.2%,患儿溶血三项试验显示均为轻症ABO溶血或无溶血症;母亲抗体筛查阳性者共269例占1.8%,其中211例(78.4%)有ABO以外相对严重的溶血症,58例(21.6%)抗筛阳性者含有IgM或IgG的意外抗体,这些抗体或属于冷抗体37℃没有活性,或患儿红细胞没有相应的血型抗原,不造成患儿有相应的溶血病。抗筛阳性者中Rh系统的同种抗体比例最高占72.1%,其中52.4%含有抗D抗体,抗E(和抗cE)占16.4%,抗Ce少见占2.6%,除5例因患儿无相应抗原未发病外,其他者100%发生严重的溶血病。检出MNS系统抗M17例、抗S1例共占6.7%,其中7例为盐水抗体或患儿为NN表型不导致HDN的发生。Lewis系统抗Lea5例占1.9%;P系统抗P12例(0.7%);Kell系统抗Kpb1例(0.4%);冷抗体10例(3.7%);抗体特异性待定者34例(12.6%),其中19例引起不同程度的溶血病;自身抗体者3例(1.1%);Digo系统抗Dia1例(0.4%)。269例抗筛阳性者中,患儿直抗阴性者有68例占25.2%;直抗阳性者高达74.8%,两者之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过本研究提示,提高对ABO及RhD以外新生儿溶血症的认识,加强孕妇,尤其是有输血史或多次妊娠史孕妇的抗体筛查十分必要,一方面保障产妇或患儿临床用血的安全有效,另一方面及早发现并提高溶血病患儿的治愈率。

mM-CSF及其剪切体对淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖的抑制作用

目的探讨膜结合型巨噬细胞集落刺激因子(mM-CSF)及其剪切体(mM-CSF-Δ)对淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖的抑制作用。方法采用Overlap PCR法构建带有m M-CSF的真核表达质粒pTARGET-mM-CSF,再进一步构建胞内区截短30个氨基酸的表达质粒p TARGET-m M-CSF-Δ,并进行PCR及DNA双向测序鉴定。将空载体p TARGET、p TARGET-mM-CSF、pTARGET-mM-CSF-Δ质粒分别转染Ramos细胞,经G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting进行鉴定;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建了m M-CSF和m M-CSF-Δ的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株Ramos-V、Ramos-M和Ramos-Δ。Ramos-M、Ramos-Δ、Ramos-V细胞增殖能力的OD值分别为0.413±0.014、0.384±0.019、0.463±0.037,Ramos-M细胞与Ramos-Δ细胞比较,Ramos-M、Ramos-Δ细胞分别与Ramos-V细胞比较,P<0.05或<0.01。Ramos-M、Ramos-Δ、Ramos-V细胞处于G0/G1期的比例分别为41.54%±1.22%、45.60%±1.09%、39.20%±1.53%,Ramos-M细胞与Ramos-Δ细胞比较,Ramos-M、Ramos-Δ细胞分别与Ramos-V细胞比较,P<0.05或<0.01。结论 mM-CSF、mM-CSF-Δ均能抑制淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖,且后者抑制作用更强。

Th17细胞及其分泌的IL-17在自身免疫性疾病中的作用

辅助性T细胞17(Th17)是一种新型T细胞亚群,能够分泌产生重要效应因子IL-17,IL-17作为炎症介质结合细胞上的IL-17受体引发包括NF-κB、MAPK等途径在内的一系列信号传递而发挥其生物学功能,介导炎症、感染等的发生和发展。自身免疫性疾病是由于机体免疫功能紊乱,对自身抗原发生免疫反应,进而导致自身机体损伤的一种疾病,如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血等均属于常见的自身免疫性疾病。Thl7细胞及IL-17的异常表达和信号传递机制与各种自身免疫性疾病的致病机理研究成为一个热点,这为自身免疫病的防治对策提供新的认识和方案,Th17细胞及IL-17成为自身免疫性疾病一个新的治疗靶标。

2623名患者红细胞不规则抗体筛选结果分析

目的:对红细胞抗体筛选阳性的标本进行红细胞不规则抗体特异性鉴定与分析,为临床安全输血提供帮助。方法:2011年8月至2018年12月天津市各医院送至本中心实验室检测的2623份血液标本,进行红细胞不规则抗体筛选和鉴定;采用低离子强度溶液-抗人球蛋白微柱凝胶卡方法和盐水直接离心方法进行抗体筛选和抗体鉴定。结果:共检出2744个红细胞抗体,其中2139个为同种抗体,509个为自身抗体,96份标本未能确定抗体特异性;在所检出的同种抗体中,Rh系统的抗体最常见,占比为54.7%(其中抗-E 26.2%,抗-c 8.7%,抗-C 7.7%,抗-e 6.9%,抗-D 4.9%),MNS系统、Lewis系统、Kidd系统、P系统、Duffy系统、Kell系统、Diego系统均有抗体检出。结论:在输血前检测中,为预防检出不规则抗体的情况出现,应提前备血,以免由此导致的延迟输血,影响治疗。

特殊复杂的ABO新生儿溶血病个案报道

目的对送检的疑似新生儿溶血病标本检测,查找患儿黄疸原因,为临床诊断治疗和输血提供实验室检测依据。方法血型血清学方法检测患儿及父母的ABO、Rh及其他系统血型;意外抗体筛查和鉴定试验检测产妇血清特异性抗体;库姆、释放、游离试验检测患儿由血型不合导致的溶血病。结果患儿检测出含有ABO血型系统的溶血病,产妇因有多次妊娠和输血史,其血清检出抗E和抗Fyb抗体,但患儿无这两个相应血型抗原,没有产生ABO血型系统以外的溶血病。患儿游离试验检出来自母体的抗E和抗Fyb抗体,因此输血需谨慎,除考虑ABO溶血病给予O型洗涤红细胞外,还要避开抗E和抗Fyb抗体选择相应抗原阴性的血液进行输注。结论新生儿溶血病是常见的新生儿科黄疸性疾病,其治疗关键在于及时,因此新生儿溶血病的实时诊断非常必要,除考虑ABO及Rh D溶血病外,在产妇有多次妊娠或输血史时更应注意ABO以外的血型系统引起的溶血病,这同时对指导新生患儿的临床输血至关重要。

ADAR1同工型基因在小鼠急性T淋巴细胞白血病模型中的表达

本研究探讨RNA编辑酶ADAR1的2种同工型P110和P150在小鼠白血病发展中的表达变化规律。采用Notch1过表达小鼠急性T淋巴细胞白血病移植模型,在发病不同阶段分离骨髓单个核细胞,并在发病晚期用流式细胞术分选CD45.2+GFP+白血病细胞,用实时定量PCR方法检测ADAR1的表达变化。结果表明:对照组和白血病组小鼠骨髓细胞均表达ADAR1的2种同工型P110和P150mRNA;Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中2种同工型的表达水平变化不同;随着白血病的发展,P110的表达水平逐渐升高,而P150表达水平逐渐降低,在移植后的第14天降至对照组的1/4。分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞高表达P110而低表达P150。结论 :ADAR1的亚型P110和P150mRNA在小鼠白血病中的表达变化规律存在差异,提示二者介导的RNA编辑可能在白血病发展中发挥不同作用。