肝移植术后胆道吻合口狭窄处理方法探讨——来自美国匹兹堡大学移植研究所的经验

肝移植术后胆道并发症严重影响肝移植手术患者的生存时间和质量,尤其是胆道狭窄。胆道狭窄根据狭窄发生部位分为吻合口狭窄和非吻合口狭窄,以前者较为常见。在本文中,我们对肝移植术后胆道吻合口狭窄的概念、病因、诊断和治疗进行了探讨,并对美国匹兹堡大学移植研究所处理吻合口狭窄的方案进行了解读,旨在与国内肝移植外科医师进行经验交流。

微小RNA生物功能的研究进展

微小RNA（micmRNA。miRNA）的研究起始于stRNA（small temporal RNA）。1993年Lee等新杆状线虫（C．elegan）中通过基因筛选和定位克隆的方法发现了lin-4．lin-4可以与lin-14基因的3^- UTR（untranslate region）不完全结合．阻断lin-14蛋白的表达却不影响lin-14的mRNA表达水平。抑制幼虫从L1期进入L2期。而后，在2000年，

miRNA检测方法学的研究进展

miRNA是一类新近发现的存在于真核细胞中非编码小RNA,可以调控基因转录后的表达。人们通过获取、检测和验证等方法来研究miRNA及其靶基因。尽管人们已经在各种生物中预测并证实了数百种miRNA,但是miRNA及其靶基因的明确作用机制和功能尚不是完全明了。现就miRNA检测方法学的研究进展作一综述。

壶腹癌影像学诊断方法的研究进展

壶腹周围癌占消化道恶性肿瘤的5％，是低位胆道梗阻的常见原因，主要包括壶腹癌、胆总管下端癌和十二指肠乳头癌。在以往的临床中，胰头癌也归于壶腹周围癌范畴，但研究显示，在肿瘤的生物学特性和转归上二者都有明显不同。

吉西他滨联合索拉非尼对胆囊癌细胞生长侵袭的抑制作用

目的评估吉西他滨和索拉非尼联合用药对胆囊癌细胞株SGC996生长、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用吉西他滨和索拉非尼单独或联合处理SGC996细胞,吉西他滨单独处理组浓度分别为0.1、1.0、2.0、4.0和10.0μg/mL;索拉非尼单独处理组浓度分别为0.1、1.0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L;两药联合处理组:索拉非尼浓度分别为2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L,吉西他滨浓度分别为2.0、4.0和10.0μg/mL。未经药物处理的SGC996细胞作为空白对照组。采用MTT法检测SGC996细胞的生长状况;应用Transwell实验检测SGC996细胞的迁移和侵袭能力。应用FITC-Annexin V/PI双染法检测SGC996细胞的凋亡率。结果索拉非尼可抑制SGC996细胞生长,并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性(P<0.05);同时还可抑制SGC996细胞的迁移和侵袭(P<0.05),但不诱导细胞凋亡(P>0.05)。吉西他滨对SGC996细胞的生长和迁移并无显著抑制作用(P>0.05),但可以抑制细胞的侵袭,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。索拉非尼和吉西他滨联合用药可以抑制SGC996细胞的生长、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论吉西他滨和索拉非尼联合用药对胆囊癌细胞的抑制作用显著强于单独用药,可能成为治疗胆囊癌的有效化疗方案。

雷帕霉素诱导胆管癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)抑制胆管癌QBC939细胞生长的机制。方法:采用WST-1法检测RAPA作用后QBC939细胞的生长状况;观察RAPA作用后QBC939细胞荷瘤的生长状况;应用FITC-Annexin V染色法检测体外细胞凋亡状况;Western blot检测RAPA作用后Fas/Fas L、caspase-8、-3以及细胞色素C(cytochrome C)凋亡相关蛋白的表达变化。结果:RAPA可显著抑制QBC939细胞在体外的生长,并呈现出明显的量效关系,IC50=21.4nM;RAPA可减缓荷瘤组织的生长速度。RAPA可诱导QBC939细胞发生显著凋亡,Fas/Fas L、caspase-8和caspase-3、细胞色素C等凋亡相关蛋白表达亦显著升高。结论:RAPA通过激活死亡受体介导的外源性和内源性凋亡途径诱导QBC939细胞发生显著凋亡,抑制其生长。

药物与非药物联合干预模式在小儿术后镇痛中的作用评价

目的：评估药物与非药物联合干预模式在小儿术后镇痛中的应用价值。方法采用对乙酰氨基酚栓和水合氯醛联合或联合非药物干预处理85例患儿术后疼痛。采用视觉模拟评分法和面部表情分级评分法评估患儿疼痛程度；Ramsay法评估患儿镇静程度；改良耶鲁围手术期焦虑量表和状态焦虑问卷评估患儿及其监护人的焦虑程度；纽卡斯尔量表评估患儿监护人的护理满意度。结果对乙酰氨基酚栓和水合氯醛处理组患儿在镇痛、镇静、焦虑和护理满意度各项评分上并无显著差异。联合干预在大龄患儿的镇痛作用、患儿及其监护人焦虑的缓解作用、监护人的护理满意度方面优于药物干预。结论对乙酰氨基酚栓和水合氯醛可作为小儿术后镇痛的常规用药，非药物干预是小儿术后镇痛中的一个有效补充。

去氧地胆草素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移和糖酵解的影响

目的研究去氧地胆草素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及糖酵解的影响。方法用不同剂量去氧地胆草素分别处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,划痕和Transwell小室实验检测细胞迁移情况,试剂盒检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成水平及关键酶HK2、PFK1、PKM2活性,RT-qPCR法检测关键酶mRNA表达,Western blot法检测关键酶及相关信号通路的蛋白表达。结果去氧地胆草素浓度为5、2.5μmol/L时,分别在24、48 h抑制HepG2细胞增殖和迁移(P<0.05),10μmol/L时能抑制细胞迁移,5~20μmol/L时对细胞葡萄糖的摄取减少(P<0.05),10~20μmol/L时减少乳酸生成(P<0.05),5~20μmol/L时降低糖酵解关键酶HK2、PFK1、PKM2活性(P<0.05),5~20μmol/L时抑制关键酶HK2、PFK1、PKM2 mRNA及蛋白表达,同时也抑制了PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路的活化。结论去氧地胆草素能够抑制HepG2细胞增殖和迁移,降低HepG2细胞的糖酵解水平,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路活化有关。

生长抑素受体在胆囊癌GBC-SD细胞株中的表达及其意义

目的：探讨人胆囊癌细胞株GBC-SD生长抑素受体（SSTR）蛋白及mRNA的表达,为生长抑素（SST）增强多柔比星对胆囊癌化疗敏感性的机制提供理论基础。方法：用免疫组化法及RT-PCR法测定GBC-SD细胞SSTR蛋白及核酸的表达。结果：GBC-SD细胞表达SSTR亚型SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5 mRNA分别为0.31±0.01、0.24±0.01、0.19±0.01、0.05±0.01和0.06±0.01。SSTR1的表达明显高于其他亚型（P〈0.05）。蛋白的表达仅检测到SSTR1～3,分别为38%、62%和90%。结论：人GBC-SD细胞SSTR1～3的表达较高,mRNA以SSTR1为最显著,而蛋白的表达以SSTR3为最高。

影像学技术在胆管癌诊断中的应用

影像学技术是诊断胆管癌（cholangiocarcinoma）的一种重要手段。由于胆管癌的解剖位置、生长方式、组织学分型的不同，其影像学表现是多种多样的。了解胆管癌的各种影像学表现可以准确地诊断胆管癌，鉴别其分型，及评估手术的可行性。随着影像学技术的发展，出现了一些新的诊断技术，比如MRCP、PET等。在临床上综合运用这些影像学技术，对于胆管癌诊断的正确性及治疗方案的可行性，都提供了客观的依据。因此，本文作者就目前应用于胆管癌的影像学技术的研究进展进行综述。

以医院登记为基础的20万例恶性肿瘤患者生存报告

背景与目的:恶性肿瘤是全球重大的公共健康问题,患者生存率是评价恶性肿瘤诊治水平的重要指标。通过描述以医院登记为基础的20万例恶性肿瘤患者的生存情况,以真实世界数据从一个侧面反映我国恶性肿瘤的治疗效果。方法:纳入2008年1月1日—2017年12月31日之间在复旦大学附属肿瘤医院确诊为恶性肿瘤并接受住院治疗的患者共计202542例。通过患者复诊病史资料、电话随访及死因数据链接等方式收集生存随访信息,随访统计时间截至2019年11月30日。应用寿命表法估计各个病种1年、3年和5年总生存率(overall survival,OS),以性别、年龄组、首次治疗时间分层。采用Kaplan-Meier生存曲线绘制各病种的总体生存曲线。结果:患者总体的1年、3年、5年OS分别为89.8%、77.4%和71.0%;男性患者5年OS为58.8%,女性患者为78.7%。在常见的恶性肿瘤中,甲状腺癌患者的5年OS最高,为98.6%;胰腺癌患者最低,为11.4%。2013—2017年首次治疗的乳腺癌、肺癌和肾癌患者5年OS分别为90.0%、55.9%和80.7%,显著高于2008—2012年首次治疗患者,其他肿瘤未见显著上升。结论:大部分恶性肿瘤患者经规范诊治可以获得较为理想的预后,女性生存情况显著优于男性,乳腺癌和肺癌患者的生存改善可能归功于新的临床治疗和早诊手段。

以大型单中心医院登记为基础的2万例癌症转移患者的转移特征及生存分析

背景与目的:恶性肿瘤患者90%的死亡原因为发生远处转移,通过分析以医院登记为基础的2万余例发生转移的恶性肿瘤患者的转移部位分布和转移后生存状况,为恶性肿瘤患者的治疗和生存管理提供真实世界数据支持。方法:基于复旦大学附属肿瘤医院2008—2017年住院就诊的恶性肿瘤患者,纳入20067例初诊或复诊过程中发生转移的恶性肿瘤患者。通过患者复诊病史资料、电话随访及死因数据链接等方式收集生存随访信息。随访起始时间为转移发生时间,随访统计时间截至2020年11月1日。应用Kaplan-Meier法估计各个病种转移后的1、3和5年总生存(overall survival,OS)率。结果:随访中位时间为46.7个月,随访期间全死因死亡13170例。60.05%为单一部位转移,39.95%为多发转移,在所有可转移部位中,转移至肝的比例为33.82%,肺为26.25%,骨为26.22%,脑为9.22%。单癌种中,肺癌患者发生脑转移的比例在所有癌种中最高,为31.14%;胰腺癌患者最易发生肝转移(77.85%),前列腺癌患者最易发生骨转移(83.20%)。分性别来看,男性肝转移占比高于女性(35.46%vs 31.89%,P<0.001),但是转移至肺、骨和脑的比例低于女性(24.96%vs 27.76%,25.26%vs 27.34%,8.34%vs 10.25%,P<0.001)。发生转移后,总体恶性肿瘤的1、3和5年OS率分别为65.59%(95%CI:64.90~66.27)、33.42%(95%CI:32.69~34.16)和21.12%(95%CI:20.39~21.84)。结论:各癌种转移发生的部位倾向性不同,且存在性别异质性,转移发生后的生存率较差,未来可与临床治疗方案结合进行深入研究,以改善晚期恶性肿瘤患者的预后。

不同中药乙醇提取物对酪氨酸酶抑制活性的比较

目的 对几味中药醇提物的美白活性进行研究,为开发中药美白产品提供实验依据.方法 高良姜、白及、白芷、苏木、白术、紫草、艾叶、马齿苋、诃子9味中药采用70%乙醇提取方法 ,以维生素C和熊果苷为阳性对照,采用体外酪氨酸酶抑制法实验,比较不同药物的活性差异.结果 中药诃子酪氨酸酶抑制率为(51.43±2.52)%,高于熊果苷的(46.34±6.32)%.中药艾叶和马齿苋也有一定的抑制酪氨酸酶作用,抑制率分别为(22.88±7.99)%和(13.07±11.98)%.而其他几味中药几乎没有抑制酪氨酸酶作用.结论 中药诃子、艾叶醇提物对酪氨酸酶有一定的抑制活性,可作为美白中药进一步研究.

LncRNA-HOTTIP促进肺癌发生发展的作用及机制研究

目的探讨长链非编码RNA-HOTTIP在肺癌发生发展中的作用和机制。方法通过芯片技术检测肺癌和癌旁组织中的LncRNA表达谱并以Real-time PCR对结果进行验证,分析其表达水平与临床病理因素之间的关系;通过CCK-8实验检测HOTTIP对肺癌细胞增殖的影响、Annexin V/PI双染法检测HOTTIP对肺癌细胞凋亡的影响、Western blot检测HOTTIP对增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。结果HOTTIP在肺癌组织和细胞中表达异常增高,其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期正相关;功能学实验显示HOTTIP在体外可促进肺癌细胞增殖,而沉默其表达则能诱导凋亡;沉默HOTTIP表达可促进bax和caspase-3活性片段增多,抑制bcl-2表达,进而诱导凋亡。miR-137与HOTTIP存在潜在结合位点,并且miR-137表达水平与HOTTIP呈反比。结论 HOTTIP可能通过竞争性结合miR-137,减弱后者的抑癌作用,进而促进肺癌细胞发生发展。

青蒿素联合吉西他滨对结肠癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的评价青蒿素联合吉西他滨对结肠癌细胞株(LOVO、HT29)增殖和凋亡的影响。方法 WST-1法检测联合用药对LOVO、HT29细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染法检测联合用药对细胞凋亡的影响,JC-1法检测联合用药对细胞线粒体势能改变的影响,Western blot法检测联合用药对细胞内p-ERK1/2蛋白表达的影响。结果青蒿素、吉西他滨在体外显著抑制LOVO、HT29细胞增殖,具有浓度依赖性;两者联合能产生协同抑制作用,通过激活线粒体途径介导细胞凋亡;p-ERK1/2蛋白在2种细胞中的表达水平显著高于在结肠正常上皮细胞FHC中;青蒿素可下调p-ERK1/2、bcl-2、线粒体内细胞色素C蛋白表达,并上调bax、胞浆内细胞色素C及Caspase-3表达。结论青蒿素、吉西他滨可通过抑制ERK1/2信号通路激活来诱导结肠癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,两者联合应用有望成为结肠癌新型治疗方案。

分级诊疗中睡眠疾病社区首诊模式的1例病案报道

睡眠障碍患者众多,迫切需要分级诊疗来应对,本文报道1例失眠障碍共病不宁腿综合征、重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征和焦虑抑郁状态的成年女患者在社区接受诊治,取得满意疗效的案例,以此阐述睡眠障碍基层首诊的实施方法,为基层医师提供一个可借鉴的睡眠障碍首诊治疗模式。

生长抑素对胆囊癌细胞株的致凋亡研究

目的通过前期实验发现，生长抑素（somatostatin，SST）作用于胆囊癌细胞株（GBC—SD）后，可显著增强阿霉素（doxorubicin，DOX）的杀伤能力。该实验旨在研究SST对GBCSD细胞的诱导凋亡作用，并探讨其发生机制。方法GBCSD细胞分为4组：单独SST作用组、单独DOX作用组、联合用药组（SST预处理24h后，再加入DOX）和对照组。药物作用24、36、48和60h后，采用FITC—AnnexinV／Pl试验分别检测各组GBCSD细胞的凋亡情况；另外运用Western印迹方法检测SST作用24h后，GBCSD细胞内P53蛋白和Bax蛋白表达的变化。结果SST分别作用24、36、48和60h后，GBC-SD细胞没有出现明显的细胞凋亡，SST的致凋亡作用仅仅表现出微弱的时间依赖性；而在SST作用24h后，GBCSD细胞内的P53蛋白和Bax蛋白的表达都没有明显的变化（P〉0．05）。结论SST不能诱导GBC—SD细胞产生明显的细胞凋亡，P53蛋白和Bax蛋白在其中发挥着重要作用。

生长抑素逆转胆囊癌细胞株耐药性的作用研究

目的探讨生长抑素（SST）逆转胆囊癌细胞株耐药性的作用机制。方法将胆囊癌细胞株（GBC-SD）分为4组：单独SST作用组、单独阿霉素作用组、联合用药组（SST预处理24h后，再加入阿霉素）和对照组。药物作用24、48、72和96h时，采用MTT法观察各组细胞生长曲线。同时，运用Western blot方法检测SST作用后GBC-SD细胞内ICBP90和拓扑异构酶α（Topo Ⅱ α）的蛋白表达的情况。结果单独应用SST对GBC-SD细胞没有明显的生长抑制作用（P〉0．05）；而SST作用于GBC-SD细胞24h时，ICBP90和Topo Ⅱ α蛋白的表达都明显增多（P〈0．05）。结论生长抑素可能是通过上调ICBP90的表达来增加Topo Ⅱ α的表达，从而增强阿霉素的杀伤作用。

胆囊癌血管生成的研究进展

胆囊癌是常见的胆道系统恶性肿瘤之一。肿瘤血管生成在胆囊癌的发病过程中发挥着重要的作用。肿瘤血管生成机制复杂,包括内皮细胞的激活和增殖,细胞外基质的降解及重塑,血管通透性的改变,新生血管的生成及重塑等[1]。肿瘤血管生成可以作为胆囊癌患者预后的评估指标[2]。抗血管生成治疗是抑制肿瘤生长的一种有效策略,目前已有多种抗血管生成剂诞生,并在肿瘤的防治中取得了可喜的成效。然而,