嵌合基因δKρF在转基因小鼠内的组织特异性表达

本文报告了鸡δ晶体蛋白基因的启动子,被Friend脾病灶形成病毒(SFFV)的长末端重复顺序(LTR)取代后的嵌合基因δKpF在转基因小鼠内的表达特性。采用显微注射方法,将含有δKpF基因的重组质粒pδKpF DNA导入小鼠受精卵的雄原核,再将其植入假孕小鼠的输卵管内,经生长发育,产出小鼠35只。以DNA-DNA分子杂交分析,发现其中1只小鼠的基因组DNA中整合有所导入的δKpE基因。再以免疫酶标记方法检测,发现δKpF基因在转基因小鼠内能够表达,而且具有组织特异性。作者认为,与δ晶体蛋白基因组织特异性表达有关的调节顺序位于+677bp之后。这与Hayashi等(1985)以培养细胞研究的结论不一致。

人体小卫星DNA探针的制备

根据人体小卫星DNA核心顺序,化学合成长23碱基寡核苷酸探针,筛选人体基因组文库,旨在获得能用作遗传分析探针的小卫星顺序。结果得到15个含小卫星的阳性重组子。随机取其一(C_(35.9))作探针,试做群体分析。所有个体均可检出多条杂交带。其中某些带具有多态性。在一定检测条件下,检出的DNA图谱在有限的个体内具有个体特异性。结果表明筛选文库得到的小卫星顺序可用于小卫星多态性的检测。其它小卫星探针的筛选和应用性研究正在进行。

人X染色体单拷贝序列的分离及鉴定的研究

本研究以人/鼠(CHO-K1)细胞总DNA为探针对人X染色体DNA文库进行了3轮筛选,单拷贝顺序的检出率为1.45％。其中DXFD52,71,73,75分别与一组含人X染色体及不含人X染色体的人/鼠杂种细胞DNA进行Southern杂交分析,确定DXFD52,71,73,75含人X染色体专性DNA顺序。采用染色体原位杂交的方法,将DXFD52精确定位于Xq12-q13。并对其进行了部分DNA顺序分析,结果证实DXFD52是人基因组中至今未被分离到的一个单拷贝DNA片段。继而对DXFD52进行限制性酶切图谱分析,并以其为探针在中国重庆地区正常人群中(随机个体38例、3个正常家系成员11例)进行了RFLP研究,发现该探针具有识别Hind Ⅲ,Bgl Ⅱ,Hinf Ⅰ的RFLP。

一个完整的人/鼠杂种细胞克隆分布板的建立与鉴定

运用Giemsa染色、G-11分化染色与染色体标记同工酶分析相结合的方法,建立了一个完整的人/中国仓鼠杂种细胞克隆分布板,并进行了鉴定。结果表明,该克隆分布板共包含10个细胞株,对人类的24条染色体均可给出不同的特征性信号,并可用于人染色体的基因定位,对部分缺失的染色体可进行精细的基因区域定位。

重组DNA及其他先进技术在毒理遗传学中的应用

重组DNA等先进研究方法的建立和发展对毒理遗传学产生了巨大影响。目前已能分离单个突变基因,进行结构与功能的详尽分析;确定基因在正常及异常个体中染色体上的位置,深入了解染色体的结构与功能;利用限制性片段长度多态性(RFLP)及其他实验系统迅速地查出单碱基或微小突变的存在并正确地判断突变的性质及位置;重组DNA技术已开始用于癌形成机理的研究以及环境毒物的快速检测;此外,计算机等先进技术也已进入对诱变、致癌剂分子结构分析及环境物质遗传毒性预言等领域。

50例中国人IX因子基因的限制性片段长度多态性

用IX因子基因内探针F9(VⅢ)对TaqI,BamHI和EcoRI酶切的50例中国人基因组DNA进行杂交分析。结果表明,所有个体经TaqI酶切的杂交片段为4.5kb和1.8kb,BamHI和EcoRI酶切的杂交片段分别为23kb和5.0 kb。基因组DNA样本中未发现限制性片段长度多态性(RFLP),这与欧美国家的民族群体中存在着IX因子基因内TaqI和BamHI的RFLP的结论不同。造成不同种族间DNA水平差异的原因,很可能与长期在不同地理环境中的进化适应有关。

人X染色体专性DNA片段的分离和鉴定

用人、鼠(CHO-K1)细胞总DNA为探针,对人X染色体DNA文库进行了三轮筛选。单拷贝DNA顺序的检出率为1.45%,即每筛选100个文库噬茵斑形成单位(plaque forming unit,pfu)可得到一二个单拷贝顺序。其中DXFD52,71,73,75分别与一组含人X染色体及不合人X染色体的人/鼠杂种细胞DNA进行Southern杂交后发现,DXFD52,73,75含人X染色体专性DNA顺序。结果表明,人X染色体DNA文库是获取X专性DNA片段的丰富来源。

Isolation, Mapping, DNA Sequence and RFLPs Studies of Random Single-Copy DNA Segments on Human X Chromosome

Using the total human/mouse DNA as the probe, screening has been carried out three times with in situ plaque hybridization to obtain the single-copy DNA sequence from the human X chromosome genomic library. The effective rate of screening is 1. 45%. DNAs from clones containing single-copy inserts have been analyzed by a panel of hybrid cells with or without human X chromosome. Three segments, designated by DXFD52,73,75, are mapped to the X chromosome. DXFD52 has been precisely localized on Xq12-q13 with in situ chromosomal hybridization. DXFD52 has been partially sequenced. The results indicate that DXFD52 is a new isolated single-copy segment on the X chromosome. Great progress in the RFLPs study with DXFD52 has been achieved in the population of Chongqing, Sichuan Province. The results show that the DXFD52 can be used to detect the RFLP with Hind Ⅲ, Bgl Ⅱ, and Hinf Ⅰ. DXFD52 will be a potential "landmark" for the construction of the complete linkage map of human genome and the analysis of genomic