慢性偏头痛研究进展

慢性偏头痛严重影响人类的生活质量,目前国内还未见慢性偏头痛的相关综述,本文就慢性偏头痛的流行病学特征、诱发因素、预防和治疗、动物模型建立等方面的研究进行综述。

PTEN下调表达对反复发作性偏头痛大鼠模型行为学的影响

目的:探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对反复发作性偏头痛大鼠模型行为学的影响。方法:SD大鼠分4组,对照组(Normal组,n=8),假手术组(Sham+Ad-RFP组,n=8),模型组(IS组,n=15),干预组(IS+Ad R-si PTEN组,n=15)。炎性汤(inflammation soup,IS)刺激大鼠硬脑膜,建立反复发作性偏头痛大鼠模型,干预组在建立模型前1周三叉神经核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)注射Ad R-si PTEN干预,通过畏光、痛阈等方法对大鼠行为学评价。结果:滴注IS后大鼠出现抓耳挠头,过度理毛等症状;9次IS后大鼠的痛阈阈值下降到<2.0 g;12次IS后大鼠表现为恐光,但是下调PTEN能有效逆转上述行为学改变(P<0.05)。结论:下调PTEN基因能有效逆转反复发作性偏头痛大鼠模型的行为学改变,对反复发作性偏头痛具有保护作用。

氟苯尼考琥珀酸单酯的合成工艺优化

以氟苯尼考和琥珀酸酐为原料,4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化合成了氟苯尼考琥珀酸单酯。通过正交试验确定最佳反应条件为:氟苯尼考14 mmol,n(氟苯尼考)∶n(琥珀酸酐)=1.0∶1.5,w(DMAP)=4%,于60℃反应4 h,产率88.1%。在最佳反应条件下做放大实验,氟苯尼考3 kg,产率88.9%

氟苯尼考琥珀酸钠在大鼠体内的药代动力学研究

选取wister大鼠8只作为实验动物,分成8组,按照30 mg/kg(以氟苯尼考计)体重单次肌肉注射氟苯尼考琥珀酸钠,给药后间隔一定时间采血,以HPLC测定血样中氟苯尼考琥珀酸钠、氟苯尼考以及氟苯尼考胺,用BAPP2.0软件对动力学参数进行统计分析.结果表明,单剂量肌内注射氟苯尼考琥珀酸钠后,氟苯尼考、氟苯尼考琥珀酸钠以及氟苯尼考胺药时数据符合一级吸收一室模型,其主要的动力学参数为:Tmax 1 h,0.5 h,8 h;Cmax 6.28,4.50,3.32μg/mL;Vd、AUC、CL/F(s)分别为0.77 mg/L、37.03μg/mL和0.26 L/h;1.05 mg/L、17.22μg/mL、0.62 L/h;0.75 mg/L、85.5μg/mL、0.07 L/h;同时研究还表明氟苯尼考琥珀酸钠进入大鼠体内后,在血液中各种酶的作用下能够迅速的转化为氟苯尼考且能够较快地达到血药浓度峰值,因此提示该产品起效快,维持血药浓度时间较长,在临床上适用于敏感菌所致的急性和重性感染.

氟苯尼考琥珀酸钠抗菌活性研究

研究氟苯尼考琥珀酸钠在体内转化后的抗菌效果,为临床前给药提供一定的理论依据。用微生物法,以抑菌圈直径为指标,考察氟苯尼考琥珀酸钠(前药)转化后对敏感菌的抗菌活性。给大鼠按30 mg/kg肌注前药1 h后,可以达到最大血药浓度4.0μg/mL,与氟苯尼考(母药)的抗菌活性相当。氟苯尼考琥珀酸钠在大鼠体内能够迅速转化为母药而发挥其抗菌活性。

氟苯尼考水溶性前药局部毒性研究

观察氟苯尼考水溶性前药对家兔皮肤和给药部位的刺激性及溶血性。结果表明,只有高浓度前药对皮肤有轻度刺激作用,给药24～48h内恢复正常;高、中、低浓度的前药在观察期内均未发生溶血现象,且溶血率低于5%。研究为氟苯尼考水溶性前药临床安全给药提供了理论依据。

早年慢性应激对青春期病理性攻击大鼠空间学习记忆及海马脑源性神经营养因子、5-羟色胺的影响

目的探索早年慢性应激对青春期病理性攻击大鼠空间学习记忆能力,及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)水平的影响。方法将20只雄性、出生后21d的Sprague-Dawley大鼠分为实验组、对照组,每组各10只。实验组大鼠采用孤养、昼夜颠倒、非奖赏性挫败、预激惹刺激、居住-入侵攻击等多种早年持续性应激方法持续到青春期。然后采用居住-入侵攻击实验检测两组青春期大鼠的攻击性,水迷宫实验观察其空间学习记忆能力,运用免疫组化方法检测大鼠海马内BDNF和5-HT水平。结果 (1)水迷宫实验:实验组大鼠在总路程、穿越目标区域次数、逃避潜伏期3项指标上与对照组差异有统计学意义(P<0.05),而中心区域路程/总路程比值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)免疫组化结果显示:与对照组比较,实验组大鼠海马内BDNF和5-HT免疫阳性神经元数量均减少(P<0.05),BDNF和5-HT表达降低。结论 BDNF和5-HT可能参与了青春期病理性攻击大鼠海马空间学习记忆能力的调控,并在空间学习记忆方面起着重要调控作用。

PTEN、Akt与CREB基因在偏头痛大鼠三叉神经节的表达

目的检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chro-mosome ten,PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,Akt)与cAMP反应元件结合蛋白(cAMP responseelement-binding protein,CREB)基因在偏头痛模型大鼠三叉神经节的表达情况,探讨其在偏头痛发病机制中的相互关系及作用。方法通过硝酸甘油(glyceryl trinitrate,GTN)法建立大鼠偏头痛模型,分别在GTN注射后1、4、12和24h,取三叉神经节通过RT-PCR和免疫组化法对PTEN、Akt和CREB基因在mRNA和蛋白水平进行检测。结果 PTEN的基因与蛋白表达开始呈下降趋势,至GTN12h时分别为(0.42±0.07)(0.19±0.02),较对照组(1.00±0.07)(0.36±0.02)有显著降低(P<0.05),但到24h时基因与蛋白表达量分别为(3.09±0.21)(0.45±0.05),又明显回升(P<0.05);Akt与PTEN呈相反变化趋势,基因与蛋白表达在GTN4h(1.38±0.07)(0.23±0.03)和12h(1.42±0.03)(0.25±0.02)时显著增加(P<0.05),24h(0.88±0.15)(0.15±0.06)表达又降至正常水平(P>0.05);而GTN各组的CREB的基因与蛋白表达均较对照组(1.00±0.07)(0.43±0.03)有显著降低(P<0.05),24h(0.42±0.14)(0.27±0.05)表达量降到最低(P<0.05)。PTEN与Akt、CREB的基因表达呈显著负相关,r分别为-0.671,-0.484(P<0.05),蛋白表达也呈显著负相关,r分别为-0.563,-0.430(P<0.05),而Akt与CREB的基因及蛋白表达相关性不显著,r分别为0.272,-0.041(P>0.05)。结论偏头痛大鼠三叉神经节中PTEN、Akt及CREB在GTN不同时间点表达发生改变,且PTEN调控了Akt与CREB的表达,可能通过影响神经突触可塑性,参与偏头痛的发生发展过程。

早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为及下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为以及大脑下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法将20只SD大鼠分为实验组和对照组。实验组大鼠出生后21 d开始进行社会孤养、日夜颠倒、社会刺激性实验和居住-入侵实验等多种早年应激3周。免疫组化检测下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF的表达。结果实验组在居住-入侵实验和中性环境实验中攻击/威胁比[分别为(12.45±9.27)、(10.84±4.93)]和攻击持续时间[分别为(333.10±76.34)、(322.20±57.67)s]均显著高于对照组(P<0.01),而攻击潜伏期[分别为(15.20±11.07)、(18.30±11.32)s]显著低于对照组(P<0.01),并且表现出暴力攻击行为。免疫组化检测结果显示,实验组下丘脑腹内侧核BDNF表达(0.20±0.09)高于对照组(P<0.05),前额皮质BDNF(0.19±0.08)表达水平低于对照组(P<0.05)。结论早年慢性应激引起青春期大鼠暴力攻击行为以及下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF表达改变,提示青春期暴力攻击行为可能与早年慢性应激所致BDNF表达改变有关。

蛋白激酶C参与大鼠慢性偏头痛中枢敏化

目的:本文旨在研究蛋白激酶C(PKC)是否通过中枢敏化参与慢性偏头痛病理生理过程。方法:SD雄性大鼠随机分为7组,假手术组(n=11),模型组(n=12),模型+溶剂组(n=8),PKC抑制剂4μg组(n=11),PKC抑制剂8μg组(n=10),PKC激动剂100 ng组(n=10),PKC激动剂200 ng组(n=11)。"炎性汤"反复刺激硬脑膜,模拟硬脑膜痛觉感受器的反复激活,建立慢性偏头痛大鼠模型,侧脑室给予PKC抑制剂和PKC激动剂,使用von Frey test测定大鼠面部及后足的机械痛阈值,Western blot检测PKC、CGRP、c-Fos蛋白的表达变化。结果:"炎性汤"反复刺激硬脑膜后,大鼠面部及足底的机械痛阈值显著降低,而三叉神经脊束尾核部位的CGRP、c-Fos及PKC蛋白表达显著增加。使用CHE抑制PKC可以显著增高大鼠面部及足底痛阈值,显著降低CGRP、c-Fos的表达;而使用PMA激活PKC则降低痛阈值,显著增高CGRP、c-Fos的表达。结论:本研究表明PKC可以调节机械痛阈值以及CGRP、c-Fos的表达变化,提示PKC参与慢性偏头痛中枢敏化的病理生理过程。

PSD-95信号通路介导5-HT1A受体激动剂改善大鼠病理性攻击行为的调控机制

目的探索突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)信号通路是否参与并介导5-HT1A受体激动剂对大鼠病理性攻击行为的改善作用及调控机制。方法将成功构建的24只病理性攻击大鼠按照抽签法分为4组,分别为8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ZL006组、ZL006组、Na Cl组,5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)以1 mg/kg每日腹腔注射并持续2周、PSD-95阻断剂(ZL006)以1 mg/kg每隔3天腹腔注射并持续2周。分别在给药前、给药1周后及给药2周后用居住-入侵实验测试大鼠病理性攻击行为变化,且每次居住-入侵实验前取大鼠眼眶后静脉血。取前额叶皮层、大鼠海马及下丘脑组织,用Western blot检测各脑区五羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)、PSD-95及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达,并采用ELISA试剂盒检测血清糖皮质激素含量。结果 8-OH-DPAT组大鼠攻击总数、攻击持续时间及攻击要害部位比在给药1周及2周后均有明显下降(P<0.05);8-OH-DPAT+ZL006组大鼠仅在给药1周后有降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ZL006组前额叶皮层及海马5-HT1A受体表达均高于其余两组(P<0.05);8-OH-DPAT组大鼠前额叶皮层及海马PSD-95表达高于其余3组(P<0.05);且该组海马GR表达低于其余3组(P<0.05);各组大鼠下丘脑5-HT1AR、PSD-95表达差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA结果显示:给药2周后8-OH-DPAT组血清糖皮质激素浓度有明显上升(P<0.05),而其余3组在干预前后血清糖皮质激素无明显变化(P>0.05)。结论 PSD-95信号通路参与并介导了5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对大鼠病理性攻击行为的改善作用,可能是通过对血清糖皮质激素的调控而发挥作用。

国内外磺化应用的研究进展

磺化反应是一类经典的有机反应，随着人们研究的进一步深入，得到的磺化衍生物在医药、化工以及人们的日常生活等诸多方面中显得越来越重要，使得磺化反应在现代化工领域中也占有十分重要的地位。本文对磺化反应在药物结构修饰、有机化工、物质的分离纯化以及环境的综合治理等方面的应用进行相应综述。

ASIC3在慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束尾核的表达

目的:本文通过检测酸敏感离子通道3(acid sensing ion channel 3,ASIC3)在慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)的表达变化,探讨其在慢性偏头痛发病中的作用及可能机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为7组,假手术组(n=18),模型组(n=18),模型+溶剂组(n=5),模型+ASIC3抑制剂5μM组(n=5),模型+ASIC3抑制剂10μM组(n=5),模型+ASIC3激动剂100μM组(n=5),模型+ASIC3激动剂200μM组(n=5)。使用Von Frey纤维丝测定大鼠眶周及足底的机械痛阈值,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测ASIC3 m RNA,蛋白质印迹法(Western blotting)检测ASIC3、CGRP蛋白表达,免疫荧光技术检测ASIC3和CGRP在TNC部位的表达和定位情况。结果:(1)硬脑膜反复给予"炎性汤"后,大鼠眶周及足底的机械痛阈值显著降低(P<0.01);(2)与Sham组相比,CM组大鼠ASIC3在TNC的表达明显升高(P<0.05);(3)给予ASIC3抑制剂后,大鼠眶周及足底机械痛阈值均显著增加(P<0.05),CGRP蛋白的表达也明显降低(P<0.05),而给予ASIC3激动剂后,大鼠眶周及足底机械痛阈值均显著降低(P<0.05),CGRP蛋白的表达明显增加(P<0.05);(4)免疫荧光检测显示在TNC部位,ASIC3主要表达于神经元,且与CGRP有少量共表达。结论:ASIC3在慢性偏头痛大鼠TNC部位表达上调,且通过调节机械痛阈值的变化及CGRP的表达参与了慢性偏头痛的发生发展过程。

NLRP3炎性小体在慢性偏头痛小鼠三叉神经脊束尾核的表达及作用

目的:观察炎性小体NLRP3(Nod-like receptor protein 3)在慢性偏头痛小鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)中的表达变化,并探讨其在慢性偏头痛中的作用。方法:C57BL6/J雄性小鼠随机分为5组,分别为生理盐水对照组(n=16),模型组(n=16),模型+溶剂组(n=8),模型+NLRP3抑制剂5 mg/kg组(n=8),模型+NLRP3抑制剂10 mg/kg组(n=8)。采用腹腔隔日重复注射硝酸甘油(nitroglycerin,NTG)建立慢性偏头痛小鼠模型。使用von Frey test测定小鼠眶周和后足机械痛阈值。Western blot检测NLRP3及神经元活化标志蛋白p-ERK的表达变化,免疫荧光检测NLRP3在TNC的定位情况。结果:反复腹腔注射NTG后,小鼠眶周和后足的机械痛阈显著降低(P<0.05),而TNC部位的NLRP3和p-ERK蛋白表达显著增加(P<0.05)。使用NLRP3的小分子抑制剂MCC950可以显著提高小鼠眶周和足底机械痛阈值,降低p-ERK的表达。荧光染色显示NLRP3与小胶质细胞共定位。结论:本研究表明TNC部位NLRP3炎性小体上调,可能通过影响神经元活化状态参与慢性偏头痛的病理生理过程。

5-HT_(1A)受体激动剂对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质、海马内脑源性及胶质细胞源性神经营养因子的影响

目的探索5-羟色胺1A(5-HT1A)受体激动剂8-OH-DPAT对青春期大鼠病理性攻击行为及对前额叶皮质、海马内脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法出生后21d的雄性SD大鼠42只随机分为6组(n=7):模型组、正常组、模型+药物组、模型+生理盐水(NS)组、正常+药物组、正常+NS组。模型组、模型+药物组及模型+NS组采用早年慢性应激建立病理性攻击模型,余3组正常饲养。建模成功后对模型+药物组、正常+药物组及模型+NS组、正常+NS组分别行2周的8-OH-DPAT(0.5 mg/kg)或生理盐水(2mL/只)腹腔注射。用居住-入侵实验检测大鼠攻击行为,蛋白质印迹分析检测大鼠脑前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组攻击潜伏期缩短(P<0.01)、攻击持续时间及攻击总数增加(P<0.01)。模型+药物组攻击潜伏期较模型+NS组延长(P<0.05);模型+药物组攻击持续时间较正常+药物组增加(P<0.05);药物干预后攻击总数组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组前额叶皮质、海马内BDNF及GDNF表达水平均低于正常组(P<0.01),模型+NS组较正常+NS组降低(P<0.05,P<0.01),模型+药物组较模型+NS组升高(P<0.05,P<0.01)。结论前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF可能与早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为的发生有关。5-HT1A受体激动剂可上调前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF的蛋白表达,并在一定程度上减轻早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为。

P2X4受体在慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束尾核的表达及意义

目的:观察P2X4受体(P2X4 receptor,P2X4R)在慢性偏头痛(chronic migraine,CM)大鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)的表达变化,探讨其在CM中的作用。方法:SD雄性大鼠随机分为5组,对照组(n=12)、模型组(n=12)、模型+溶剂组(n=6)、模型+TNP-ATP30 nmol组(n=6)、模型+TNP-ATP 60 nmol组(n=6)。硬脑膜反复滴注"炎性汤"(inflammatory soup,IS)建立CM模型。von Frey test检测眶周及后足机械痛阈值,Western blot检测P2X4R及神经元激活标志蛋白c-Fos的表达,免疫荧光检测P2X4R定位情况。结果:荧光染色显示P2X4R主要表达于TNC小胶质细胞。与对照组相比,模型组大鼠眶周及后足痛阈值显著降低(P<0.01),P2X4R及c-Fos表达量显著上调(P<0.05)。给予P2X4R抑制剂TNP-ATP后,大鼠眶周及后足痛阈值显著升高(P<0.05),c-Fos表达量显著降低(P<0.05)。结论:TNC小胶质细胞P2X4R表达上调,可能通过影响神经元的激活从而参与CM发病过程。

睾酮对青春期大鼠病理性攻击行为及前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达的影响

目的探讨去势后睾酮水平对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质突触可塑性的影响。方法将30只出生后21d的雄性SD大鼠随机分为去势组、模型组和对照组。去势组和模型组大鼠采用国际通用应激方法建立病理性攻击模型,持续到青春期。采用居住-入侵实验检测青春期大鼠攻击行为,ELISA法检测睾酮水平,蛋白质印迹分析检测前额叶皮质突触后致密物质95(PSD-95)和生长相关蛋白43(GAP-43)表达水平。结果居住-入侵实验结果显示,去势组攻击潜伏期显著低于模型组和对照组(P<0.01,P<0.01),屈服后继续攻击次数高于模型组和对照组(P<0.01,P<0.01)。ELISA检测结果显示,去势组睾酮水平显著低于模型组和对照组(P<0.01,P<0.01),且睾酮水平与攻击各指标呈中-高度负相关(P<0.01)。蛋白质印迹结果显示,去势组前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达水平均低于模型组和对照组(P<0.01,P<0.01)。结论低水平血清睾酮对青春期大鼠前额叶皮质结构可塑性有损伤,可能与其病理性攻击行为相关。

下调PTEN基因对慢性偏头痛大鼠NR2B亚基酪氨酸磷酸化和一氧化氮的影响

目的利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达,探讨PTEN基因对慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基酪氨酸磷酸化(NR2B-pTyr)蛋白表达水平和一氧化氮(NO)含量的影响。方法将SD雄性大鼠分为对照组、对照干预组、模型组和模型干预组。硬脑膜滴注炎性汤(IS)建立慢性偏头痛大鼠模型,TNC注射AdR-siPTEN,7d后观察大鼠行为学改变,检测大鼠TNC内PTEN、NR2B-pTyr和NO含量。结果 AdR-siPTEN可下调慢性偏头痛大鼠模型TNC中PTEN的表达;与模型组比较,IS干预慢性偏头痛大鼠的行为学症状明显缓解,大鼠的TNC内NR2B-pTyr表达水平及NO水平明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PTEN参与调节慢性偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可缓解IS诱导的慢性偏头痛大鼠的疼痛行为学,其机制可能与下调PTEN引起NR2BpTyr表达量及NO水平降低有关。