基于两栖动物的甲状腺干扰物测试方法分析

两栖动物经历一个主要由甲状腺激素(TH)调控的变态发育过程,表现为外部形态和内部组织器官乃至TH靶基因表达的剧烈变化,这为研究和测试甲状腺干扰物提供了一个良好的模型。自2009年以来,经济合作组织(OECD)相继发布了3个基于两栖动物的甲状腺干扰物测试方法导则,即两栖动物变态试验(amphibian metamorphosis assay,AMA)导则TG 231、两栖动物幼体生长和发育试验(larval amphibian growth and development assay,LAGDA)导则TG 241和爪蛙活动胚胎甲状腺试验(X enopus eleutheroembryo thyroid assay,XETA)导则TG 248。目前这些方法已被纳入OECD的内分泌干扰物测试和评估概念框架,用于筛查测试甲状腺干扰物。不同于以自然变态发育为基础的AMA和LAGDA,国内学者发展了筛查甲状腺干扰物的T3诱导爪蛙变态试验(T3-induced Xenopus metamorphosis assay,TiXMA)。为促进对这些方法的理解和应用,本文综述了各方法的原理、终点指标、结果解释和应用现状,初步比较了各方法测试甲状腺干扰物的敏感性和特异性,并提出通过开展更多化学物质测试以对方法进行验证的必要性。

内分泌干扰物测试技术和评估体系

内分泌干扰物是近年来被学术界和国际社会高度关注的一大类污染物,对生态安全和人体健康存在已知的和潜在的危害.本研究介绍了目前国际公认的内分泌干扰物测试方法,主要涉及雌激素､雄激素和甲状腺通路的干扰活性测试;在分析不同级别方法的特点和局限性的基础上,指出内分泌干扰活性检测和不良效应评估不能很好关联是鉴别内分泌干扰物的技术瓶颈;进一步梳理了欧盟､美国等发达国家测试和评估内分泌干扰物的方案或策略,并由此比较了各自的特点和共性;在此基础上,分析了我国内分泌干扰物研究现状及存在的问题,并就我国构建内分泌干扰物测试和评估体系提出几点建议.

斑马鱼中高通量毒性测试方法研究进展和应用现状

基于哺乳动物的传统毒性测试方法存在周期长、成本高、通量低、有动物伦理限制等诸多问题。斑马鱼因为个体小、发育快、易于饲养等特点,适用于构建基于多孔板的中高通量毒性测试方法。本文对基于多孔板的斑马鱼急性毒性、发育毒性、行为和微行为分析等几个中高通量测试方法进行了综述,分析了各自的优缺点及应用现状。另外介绍了高通量测试在自动化操作方面的最近进展。最后分析了斑马鱼中高通量毒性测试方法未来的发展趋势和应用前景,提出应着重开展对现有方法的验证和优化工作,减少对人工的依赖,实现自动化操作和标准化分析,同时开发可更敏感检出发育毒性的分子或者信号通路的测试指标。随着斑马鱼高通量毒性测试方法不断的发展和优化,其在化学物质毒性筛查和风险评估中将发挥越来越重要的作用。

非洲爪蟾在生态毒理学研究中的应用(Ⅲ)——生殖内分泌干扰作用的评价

两栖动物生殖内分泌系统(如性别分化、性腺发育、第二性特征)对性激素的敏感性,使得该类动物可用于研究内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs)对生殖内分泌系统的干扰作用.两栖动物非洲爪蟾是发育生物学研究的经典模型动物,多年来积累的有关其生殖内分泌的资料可以为生殖内分泌干扰的研究提供参考.论文分析了非洲爪蟾作为评价生殖内分泌干扰作用模型动物的理论基础,总结了评价生殖内分泌干扰作用目前使用的几个指标(性别分化、性腺形态、性腺组织学结构、性激素水平、卵黄蛋白原表达等生物标记),综述了非洲爪蟾在评价酚类化合物、阿特拉津、多氯联苯等几种EDCs的生殖内分泌干扰作用中的应用,最后讨论了非洲爪蟾作为一种评价EDCs生殖内分泌干扰作用的模型动物目前存在的问题.毫无疑问,非洲爪蟾是生殖内分泌干扰研究的良好模型动物,为促进该模型动物更好的应用,需要加强非洲爪蟾生殖生物学和内分泌学的研究.

福建省两株HTLV-Ⅰ前病毒外膜区部分env核苷酸序列测定及分析

目的 :了解我国福建省HTLV Ⅰ感染的来源和亚型。方法 :对福建省发现的两株HTLV Ⅰ ,用PCR扩增HTLV Ⅰ部分env 5 2 2bp的片段 (gp46 5’末端和 gp2 1的大部分 ) ,全自动测序仪测序 ,并分析此两株HTLV Ⅰ与HTLV Ⅰ各亚型代表株的核苷酸、氨基酸的同源性。结果 :获得福建省两株HTLV Ⅰ的部分env核苷酸序列 (6 0 6 5～ 6 5 44 )和编码氨基酸序列 (2 96～ 45 5 )。结论 :福建省的这两株HTLV Ⅰ与日本的HTLV Ⅰ (MT2和H5 )核苷酸、氨基酸序列接近 ,属A亚型。

复方氧氟沙星溶液的抗菌效果及毒性实验研究

目的选择复方氧氟沙星溶液的最佳组合,用于防治气管切开术后下呼吸道的感染。方法选用高、中、低三种不同剂量的氧氟沙星、沐舒坦和糜蛋白酶,按正交设计方法配置成复方氧氟沙星溶液的四种组合,采用NCCLS推荐的标准纸片,扩散法进行抑菌试验,经过测试和观察其抗菌效果,选择对呼吸道易感菌抗菌活性最高的药物组合,进行药物毒性试验,结果第三批药物组合抗菌活性最高,毒性甚少,临床应用安全可靠。结论复方氧氟沙星溶液可进行防治气管切开术后下呼吸道感染的药物临床试验。

气管切开术后气道管理方法的探讨与研究

目的:观察应用“待气管如血管”观念对气管切开术后患者进行气道管理组(实验组)与我院目前常规气道管理组(对照组)肺部感染发生率有无差别及统计学意义。方法:将98例气管切开术后患者随机分为实验组和对照组,观察气管切开48h后患者体温变化、痰液性状、听诊肺部有无音、X线胸片、痰培养结果,判断患者有无肺部感染发生。结果:实验组肺部感染发生率明显低于对照组(P<0.01)。结论:严格执行无菌操作,“待气管如血管”在降低气管切开术后肺部感染发生率中起着非常重要的作用,目前气管切开术后气道管理方法急待规范。

1例双侧颌下间隙感染并发感染性休克患者的护理

总结1例颌下间隙感染并发感染性休克患者的护理经验。护理要点:严密观察病情,及早预防和发现休克;利用PiCCO监测技术指导其液体复苏;采用连续肾脏替代疗法(CRRT)改善患者的生化指标及生命指标;充分评估患者,做好压力性损伤、管路、疼痛、营养失调等风险管理和控制,患者转危为安,治愈出院。

嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ、Ⅱ型的流行、传播及相关疾病

嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ、Ⅱ型(HTLV-Ⅰ、Ⅱ)是两种C型逆转录病毒。可通过母乳、输血、性接触、静脉吸毒共用针头等途径传播。目前已发现了几个大的流行区,并确定了HTLV-Ⅰ与某些疾病有关。本文就HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的流行、传播和相关疾病作一综述。

水和生物样品中痕量多氯联苯的分析方法研究

建立了一种水和生物体中痕量多氯联苯的提取、分离以及定性定量分析的新方法.本方法利用超声提取或液液萃取进行提取、硫酸硅胶柱和弗罗里土柱进行净化和分离,毛细管气相色谱进行分析,并优化了硫酸硅胶柱和弗罗里土柱净化分离多氯联苯的条件.水中痕量多氯联苯同类物的平均回收率为82%～115%;检出限为0.009～15.3 ng/L,生物样品中痕量多氯联苯同类物的平均回收率75%～135%;检出限为0.02～96.9 ng/g;相对标准偏差(RSD)均小于6.9%.方法用于实际水样和生物样品中痕量多氯联苯的分析,取得满意结果.

双酚A与其替代品对黑斑蛙急性毒性的比较

双酚F(BPF)和双酚S(BPS)作为双酚A(BPA)替代品广泛使用,然而有关BPF和BPS的毒性数据非常有限。采用系列浓度的BPA、BPF、BPS溶液,暴露黑斑蛙胚胎和蝌蚪96 h,通过半致死浓度(LC50)、最小生长抑制浓度(MCIG)和致畸率等指标比较3种化合物的急性毒性。结果显示:100 mg·L-1BPS未导致黑斑蛙胚胎及蝌蚪畸形和死亡。BPA和BPF对黑斑蛙胚胎的96h-LC50分别为7.68 mg·L-1和7.99 mg·L-1,MCIG分别为4.47 mg·L-1和4.77 mg·L-1,最大致畸率为33.33%;对蝌蚪的96 h-LC50分别为9.00 mg·L-1和9.52 mg·L-1。依据《化学农药环境安全评价准则》的毒性分级标准,判定BPA和BPF的毒性等级为中毒,BPS的毒性等级为低毒。表明BPF急性毒性与BPA相当,BPS急性毒性低于BPA。本研究数据可为BPF、BPS作为BPA替代品的生产和使用以及相应的环境管理提供毒理学参考。

分散液相微萃取气相色谱/气相色谱质谱法测定白洋淀水中多溴联苯醚

建立了分散液相微萃取(DLLME)与气相色谱-微池电子捕获检测器(GC-μECD)、气相色谱-质谱(GC/MS)联用快速测定水样中42种多溴联苯醚(PBDEs)的新方法。以氯苯(25μL)为萃取剂,乙腈(1.0mL)为分散剂,混匀后注入5.00mL水样中,以3000r/min离心15min,取出下层有机相氮气吹干、定容后取1μL进样分析。在最佳条件下,PBDEs能够被充分提取和良好分离,在2.0～250.0μg/L浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.9982～0.9999;检出限为0.2～4.9μg/L(S/N=3)。将本方法应用于白洋淀水中PBDEs的分析检测,样品中均有BDE-166和BDE-209的检出,对水样进行两个浓度水平(0.017和0.170μg/L)的加标实验,回收率为71.4%～110.8%,相对标准偏差为0.99%～11.84%(n=3),能够满足环境水样中痕量PBDEs的测定要求。

异噻唑啉酮类杀菌剂对黑斑蛙胚胎和蝌蚪的急性毒性

异噻唑啉酮类杀菌剂1,2-苯并异噻唑-3-酮(BIT)和甲基异噻唑啉酮(MIT)虽已在多种行业中广泛使用,但目前有关其毒性尤其对水体中生物毒性的数据还较少。鉴于BIT和MIT在水体中普遍存在,本文研究了这两种污染物对两栖动物黑斑蛙胚胎和蝌蚪的急性毒性。黑斑蛙胚胎和蝌蚪分别暴露系列浓度的BIT和MIT,观察化学品对其生长、发育和运动的影响,计算96小时半数致死浓度(96 h-LC50)和96小时半数致畸浓度(96 h-TC50),确定最小生长抑制浓度(MCIG)。结果发现,BIT对黑斑蛙胚胎的96 h-LC50和96 h-TC50分别为2.99 mg·L-1和0.60 mg·L-1,MCIG小于0.40 mg·L-1,对蝌蚪的96 h-LC50为6.44 mg·L-1。MIT对黑斑蛙胚胎的96 h-LC50和96 h-TC50分别为5.30 mg·L-1和2.36 mg·L-1,MCIG为2.59 mg·L-1,对蝌蚪的96 h-LC50为7.58 mg·L-1。根据《化学农药环境安全评价准则报批稿》中两栖动物蝌蚪急性毒性的分级标准,判定BIT和MIT的毒性等级为中等。该毒性数据可为异噻唑啉酮类杀菌剂的环境管理提供参考。

两栖类动物在环境毒理学研究中的应用

两栖类动物(amphibian)在食物链中具有水陆两栖的独特地位,其生活周期比较复杂,幼体生长速度快,卵、鳃和皮肤具有渗透性,污染物能在其体内富集。这些特性使其成为监测环境污染的前哨物种,在环境毒理学研究中发挥着越来越重要的作用,该文以非洲爪蟾(Xenopuslaevis)和牛蛙(R.catesbeiana)为例综述了其在环境毒理学(急性毒性试验、蛙胚胎致畸试验、变态试验、微核试验)及环境内分泌干扰物检测等研究中的应用。

除草剂乙草胺对非洲爪蟾性腺发育的影响

使用性腺发育对内分泌干扰作用敏感的两栖动物非洲爪蟾作为模型动物,通过考察性别比、性腺整体形态和组织学形态来揭示乙草胺对其性腺发育的影响,从而确定乙草胺是否具有内分泌干扰活性.46/47期蝌蚪经不同浓度(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1)的乙草胺暴露处理至变态后1个月,在变态结束后3个月时,解剖性腺、鉴别雌雄并固定性腺做组织切片.实验中对照组所有性腺都为典型的卵巢或睾丸,雌性百分率为48.78%(20/41).而乙草胺暴露组却出现了明显的异常睾丸,其总体上是睾丸,但又带有部分卵巢的特征,在统计性别时将具有异常睾丸的爪蟾归为雄性.5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1暴露组的雌性百分率分别为:57.14%(24/42)、66.67%(22/36)、55.26%(21/38).虽经统计分析无显著性差异,但乙草胺暴露组中雌性多于雄性的趋势和出现带有雌性特征的雄性的现象,一定程度上却暗示了乙草胺可能对非洲爪蟾的性腺发育有雌性化作用.正常睾丸的组织学结构应有发育成熟的生精小管,其内有各个时期的精子囊和生精细胞及精子.但经乙草胺处理的爪蟾睾丸却表现出几种明显的异常:没有生精小管,相反却像发育早期的睾丸一样,充满大量的精原细胞,完全没有生精细胞和精子;有生精小管结构,但其内精子囊结构不明显,生精细胞少并且排列混乱,其间有很大的空隙;睾丸出现腔隙,并有大量体细胞存在,这种结构与57期的卵巢相似;睾丸中出现异常的生精细胞,与58期卵巢的卵细胞相似;睾丸组织中有明显的卵细胞散布.组织学研究发现的乙草胺导致的睾丸结构证明了乙草胺对非洲爪蟾的睾丸发育有抑制雄性化作用和雌性化作用,即乙草胺对非洲爪蟾的性腺发育有内分泌干扰作用.

除草剂西玛津对非洲爪蟾生存和性腺发育的影响

为了研究三嗪类除草剂西玛津对两栖动物非洲爪蟾（Xenopuslaevis）生存和性腺发育的毒性作用，并且与另一种三嗪类除草剂阿特拉津的毒性进行比较，将非洲爪蟾从46／47阶段开始暴露西玛津和阿特拉津到变态1个月后停止，再饲养2个月后将其解剖，取性腺做形态学和组织学观察，暴露期间，每天记录蝌蚪的生长发育情况和存活率，结果显示，在暴露的第1周内（蝌蚪处于46～50阶段），西玛津可导致蝌蚪死亡率明显升高，随后的时间内西玛津对非洲爪蟾的生存不再有明显影响，但却使发育阶段明显的不整齐，阿特拉津对非洲爪蟾的生存和发育则没有明显影响，西玛津和阿特拉津对非洲爪蟾性腺的总体形态和性别比没有明显影响，然而两种除草剂均在一定程度上导致了睾丸组织学的改变，西玛津可能与阿特拉津一样能够通过雌性化／去雄性化作用影响非洲爪蟾睾丸的发育。

全氟辛烷磺酸盐(PFOS)及其替代品对两栖类胚胎的发育毒性

用非洲爪蟾胚胎致畸实验和黑斑蛙胚胎发育毒性实验,比较研究了PFOS及其4种替代品对两栖动物胚胎的发育毒性。结果发现,用调聚法合成的织物三防整理剂和50%的全氟丁基有机铵盐阳离子表面活性剂同PFOS一样对非洲爪蟾胚胎有明显毒性,且织物三防整理剂和表面活性剂的毒性强于PFOS;电解氟化法合成的C4织物及C6织物三防整理剂(以下简称C4及C6织物三防整理剂)对非洲爪蟾胚胎没有明显毒性。与非洲爪蟾不同,PFOS和4种替代品对黑斑蛙胚胎没有明显毒性。结果显示,从生物安全性的角度分析,C4和C6织物三防整理剂可作为PFOS的替代品使用,而织物三防整理剂和表面活性剂的毒性比PFOS大,作为PFOS替代品使用需要慎重考虑。

全氟辛烷磺酸盐(PFOS)及其替代品对两栖类蝌蚪的急性毒性

PFOS及其4种替代品对两栖动物非洲爪蟾和黑斑蛙蝌蚪的急性毒性结果为:用调聚法合成的织物三防整理剂对非洲爪蟾蝌蚪和黑斑蛙蝌蚪的96h-LC50分别为8和21mg·L-1,而PFOS对两种蝌蚪的96h-LC50分别为92和81mg·L-1。此实验结果说明织物三防整理剂的急性毒性高于PFOS。用电解氟化法合成的C4、C6织物三防整理剂和50%的全氟丁基有机铵盐阳离子表面活性剂浓度在100mg·L-1时,对两种蝌蚪都没有毒性。这说明,从急性毒性的角度,C4、C6织物三防整理剂和表面活性剂可作为PFOS的替代品使用,但是织物三防整理剂的急性毒性比PFOS大,作为替代品使用应慎重考虑。另外,PFOS和织物三防整理剂对黑斑蛙蝌蚪的急性毒性与对非洲爪蟾蝌蚪的急性毒性存在差异。出于保护我国本土两栖动物的目的,使用黑斑蛙开展毒性评价比使用非洲爪蟾更有现实意义。

双酚A类似物的雄性生殖毒性研究进展

聚焦BPA类似物对雄性动物的生殖毒性研究,分析双酚S、双酚F、双酚AF、双酚B和双酚E对哺乳类实验动物睾丸及组织结构、附睾重量及组织学结构、激素水平、精子参数等常规指标的影响,考察关于鱼类和两栖类动物的研究.研究发现,不管暴露剂量高低、暴露方式的差异或是动物种属的不同,所有BPA类似物的暴露都显示阳性结果,这与BPA雄性生殖毒性尚有争议的事实形成对比,暗示这些BPA类似物具有比BPA更明显的雄性生殖毒性.总体来看,目前的BPA类似物雄性生殖毒性的数据只局限在有限的几个实验室,且实验的质量控制难以评价.因此,BPA类似物的雄性生殖毒性的数据还需要更多实验室的验证,并且过程中需要严格控制动物实验的质量,以获得更加可靠且可重复的结果.