原因不明复发性流产患者外周血Th17和Treg细胞频率及其细胞因子水平变化

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血Th17和Treg细胞频率及其细胞因子水平变化。方法:应用流式细胞技术检测URSA患者外周血Th17和Treg细胞频率;应用ELISA方法检测URSA患者外周血Th17细胞因子(IL-17、IL-23)和Treg细胞因子(TGF-β1和IL-10)水平。结果:URSA患者Th17细胞在外周淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著高于正常早孕者(P<0.01);而URSA患者Treg细胞在外周淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著低于正常早孕者(P<0.01)。URSA患者血清中IL-17、IL-23水平明显高于正常早孕者,而TGF-β1、IL-10水平显著低于正常早孕者(P<0.01)。结论:URSA的发生与外周血中Th17和Treg细胞密切相关。

原因不明复发性流产患者蜕膜组织中Th17/Treg免疫失衡研究

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜组织中Th17/Treg免疫平衡情况。方法应用流式细胞技术检测URSA患者和正常早孕者蜕膜组织中Th17和Treg细胞频率,应用real-time PCR方法检测转录因子RORc和Foxp3 mRNA水平。结果 URSA患者蜕膜组织中Th17细胞在淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著高于正常早孕者(P<0.001),URSA患者蜕膜组织中Treg细胞在淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著低于正常早孕者(P<0.001)。URSA患者蜕膜组织中RORc mRNA水平明显高于正常早孕者,而Foxp3 mRNA水平显著低于正常早孕者(P<0.001)。结论 URSA患者蜕膜组织中存在明显的Th17/Treg免疫失衡,可能是URSA发生的重要原因。

CpG寡脱氧核苷酸增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答(英文)

目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3wk后摘除眼球取血 ,用ELISA法检测抗 HBsIgG抗体和IL 12的水平。同时 ,无菌取脾脏做HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞的数量和细胞核的变化。结果 :CpGODN与疫苗联合注射组产生的绝对抗体量比单独注射疫苗组提高 1倍 ;注射组产生IL 12的水平较单独注射疫苗组也有明显升高。光镜下各组脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常对照组脾脏可见大量的淋巴细胞 ;与正常对照组相比较 ,CTX组的淋巴细胞明显稀少 ;而CTX加CpG组的淋巴细胞数明显增多 ,细胞核也明显增大。结论

CpG ODN增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答

目的 探讨CpGODN对免疫力低下小鼠的体液免疫增强作用。方法 选用老年C57BL/ 6小鼠和免疫抑制模型小鼠 ,将重组HBsAg疫苗和CpGODN同时或单独肌注到小鼠体内 ,2周后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3周后摘除眼球取血 ,用ELISA方法检测抗HBsAgIgG抗体。 结果 免疫抑制模型中同时注射CpGODN和疫苗组产生的IgG抗体绝对量是单独注射疫苗组的 2倍 ;老年鼠组中 1 0 μg和2 0 μgCpGODN与疫苗同时注射组产生的IgG抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的 3倍和 4倍。

CpG ODN增强乙肝疫苗在老年小鼠中的免疫应答

目的 :探讨CpGODN对老年小鼠的体液和细胞免疫应答的增强作用。方法 :选用老年C5 7BL 6小鼠 ,将乙肝疫苗和 10 μg、2 0 μgCpGODN同时或单独肌注到小鼠体内 ,两周后以同样剂量加强免疫一次 ,再过 3周后摘除眼球取血 ,用ELISA方法检测抗HBsIgG抗体和IL 12 ;无菌取脾脏作HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞变化。结果 :10 μg和 2 0 μgCpGODN与疫苗同时注射组产生的抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的 3倍和 4倍 ;产生的IL 12水平较对照组有明显升高 ,且 2 0 μg比 10μgCpG组产生的IL 12水平更高。光镜下各组的脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常老年鼠组脾脏淋巴细胞较正常青年鼠组明显稀少 ;老年鼠 + 10 μgCpG组脾脏淋巴细胞较正常老年鼠组有了明显增加 ,且细胞核也明显增大 ;2 0 μgCpG组增加的更加明显。结论 :CpGODN能增强乙肝疫苗在老年小鼠中的体液和细胞免疫应答。

CpG ODN增强孕鼠及其新生小鼠对乙肝疫苗的免疫应答反应

目的探讨CpGODN对孕鼠及其新生小鼠的免疫应答增强作用。方法将乙肝疫苗和20μgCpGODN联合或单独肌肉注射到怀孕第1天的C57BL/6孕鼠体内,怀孕第14天以同样剂量加强免疫1次。待分娩后立即收集母鼠及其新生小鼠的血清,用ELISA方法检测抗HBsIgG抗体,无菌取母鼠的脾脏作HE染色,观察脾脏淋巴细胞变化。测量新生小鼠体长并称量体重、脑重。结果孕鼠空白对照组产生的抗HBsIgG抗体与孕鼠HBsAg组相比P<0.05,具有显著性差异。孕鼠HBsAg+CpGODN组与孕鼠HBsAg组相比,差异具有显著性(P<0.05)。HBsAg+CpGODN组新生小鼠的抗HBsIgG抗体与HBsAg组相比,差异具有显著性(P<0.05)。表明乙肝疫苗联合20μgCpGODN免疫孕鼠,使孕鼠及其新生小鼠抗HBsIgG抗体产生显著增加。显微镜下观察表明CpGODN使孕鼠的脾脏淋巴细胞浸润明显增多。各实验组的新生小鼠体长、体重、脑重、体重系数等生长发育指标与对照组相比无显著性差异。结论20μgCpGODN能够增强孕鼠对乙肝疫苗的免疫应答并被动增强其新生小鼠的免疫力,对新生小鼠的宫内发育无不良影响。

IVIG被动免疫治疗对原因不明复发性自然流产患者细胞免疫功能的影响——附56例报告

目的:探讨静脉滴注免疫球蛋白(IVIG)被动免疫治疗对原因不明复发性自然流产(URSA)患者机体细胞免疫的影响。方法:选择71例URSA患者,根据患者意愿分为IVIG治疗组56例和对照组15例,IVIG治疗组56例接受国产IVIG 10 g,每3周1次,妊娠后每月接受国产IVIG 1次,直至妊娠26～30周。对照组则未予IVIG治疗。观察两组妊娠结局。流式细胞仪分析IVIG治疗前后妊娠成功者和失败者体内IFN-γ+CD4+T细胞、IL-10+CD4+T细胞和NK细胞亚群比例变化。结果:56例患者经IVIG治疗后,妊娠成功率为86%(48/56),明显高于对照组的20%。IVIG治疗组中,妊娠成功者体内IFN-γ+CD4+T细胞、CD56+CD16+NK细胞亚群比例比治疗前明显下降(P均<0.01),IL-10+CD4+T细胞、CD56+CD16-NK细胞亚群比例比治疗前明显升高(P<0.01);而妊娠失败者IVIG治疗前后体内各细胞亚群比例无明显改变。结论:IVIG被动免疫治疗能调节URSA患者机体细胞免疫应答,有利于维持妊娠。

脐血CD4^+CD45^+调节性T细胞体外扩增及其抑制复发性流产患者免疫细胞功能研究

目的:建立有效的脐血CD4+CD45+调节性T(Treg)细胞体外培养体系,探讨其对复发性流产患者免疫细胞功能的抑制作用,为开发新的复发性流产免疫治疗方法奠定实验基础。方法:应用免疫磁珠分选法从脐血淋巴细胞中获得Treg细胞,体外进行长期培养、扩增,分别应用MTT法和51Cr释放法检测扩增后的Treg细胞对复发性流产患者效应T细胞和NK细胞功能的抑制作用;ELISA法检测Treg对复发性流产外周血Th1/Th2细胞因子的影响。结果:经过5、15、25天培养,Treg细胞的扩增倍数分别为(6.5±0.6)倍、(18.2±2.5)倍和(52.7±4.8)倍,Treg细胞的纯度分别为(93.2±3.4)%、(88.6±2.9)%和(81.9±3.3)%。培养25天后的脐血Treg细胞对复发性流产的CD4+CD25-效应T细胞和NK细胞杀伤活性具有明显抑制作用,能使外周血中IFNγ-水平下降,IL-10水平升高。结论:培养扩增后Treg细胞能在体外有效抑制复发性流产患者外周血免疫细胞功能,并能使外周Th1型细胞因子水平下降,Th2型细胞因子水平升高。

Th1和Th2细胞在体内的分化

近年来 ,人们对Th1/Th2细胞在体内的分化及其调控等方面有了许多新的认识。本文就Th1/Th2细胞在体内的分化来源、基因转录和信号调节、影响因素、表面标志及应用方面作一综述 ,这对进一步探讨免疫系统及其功能具有重要意义。

CpG ODN对ZP^(121-140)表位合成肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应影响

目的:探讨CpGODN对透明带(ZP)抗原表位ZP121-140合成肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应影响。方法:应用人工合成ZP2121-140表位肽,与20μgCpGODN或等量完全弗氏佐剂(CFA)混悬后左胫前肌免疫雌性BALB/c小鼠,初次免疫后2、4、6周各加强免疫一次,共免疫四次。在每次加强免疫前和末次免疫后两周断尾取血,分离血清,分析特异性IgG抗体及非特异性细胞因子IFN-γ、TNF-α及IL-10水平;收集小鼠阴道冲洗液,离心取上清,分析特异性IgA抗体水平。免疫小鼠生育实验结束后,取卵巢组织行病理学分析。结果:CpGODN组诱导的特异性IgG和IgA水平较CFA组有增高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。CpGODN组诱导的非特异性IFN-γ和TNF-α水平明显高于CFA组(P<0.05);而CpGODN组诱导的IL-10水平显著低于CFA组(P<0.05)。两种佐剂对小鼠的受孕率影响没有显著性差异,但CpGODN组孕鼠每胎产仔数明显低于CFA组(P<0.05)。病理学分析显示实验小鼠卵巢组织无病理性变化。结论:CpGODN对ZP121-140合成肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应略优于CFA,更适合用于避孕疫苗佐剂研究。

免疫治疗原因不明习惯性流产后外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的:探讨原因不明习惯性流产患者外周血T淋巴细胞亚群在主动和被动免疫治疗前后的变化。方法:采用流式细胞仪对2 5例被动免疫治疗和38例主动免疫治疗的原因不明性习惯性流产患者作治疗前后外周血T淋巴细胞亚群含量对比,并选择2 0例正常妊娠者作对照组。结果:①被动与主动免疫组治疗前后CD3+细胞无明显差异。②被动和主动组治疗后CD4 +细胞较治疗前有明显减少。③CD8+细胞在被动免疫治疗和主动免疫治疗后较治疗前有明显升高。④CD4 +/CD8+比率在被动免疫治疗和主动免疫治疗后较治疗前明显下降。结论:主动和被动免疫治疗后,外周血T淋巴细胞亚群有了明显变化,更利于妊娠发展。

免疫治疗原因不明反复自然流产后Th1/Th2型细胞因子和NK细胞的变化

目的:探讨原因不明性反复自然流产患者在主动免疫和被动免疫治疗前后Th1/Th2型细胞因子和NK细胞的变化。方法:采用流式细胞仪对被动免疫25例和主动免疫38例原因不明性反复自然流产者进行治疗前后Th1/Th2型细胞因子和NK细胞含量的检测比较,同时以20例正常妊娠妇女作为对照。结果:在主动免疫和被动免疫治疗前与对照组相比,Th2型细胞因子IL-10显著下降,主动免疫和被动免疫治疗后,Th1型细胞因子IFN-γ和NK细胞含量明显下调。结论:原因不明性反复自然流产患者经主动免疫和被动免疫治疗后,Th1/Th2型细胞因子和NK细胞含量有明显改变。

丙种球蛋白被动免疫治疗原因不明性反复自然流产研究

目的:探讨静脉点滴丙种球蛋白治疗原因不明性反复自然流产(URSA)的疗效及治疗前后机体封闭抗体、T细胞亚群、胞内Th1/Th2细胞因子及外周血NK细胞含量的变化,以期初步阐明其治疗机理。方法:URSA患者治疗前均检测封闭抗体,对于封闭抗体阴性的患者给予每2周静脉点滴10g国产丙种球蛋白,连续4次治疗后再次检测封闭抗体。怀孕后改为每3周同剂量加强免疫一次,至怀孕26～30周。应用FACSCalibur流式细胞仪分析25例患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、胞内Th1/Th2细胞因子及NK细胞的变化,并选择20例正常妊娠并选择人工流产者作为对照组。结果:25例URSA经4次被动免疫治疗后有19例封闭抗体转阳性。21例能正常怀孕并成功分娩,4例流产,成功率84%。治疗后CD3+T细胞百分比略升高但无显著性差异;CD8+T细胞百分比有明显升高;而CD4+T细胞百分比明显下降;CD4+/CD8+比率也明显下降。胞内Th2型细胞因子IL-10含量显著性升高;胞内Th1型细胞因子IFN-γ和外周血NK细胞含量明显下降。结论:静脉点滴丙种球蛋白治疗URSA具有较好疗效。治疗后机体免疫保护作用明显增强,可能是丙种球蛋白促进妊娠发展的原因之一。

原因不明复发性流产患者外周血T淋巴细胞和NK细胞表型研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URM)患者外周血T细胞、NK细胞和调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)表型。方法:采用流式细胞术检测URM患者、正常早孕(NEP)和正常非孕妇女(NNP)外周血T细胞(CD3+、CD4+、CD8+T细胞、CD3+HLA-DR+、CD4+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD4+/CD8+比值水平)、NK细胞(CD3-CD56+、CD56dimCD16+、CD56brightCD16-、CD56+CD69+)和Treg细胞(CD4+CD25+CD127dim)表型。结果:URM组CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+T淋巴细胞均较NEP组明显增加(P<0.05),而CD4+T细胞较NNP组升高(P<0.05)。NEP组CD8+T细胞较NNP组显著增加(P<0.05),三组间CD3+T细胞及CD4+/CD8+比值无明显差异。URM组外周血CD3-CD56+、CD56dimCD16+NK细胞比例明显高于NEP组,而CD56brightCD16-NK细胞比例较NEP组和NNP组均降低(P<0.05)。URM组和NNP组CD4+CD25+CD127dimTreg比例较NEP组均减少(P<0.05)。结论:URM患者外周T淋巴细胞活化、CD56dimCD16+NK细胞增多和Treg细胞减少可能是其致病的免疫基础。

复发性流产患者淋巴细胞主动免疫治疗效果观察

复发性自然流产（RSA）目前认为可能与同种异体免疫调节机制失衡有关。笔者对封闭抗体（BA）缺乏的RSA患者进行淋巴细胞主动免疫治疗，诱导母体对胚胎的免疫耐受，取得了较为满意的效果。

复发性流产患者主动免疫治疗后淋巴细胞免疫表型的变化

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者行淋巴细胞主动免疫治疗(LIT)后淋巴细胞免疫表型的变化对治疗效果的评估价值。方法采用流式细胞术分析URSA患者LIT前后外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞和调节性T细胞免疫表型的变化(P>0.05)。结果 25例URSA患者经LIT后成功妊娠16例,治疗后所有URSA患者(n=25)和妊娠成功组(n=16)外周血CD3+T细胞、CD4+HLA-DR+T细胞比例较治疗前均明显增加,CD4+T和CD3-CD56+NK细胞比例明显降低(P<0.05);而治疗前后B细胞和Treg细胞、CD56bright CD16-NK、CD56dimCD16+NK、CD3+CD56+NKT及CD69+NK细胞比例则无明显变化(P>0.05)。结论 LIT后外周血T细胞、NK细胞的比例发生了明显变化,CD4+T细胞、CD3-CD56+NK细胞比例降低和CD3+T细胞、活化CD4+T细胞增加也许有利于维持妊娠,T细胞和NK细胞的免疫表型有望作为LIT疗效评估的一个重要指标。

子宫内膜异位症异位和在位内膜中水通道蛋白1的表达及意义

目的:研究子宫内膜异位症患者子宫内膜中水通道蛋白1(AQP1)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其相关性,探讨子宫内膜异位症的发病机制。方法:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法对36例子宫内膜异位症患者异位内膜及在位内膜,22例正常妇女(对照组)子宫内膜进行AQP1、VEGF的表达检测并进行相关性分析。结果:AQP1主要在微血管内皮细胞质中表达,VEGF主要在微血管内皮及间质细胞质中表达。异位内膜AQP1、VEGF表达强度的半定量免疫组化评分(HSCORE)值均高于在位内膜(P<0.05);在位内膜AQP1、VEGF表达强度的HSCORE值均高于对照组内膜(P<0.05);增殖期异位内膜AQP1、VEGF表达强度的HSCORE值均明显高于分泌期(P<0.01);增殖期在位内膜和对照组内膜AQP1、VEGF表达强度的HSCORE值与分泌期比较,差异均无显著性;AQP1、VEGF在子宫内膜异位症组异位内膜、在位内膜的表达均有显著正相关性(r=0.774,P<0.01;r=0.749,P<0.01);AQP1和VEGF在对照组内膜的表达则均无相关性。结论:AQP1、VEGF在异位内膜细胞高表达,可能推动异位内膜黏附和侵袭,AQP1与VEGF可能通过促血管生成,共同促进异位内膜种植与生长,在子宫内膜异位症发生发展中起重要作用。

水通道蛋白1在子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中的表达及意义

目的:研究子宫内膜异位症(EMT)患者血清和腹腔液中水通道蛋白1(AQP1)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化及其相关性,探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用。方法:采用酶联免疫吸附方法(ELISA),测定36例EMT患者和22例对照组血清和腹腔液中AQP1和VEGF的含量,进行相关性分析。结果:EMT组血清和腹腔液中AQP1、VEGF水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。AQP1、VEGF在EMT组血清和腹腔液的表达均有显著正相关性(r=0.776,P=0.000;r=0.771,P=0.000);AQP1、VEGF在对照组血清和腹腔液的表达则均无相关性(r=-0.026,P=0.910;r=-0.040,P=0.860)。结论:AQP1在EMT患者血清和腹腔液中过表达,可能推动异位内膜黏附和侵袭,AQP1与VEGF可能通过促血管生成,共同促进异位子宫内膜种植存活,是EMT形成的基础。

抗HLA-I/II抗体、抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体与不孕和流产的关系

目的探讨抗HLA-I/II抗体、抗心磷脂抗体(ACA)和抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体与不孕和流产的关系。方法选取2011～2012年在本院就诊的不孕症患者550例、复发性流产患者1650例和正常分娩者150例。对各组分别进行抗HLA-I/II抗体、抗心磷脂抗体和抗β2GP1抗体检测,并将阳性率进行比较。结果不孕组抗HLA-I/II阴性率、ACA和抗β2GP1阳性率分别为76.0%、19.3%和17.5%;RSA组抗HLA-I/II阴性率、ACA和抗β2GP1阳性率分别为85.0%、23.5%和22.7%;均显著高于对照组,P<0.05。结论抗HLA-I/II抗体、抗心磷脂抗体和抗β2GP1抗体是引起不孕和复发性流产的重要因素。