液相色谱-串联质谱法检测血清25-羟基维生素D的方法建立和性能评价

目的：建立定量检测血清25－羟基维生素 D[25（OH）D]的液相色谱－串联质谱（LC－MS／MS）方法，并对此方法进行基本分析性能验证。方法使用 Waters？ XevoTM TQ MS ACQUITY UPLC？液质联用仪（LC－MS／MS）同时定量检测血清中的25（OH）D2和25（OH）D3含量。参照美国食品和药品管理局（FDA）的生物分析方法验证导则标准对所建方法进行线性、检出限、精密度和准确性等基本性能的验证。结果LC－MS／MS检测25（OH）D2和25（OH）D3的线性范围为6．25～500．00 nmol／L；25（OH）D2和25（OH）D3的定量检出限分别为2．50和1．25 nmol／L；批内、批间变异系数（CV）分别为＜4％、＜6％；回收率为93．26％～112．16％；维生素D 国际室间质量评价计划（DEQAS）室间质评结果偏倚＜10％。结论建立的 LC－MS／MS 基本性能符合评价标准，能够灵敏且准确的检测出血清中25（OH）D2和25（OH）D3的浓度。

尿儿茶酚胺LC-MS/MS检测方法的建立

目的：建立尿液儿茶酚胺[包括肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）和多巴胺（DA）]的液相色谱－串联质谱（LC－MS／MS）检测方法。方法以 E－d3、NE－d6和 DA－d4盐酸盐为内标，采用 WATERS ACQUITY UPLC？ HSS T3色谱柱（2．1 mm ＆#215;100 mm，1．8μm）进行分离。流动相 A1为2‰甲酸水溶液，流动相 B1为甲醇（纯度为99．9％），流速为0．5 mL／min，按 A1∶B1＝95∶5等度洗脱。采用电喷雾（ESI）正离子模式进行质谱分析。对方法的线性、准确度（回收率）、不精密度及最低检出限等进行性能验证。选取表面健康人群65名，建立 E、NE 和 DA 的参考区间。结果采用建立的 LC－MS／MS 检测尿液 E、NE 和 DA，保留时间分别为0．58、0．89和0．63 min，检测范围为0．50～800．00 ng／mL。 E、NE 和 DA 的加标平均回收率分别为97．95％、97．78％和101．03％，最低检出限分别为0．25、2．50和2．50 ng／mL。 E、NE 和 DA 的参考区间分别为5．4～25．8、28．5～73．1和269．1～420．5μg／24 h。结论建立的LC－MS／MS 方法能同时检测尿液中的 E、NE 和 DA，可为嗜铬细胞瘤的诊断提供可靠的信息。

S100B蛋白在血脑屏障损伤评估中的应用价值

目的系统评估电化学发光法测定血清S100B蛋白的性能,并初步探讨血清S100B蛋白水平与血脑屏障破坏程度的关联。方法参考美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP-15A文件对S100B蛋白的精密度进行验证,同时验证该方法的线性和正确度。检测45例血脑屏障受损患者血清S100B蛋白浓度。根据脑脊液蛋白电泳试验中白蛋白商值（QALB）检测结果的四分位数[〈第25百分位数（P25）、P25-〈第50百分位数（P50）、P50-〈第75百分位数（P75）、≥P75]对患者进行分组[0.05）。结论电化学发光法测定S100B蛋白的检测性能符合临床要求,可在临床上推广应用。血清S100B蛋白浓度可反映血脑屏障破坏程度,有助于临床评估病情。

液相色谱-串联质谱检测血浆3-甲氧酪胺方法的建立

目的建立一种稳定的检测血浆3-甲氧酪胺(3-MT)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法对LC-MS/MS的分离条件(色谱柱、柱温、p H值)进行优化,建立检测血浆3-MT的方法,并对该方法的线性范围、回收率、精密度、最低检测下限和稳定性进行评价。结果以同位素氘代作为内标,采用BEH HILIC色谱柱进行分离。流动相为100 mmol/L甲酸铵缓冲液(p H值为3)和纯乙腈,梯度洗脱;柱温为35℃。LC-MS/MS检测3-MT的线性范围为5~1 000 pg/mL,定量检出限为5 pg/mL,天间和批间变异系数(CV)分别为<6%和<7%,回收率为97.1%~109.3%。由于3-MT在室温中稳定性较差,因此需冰浴送检。结论建立了检测3-MT的LC-MS/MS方法,能够灵敏、准确地检测血浆3-MT水平。

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测血浆肾素活性(PRA)的方法学建立和临床应用评估

目的建立高血压患者血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的检测方法,用于早期筛查高血压患者中的原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA)。方法 arginine 13 C 15 N作为内标,采用Phenomenex Kinetex C18柱(2.6μm,100 mm×3.0mm)进行分离,柱温55℃。流动相为0.2%甲醇水溶液和0.2%甲酸甲醇溶液,流速为0.5 mL/min,梯度洗脱。考察该方法的特异性、基质效应、携带污染、重复性、定量下限(lower limit of measuring interval,LLMI)、线性、不精密度、回收率、稀释一致性和血浆标本稳定性。采用LC-MS/MS方法测定296名表面健康人群(男性153名,女性143名,平均年龄48岁)及360名高血压患者(平均年龄52岁,确诊为PA27例)的血浆样本PRA,并与放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)进行比较。结果该方法通过了特异性、基质效应、携带污染、重复性的性能评价。PRA的检测线性范围为0.084 4～30.0000ng/mL;PRA的LLMI为0.084 4ngmL-1h-1;日间和批内的不精密度变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;准确度偏差均<15%,回收率为92.28%～102.62%;建立的生物参考区间为0.25～5.12 ngmL-1h-1(立位);与RIA比较,结果相关性较好(r2=0.81,P<0.05),但存在-18.5%的偏倚;LC-MS/MS所得PRA的醛固酮/肾素活性比值(aldosterone to renin ratio,ARR)对PA的诊断特异性与灵敏度分别为96.3%与91.0%,诊断性能更佳(AUC:0.983 vs.0.894)。结论我们建立了准确检测PRA的LC-MS/MS方法,适合于临床早期快速筛查PA。

液相色谱-串联质谱检测血清褪黑素方法建立和临床应用研究

目的:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量检测人血清褪黑素的检测方法。方法:方法学评价研究。收集2022年2月至2023年3月就诊于复旦大学附属中山医院心理医学科门诊,182例初诊睡眠障碍患者[男56例,女162例,年龄(45.51±16.31)岁]以及182名表观健康人群[男性87名,女性95名,年龄(48.55±11.93)岁],检测两组人群血清褪黑素水平。使用液相色谱质谱系统,采用色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)进行分离。柱温35℃,流动相为0.1%的甲酸水溶液和纯乙腈,流速为0.4 ml/min梯度洗脱。以褐黑素-d4作为内标建立方法,进行方法学预验证,评价特异性和选择性、基质效应、携带污染、重复性。随后进行性能验证,评价定量下限、线性、精密度、回收率、稀释一致性和血清样本稳定性等参数。结果:褪黑素的最低定量限为1 pg/ml,检测线性范围为1~500 pg/ml(r=0.999)。日间和批内不精密度的变异系数(CV)为3.07%~6.86%,均符合小于15%的要求,加标回收率结果为105.91%~116.30%。睡眠障碍组血清褪黑素的水平明显低于健康对照组[2.00(1.00,3.28)]比[8.35(4.28,14.80)]pg/ml,P<0.001。结论:新建立的血清褪黑素LC-MS/MS检测方法分析性能符合要求,可用于检测血清中褪黑素含量。

液相串联质谱法检测血浆醛固酮的方法学建立和性能评价

目的建立一种稳定的血浆醛固酮（ALD）的液相色谱-串联质谱检测方法（LC-MS/MS）。方法方法学建立。收集2016年2至4月中山医院324名表面健康人群建立生物参考区间，收集322份标本对LC-MS/MS和RIA进行方法学比较。以同位素氘代作为内标，采用CORTEX C18色谱柱进行分离。流动相为甲醇和水，梯度洗脱；柱温：45 ℃；使用Waters Xevo^TM TQ MS ACQUITY UPLC System建立方法，并对该方法的线性，回收率，精密度，最低检测下限进行性能评价。补充统计学方法。使用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果该方法通过了线性，回收率，精密度和最低检测下限的性能评价。ALD的检测线性范围为25～2 000 pg/ml；ALD的定量检出限为20 pg/ml；天间和批间的CV分别〈6%和〈10%；回收率结果为97.3%～105.8 %；建立的生物参考区间为21～211.6 pg/ml（立位）；相关曲线r＝0.43，Y＝0.271X＋138.900。结论本研究建立了可靠的检测ALD的LC-MS/MS方法，适合于临床应用。

液相色谱－串联质谱检测血浆变肾上腺素和去甲变肾上腺素方法的建立

目的：建立一种稳定的血浆变肾上腺素（ MN）和去甲变肾上腺素（ NMN）的液相色谱－串联质谱检测方法（ LC－MS／MS）。方法方法学建立。自2012年1月至12月于复旦大学附属中山医院体检中心招募126名健康人，同时在中山医院就诊的泌尿外科和内分泌科患者中入组疾病组21例（嗜铬细胞瘤17例，异位嗜铬细胞瘤4例），高血压组108例，疾病对照组84例。以同位素氘代作为内标，采用BEH HILIC色谱柱进行分离。流动相为甲酸铵缓冲液（100 mmol／L，pH3）和纯乙腈，梯度洗脱；柱温：35℃；使用Waters Xevo^TM TQ MS ACQUITY UPLC System建立方法，并对该方法的线性，回收率，精密度，最低检测下限进行性能评价。比较各组同健康人组MN和NMN水平的差异。结果该方法通过了线性，回收率，精密度和最低检测下限的性能评价。嗜铬细胞瘤组同健康人组的MN和NMN水平有显著统计学差异。结论建立的LC－MS／MS方法检测MN和NMN，适合于临床应用。（中华检验医学杂志，2015，38：605－608）