米曲霉尿嘧啶营养缺陷型突变体筛选及转化体系建立

米曲霉(Aspergillus oryzae)是一种十分重要的工业微生物,但由于其菌丝体和孢子均含有多个细胞核,并且对多种抗性药物具有抗性,导致其遗传转化和分子生物学研究较其他模式丝状真菌困难。目前米曲霉遗传转化主要采用营养缺陷型作为筛选标记。尿嘧啶营养缺陷型是米曲霉转化中最常用的一种营养缺陷型标记,其筛选标记基因pyrG编码乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶为尿嘧啶的前体尿苷合成所必需。本研究以米曲霉3.042为背景,利用紫外线诱变和5-氟乳清酸(5-FOA)胁迫筛选获得5株尿嘧啶营养缺陷型菌株,经DNA测序5株菌株均为pyrG基因不同位点突变,确定为尿嘧啶营养缺陷型。以筛选到的尿嘧啶营养缺陷型菌株为背景,利用农杆菌介导的米曲霉转化系统,成功构建了米曲霉尿嘧啶营养缺陷型为筛选标记的农杆菌转化体系。

米曲霉遗传操作及分子生物学研究进展

米曲霉(A.oryzae)不仅在传统食品发酵、酿造和调味品等行业中具有悠久的应用,而且在现代生物技术产业比如酶制剂和重组蛋白的生产等方面的应用也日益广泛。这主要是由于A.oryzae是食品安全级真菌,具有较强蛋白酶分泌活性,并且在高盐浓度环境下可以正常生长。由于其菌丝体和孢子均存在多核现象并且遗传操作相对困难,所以关于其功能基因的研究近年来才陆续取得一些进展。本文对与A.oryzae分子生物学相关的研究如功能基因、蛋白酶分泌和耐盐、遗传操作方法和基因编辑等进行了综述。

荧光标记米曲霉细胞器菌株构建及细胞器形态观察

多核丝状真菌米曲霉(Aspergillus oryzae)的细胞器具有多态性。为了观察米曲霉细胞器的形态以及为米曲霉中未知蛋白的定位分析和一系列生物反应通路的揭示提供参考,将不同的亚细胞定位信号与荧光蛋白融合,得到不同亚细胞定位的荧光蛋白表达载体,再利用农杆菌介导转化法(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)将构建好的载体转入米曲霉中,通过显微观察证明成功构建了米曲霉荧光标记细胞核、线粒体、内质网、液泡、脂滴、过氧化物酶体和高尔基体的报告菌株。通过小分子特异性染料对线粒体、细胞核和脂滴荧光定位报告菌株染色进行共定位,对报告菌株进行了进一步验证。本研究对这些荧光标记的细胞器在不同生长时期和不同培养条件下的分布和形态进行了动态观察。报告菌株的构建为研究米曲霉的细胞器形态提供了工具,同时也为米曲霉中未知目的蛋白的定位以及亚细胞层面上的研究提供了工具。

麦角甾醇研究进展

麦角甾醇是主要存在于真菌中的甾醇类,其不仅在真菌中发挥重要作用,同时在其他领域应用广泛.本文主要总述了麦角甾醇的应用与价值,生物合成途径以及提取与测量方法.