内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡

目的探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2(calpain2)在凋亡效应中的作用。方法实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达最高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2 h,观察对上述效应的影响。结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88%±1.32%、51.51%±8.85%和55.77%±2.61%,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70%±0.46%和12μmol/L TM组28.1%±1.09%,与对照组相比有明显差异(P<0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调最高(P<0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P<0.01或P<0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P<0.05)。结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生。

钙蛋白酶-周期蛋白E介导EGF诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移能力增强

目的:探讨钙蛋白酶-周期蛋白E(Calpain-Cyclin E)信号通路在表皮生长因子(EGF)诱导的乳腺癌细胞迁移中的介导作用。方法:取对数生长期MCF-7乳腺癌细胞系为模型细胞,采用EGF、钙离子螯合剂(BAPTA)、钙蛋白酶抑制剂(Calpeptin)及钙蛋白酶抑制剂I(ALLN)预处理模型细胞,通过伤口愈合实验观察细胞迁移能力,通过蛋白印迹法观察蛋白质剪切及分子量变化,观察Calpain-Cyclin E信号通路对EGF诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果:BAPTA及ALLN能显著阻断EGF诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移,BAPTA组与Con组相比P<0.01,ALLN组与EGF组相比P<0.01,差异具有统计学意义;Calpeptin能阻断EGF诱导的细胞CalpainⅠ、Cyclin E蛋白剪切。结论:Calpain-Cyclin E促进EGF诱导的MCF-7乳腺癌细胞的迁移能力加强,可能在乳腺癌的浸润生长中发挥作用。

As_2O_3联合衣霉素体外干预对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及作用机制

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)联合衣霉素(TM)体外干预对三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法常规培养MDA-MB-231细胞并随机分为五组。空白对照组不作处理,对照组采用DMEM培养基培养,As_2O_3组、TM组分别用不同浓度(0.1、0.5、1、10、20、40、60、80μmol/L)As_2O_3、(0.1、0.5、1、10、20、40、60、80μmol/L)TM单独作用24 h,根据MTT法检测细胞增殖抑制率,选择0.5μmol/L的TM为固定浓度,并联合不同浓度As_2O_3作用细胞24 h(联合组)。用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,用内质网应激抑制剂4-PBA预处理细胞后用Western blotting技术检测GRP78、Caspase4蛋白表达。结果 As_2O_3组、TM组、联合组细胞增殖抑制率随As_2O_3浓度增加而升高;联合组细胞增殖抑制率与其他两组同浓度比较,P均<0.05。联合组细胞凋亡率与As_2O_3组比较,P<0.05。联合组线粒体膜电位与对照组比较,P<0.05。0.5μmol/L TM在4-PBA预处理后GRP78、Caspase4蛋白表达与预处理前比较,P<0.05。1μmol/L As_2O_3+0.5μmol/L TM在4-PBA预处理后GRP78、Caspase4蛋白表达与预处理前比较,P>0.05。结论 As_2O_3联合TM可协同诱导三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能为TM将低浓度As_2O_3的促细胞增殖效应逆转为抑细胞增殖效应。