GPC3对肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响

目的通过构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究GPC3对人肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响。方法用基因重组及限制性内切酶技术构建并鉴定表达载体pEGFP-c3-GPC3,通过脂质体介导转染人肝癌细胞株MHCC-97L,流式细胞术和G418筛选建立稳定细胞株;采用荧光定量PCR、Western blotting分别检测MHCC-97L中GPC3 mRNA和蛋白的表达情况,并在荧光显微镜下观察细胞荧光;MTT法检测GPC3对肝癌细胞MHCC97-L体外增殖能力的影响。结果经酶切及测序鉴定,确认成功构建真核表达载体pEGFP-c3-GPC3,荧光显微镜下观察到绿色荧光表达;从mRNA和蛋白水平证实,GPC3基因在转染后的MHCC-97L中成功表达;MTT生长曲线证实MHCC97-L/GPC3较其他两株细胞增殖显著加强(P<0.001)。结论成功构建pEGFR-c3-GPC3真核表达载体;筛选出稳定表达GPC3基因的MHCC97-L/GPC3细胞株;GPC3基因表达升高可促进肝癌细胞株MHCC97-L的增殖。

病毒性肝炎合并血小板减少症134例的临床分析

目的对134例病毒性肝炎合并血小板减少症进行临床分析。方法入选我院2014年7月至2015年8月病毒性肝炎患者134例为观察组,入选同期体检健康者134例为对照组,比较两组γ-转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)等临床指标;比较两组的血小板减少水平、血小板计数(PLT)等指标;应用流式细胞术检测血小板相关免疫球蛋白(PAlg)及其类别PAlg G、PAlg A、PAlg M水平。应用酶联免疫吸附法检测血清促血小板生成素(TPO)水平。结果观察组的γ-转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)等临床指标显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组PLT减少水平、PLT等临床指标均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组的PAlg、PAlg G指标显著高于对照组,TPO显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而两组的PAlg M、PAlg A指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论病毒性肝炎合并血小板减少症与肝脏受损合成减少密切相关,同时介导PAIg的免疫机制。

小鼠趋化因子受体7特异性shRNA腺病毒表达载体的构建和鉴定

目的构建小鼠CC趋化因子受体7(CCR7)基因特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,研究其对CCR7分子表达的影响。方法根据小鼠CCR7 mRNA序列,设计三个shRNA序列,并插入表达载体p HBAd-U6-GFP中,经基因测序鉴定。然后用获得的重组CCR7 shRNA表达载体转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,测定病毒滴度TCID50,并用重组腺病毒感染小鼠MEF细胞,观察细胞绿色荧光强度,Western Blotting检测CCR7蛋白的表达。结果基因测序证明:获得的三个shRNA载体序列与原设计序列完全相符,扩增后的病毒上清滴度分别为:1.0×1010、1.6×1010和1.25×1010PFU/m L。Ad CCR7 shRNA1腺病毒可明显下调小鼠MEF细胞CCR7蛋白表达。结论成功构建了小鼠CCR7特异性shRNA腺病毒表达载体,并获得了高滴度病毒上清,为以后研究肿瘤淋巴转移的分子机制和信号通路打下了坚实的基础。

RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

目的观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制。方法设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响;通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达。结果设计合成的GPC3siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72h的表达高于未转染组,96h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关。进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。

Ⅰ期药物临床试验1例妊娠事件根本原因分析

在药物临床试验中出现非预期妊娠事件,有些试验药物可能会给受试者及其子代的健康和安全造成极大的影响。本文针对Ⅰ期临床试验发生的1例妊娠事件进行根本原因分析,研究团队共同寻找该事件发生的根本原因并逐一制定解决措施,形成有效的防范流程和预防策略,并将该有效流程和措施应用到后续12项Ⅰ期临床试验项目中,经评价和验证取得良好效果,对今后预防该类事件的发生具有重要意义。

142例消化道恶性肿瘤患者红细胞分布宽度分析

目的:研究消化道恶性肿瘤患者红细胞分布宽度(RDW)的特点,探讨其与预后的关系。方法:分析近3年收治的142例消化道肿瘤患者RDW-CV值的特点,研究其与贫血严重度、肿瘤TNM分期、患者Karnofsky评分以及低蛋白血症之间的关系。结果:伴有贫血的消化道恶性肿瘤患者的RDW-CV值明显高于无贫血患者,且与贫血程度呈正相关,肿瘤分期为Ⅲ+Ⅳ期或伴有低蛋白血症患者的RDW-CV值明显高于Ⅰ+Ⅱ期或血清白蛋白水平正常的患者,而RDW-CV值与患者的KPS评分无关。结论:消化道恶性肿瘤患者的RDW-CV值与患者的贫血程度、肿瘤TNM分期以及是否伴有低蛋白血症有关,可间接预测患者的预后。