“仙灵骨葆”灌胃给药大鼠后吸收入血成分的HPLC-MS/MS分析

采用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS),对中药复方制剂"仙灵骨葆"经大鼠灌胃给药后吸收入血的成分进行分析。以甲醇-乙腈(2∶1,体积比)对血清样本进行前处理,采用C18色谱柱,以乙腈-水(各含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,选择正离子采集模式下的一级、二级质谱全扫描,对"仙灵骨葆"给药后血清、空白血清及"仙灵骨葆"制剂进行液相色谱串联质谱对比分析,根据色谱峰保留时间及质谱碎裂规律,结合文献和空白血清加入对照品的相关信息,确认了"仙灵骨葆"13个吸收入血原型成分并推测了2个代谢物,这些入血成份主要来源于淫羊藿、补骨脂、续断和知母四味组方中药,提示这四味中药可能对该复方体内发挥药效的贡献较大。上述研究可为揭示该复方在体内抗骨质疏松药效物质提供一定实验依据。

两种前处理方法对LC-MS/MS测定家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物基质效应的影响

考察了两种前处理方法对采用液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)测定家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物时基质效应的影响。家兔空白血清分别以乙酸乙酯液-液萃取和C18小柱固相萃取,提取前、后各自加入一定浓度的4种淫羊藿黄酮类化合物的混合对照品溶液(淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿素),评价家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物的LC-MS/MS测定结果的绝对基质效应、提取回收率和方法过程效率。研究发现,以乙酸乙酯液-液萃取法进行样品前处理后,家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物的绝对基质效应大于100%,提取回收率和方法过程效率均较高且稳定;以C18小柱固相萃取法进行样品前处理后,家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物的绝对基质效应低于100%,提取回收率和方法过程效率均较低且不稳定。因此,采用乙酸乙酯液-液萃取法进行样品前处理,不仅可以增加LC-MS/MS测定家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物的离子化效率,且对淫羊藿黄酮类化合物的提取回收率更高且稳定,适合作为样品前处理方法用于淫羊藿总黄酮苷在家兔体内的药代动力学研究。

LC-MS/MS测定家兔胆汁中淫羊藿次苷Ⅱ

建立能定量分析家兔胆汁中淫羊藿次苷Ⅱ的液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS).以水饱和乙酸乙酯萃取为家兔胆汁样本前处理方法,采用OSD柱(150×4.6 mm,i.d.,5μm),以乙腈-水(各含0.1%的甲酸)为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),二级质谱全扫描,负离子方式下检测.方法学考察结果显示,该方法专属性良好;日内精密度(RSD)不大于10.6%,日间精密度(RSD)不大于8.3%,准确度(RE)在-4.4%～+5.0%范围以内;胆汁样本稳定性良好;基质效应对测定影响可以忽略不计且提取率较高并稳定.该方法快速而灵敏,可用于家兔灌胃给以淫羊藿总黄酮后胆汁中的活性代谢物淫羊藿次苷Ⅱ的动态变化研究.

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS^n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。

补骨脂富含的异戊烯基成分对CYP1A1活性的影响及分子对接验证

目的考察补骨脂富含的异戊烯基成分对CYP1A1活性的影响,并采用分子对接技术进行验证。方法以7-乙氧基试卤灵为CYP1A1的探针底物,采用超高效液相串联三重四级杆质谱(UHPLC-TQD-MS)对代谢产物试卤灵的质谱条件进行优化;应用CYP1A1体外孵育体系,评价补骨脂富含的补骨脂二氢黄酮、补骨脂定、异补骨脂查尔酮、异补骨脂二氢黄酮和补骨脂二氢黄酮甲醚在不同浓度(1、10、100μmol·L^(-1))对CYP1A1活性的影响;采用不同的抑制动力学模型计算相关的抑制常数(Ki);应用Autodock 4.2软件,将活性成分与CYP1A1进行分子对接。结果初筛结果显示,补骨脂二氢黄酮、补骨脂定、异补骨脂查尔酮、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚对CYP1A1均表现出抑制活性,IC50值分别为0.28、0.49、0.36、2.24、4.07μmol·L^(-1);根据最小赤池信息量准则(AIC)和施瓦茨信息准则值(SC)即为最佳模型的原则,补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮对CYP1A1的抑制为竞争性抑制,Ki常数分别为0.12、0.23μmol·L^(-1);补骨脂定对CYP1A1表现出非竞争性抑制,抑制常数Ki为0.59μmol·L^(-1);分子对接结果显示,补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮与CYP1A1蛋白之间均能产生氢键、π-π键以及疏水作用,结合自由能分别为-10.145、-8.286 kcal·mol-1(1 kcal=4.2 kJ),这可能是它们与CYP1A1亲和力较强进而产生强抑制活性的原因。结论补骨脂富含的异戊烯基成分是CYP1A1强抑制剂(IC50<5μmol·L^(-1));异戊烯基成分C环1位和2位脱水开环会增加对CYP1A1的抑制活性;A环C-6位异戊烯基取代的化合物比C-8位取代的化合物表现出更强的CYP1A1抑制活性;A环7-OH甲基化会减弱CYP1A1的抑制活性;分子对接结果也证实了补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮与CYP1A1有较强的亲和力。

基于物联网技术的快捷收盘小车的探索

每个学校的学生都很多,特别是大学,从而对每个学校产生了一种人口经济压力,人口经济压力的一种体现就是消费的需求急速上涨,最直接也最具体的体现就是每次食堂吃饭时人都很多,学生吃完饭后,所留下的空盘子放在桌子上,这样就会造成一种资源占用。食堂的工作人员收空盘子的速度是有效的且人口成本也是很高的。本团队本着减少食堂商家成本,维护学生利益的基本点出发,从而由此得到灵感,萌发出了快捷收盘小车这一智能设备。本小车不仅可以应用于食堂,亦可应用于各种大型的餐饮行业。由物联网技术中的ZigBee技术支持,我们团队在本校食堂进行试点。

淫羊藿总黄酮苷在家兔肠菌中的代谢及葡萄糖酸内酯对其肠菌代谢的抑制作用(英文)

目的:考察淫羊藿总黄酮苷在家兔肠菌中的代谢以及葡萄糖酸内酯对肠菌代谢的抑制作用,旨在帮助揭示淫羊藿总黄酮苷在家兔体内的代谢途径和预防激素性骨坏死作用的物质基础。方法:淫羊藿总黄酮苷与家兔肠菌液经37℃厌氧温孵培养后,在不同时间点经水饱和的乙酸乙酯萃取,并对加入不同浓度(8,12和16mg·mL-1)的葡萄糖酸内酯对淫羊藿总黄酮苷经家兔肠菌代谢的抑制情况进行考察。采用ODS柱和乙腈-水(各含0.1%的甲酸)的流动相梯度洗脱,检测波长为335nm。结果:淫羊藿总黄酮苷在家兔肠菌液中温孵2h时被代谢成淫羊藿次苷Ⅱ,在温孵8h时被代谢成淫羊藿素;葡萄糖酸内酯能够浓度依赖性地抑制家兔肠菌对淫羊藿总黄酮苷的代谢。结论:淫羊藿总黄酮苷能被家兔肠道菌群迅速水解成淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿素;当葡萄糖酸内酯的浓度为16mg·mL-1时,则能完全抑制家兔肠菌对淫羊藿总黄酮苷的代谢。

不同剂型霉酚酸类药物在早期肾移植患者体内的药动学研究及不良反应分析

目的研究不同剂型霉酚酸类药物在早期肾移植患者体内的药动学特征与不良反应的相关性。方法肾移植患者121例,术后分别服用吗替麦考酚酯胶囊(骁悉,MMF)(给药剂量分别为500,750,1000 mg)、吗替麦考酚酯分散片(赛可平,MMF-T)(给药剂量分别为500,750,1000 mg)、吗替麦考酚酯分散片(国药川抗,MMF-DT)(给药剂量分别为500,750 mg)和麦考酚钠肠溶片(米芙,EC-MPS)(给药剂量分别为360,540,720,900 mg),每12 h给药1次;分别于术后第7天服药前和服药后0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10和12 h采集静脉血样2 mL;采用超高效液相色谱法(UHPLC-DAD)测定MPA的血药浓度;以WinNoLin6.3软件,采用非房室模型计算药动学参数,并分析AUC0-12 h与不良反应的相关性。结果不同剂型给药组的平均ρ0变化不大,基本维持在1.0~3.0μg·mL^-1;平均ρmax在4~12μg·mL^-1之间,相应的tmax基本维持在1~3 h;各组别半衰期t1/2基本在4~9 h以内;除MMF-T组的AUC0-12 h小于30μg·h·mL^-1,其余3组的AUC0-12 h基本维持在治疗窗30~60μg·h·mL^-1内。MMF和MMF-T均在500~1000 mg(bid)、MMF-DT在500~750 mg(bid)和EC-MPS在360~900 mg(bid)剂量范围内,各组别药物剂量与AUC0-12 h呈非线性关系,而AUC0-12 h与ρ0,ρmax呈不确定地线性关系(r=0.591~0.817,P<0.01)。肾移植术后早期患者主要出现中度贫血,血压异常,腹泻等不良反应,超出MPA的AUC0-12 h治疗窗范围,更容易出现各种不良反应。结论患者个体间MPA的药动学差异较大;MMF组(500~1000 mg,bid),MMF-T组(500~1000 mg,bid),MMF-DT组(500~750 mg,bid)和EC-MPS组(360~900 mg,bid)的药物剂量与AUC0-12 h呈非线性关系,AUC0-12 h值基本一致;AUC0-12 h与ρ0,ρmax之间相关性一般;治疗窗范围内不良反应出现例数较少。

补骨脂定的肝肠微粒体代谢动力学、代谢酶表型及种属差异研究

研究补骨脂定在人肝微粒体(HLM)和肠微粒体(HIM)的代谢活性,明确参与补骨脂定代谢的细胞色素P450酶(CYPs)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)及补骨脂定体外代谢的种属差异。将不同浓度的补骨脂定溶液分别与HLM和HIM共同孵育,经HLM孵育可以产生2个氧化产物(M1和M2)和2个葡萄糖醛酸结合物(G1和G2),在HIM中仅产生M1和G1;在HLM和HIM中,补骨脂定代谢生成M1的固有清除率(CL_(int))分别为104.3、57.6μL·min^(-1)·mg^(-1),生成G1的CL_(int)分别为543.3、75.9μL·min^(-1)·mg^(-1)。利用12种CYPs和12种UGTs酶,分别与不同浓度的补骨脂定溶液共同孵育,结果显示,CYP1A1(39.5μL·min^(-1)·mg^(-1))、CYP2C8(88.0μL·min^(-1)·mg^(-1))、CYP2C19(166.7μL·min^(-1)·mg^(-1))、CYP2D6(9.1μL·min^(-1)·mg^(-1))是生成M1的关键CYPs代谢酶,而CYP2C19(42.0μL·min^(-1)·mg^(-1))是生成M2的重要亚型酶;UGT1A1(1184.4μL·min^(-1)·mg^(-1))、UGT1A7(922.8μL·min^(-1)·mg^(-1))、UGT1A8(133.0μL·min^(-1)·mg^(-1))、UGT1A9(348.6μL·min^(-1)·mg^(-1))、UGT2B7(118.7μL·min^(-1)·mg^(-1))重点参与G1的生成,而UGT1A9(111.3μL·min^(-1)·mg^(-1))是G2生成的关键亚型酶。采用猴肝微粒体(MkLM)、大鼠肝微粒体(RLM)、小鼠肝微粒体(MLM)、狗肝微粒体(DLM)和猪肝微粒体(MpLM),分别与不同浓度的补骨脂定溶液共同孵育,结果显示,补骨脂定的Ⅰ相代谢和葡萄糖醛酸化代谢均表现出显著的种属差异。总体来说,补骨脂定在肝肠微粒体均可以发生较强的代谢;CYP1A1、CYP2C8、CYP2C19、CYP2D6与UGT1A1、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT2B7是参与其代谢的关键亚型酶;大鼠和猪分别是研究补骨脂定Ⅰ相代谢和葡萄糖醛酸化代谢合适的模式动物。

不同剂量替考拉宁治疗重症感染患者的血药浓度监测及其影响因素的探讨

目的探讨不同剂量替考拉宁在重症感染患者血药谷浓度(ρ_(min))的分布特征及影响因素。方法回顾性分析我院2018年12月~2020年5月使用替考拉宁的238例重症感染患者,按不同给药剂量分为标准剂量组(G_(S))400 mg,中剂量组(G_(M))600 mg和高剂量组(GH)800 mg,采用超高效液相色谱-串联质谱联用法(UHPLC-MS/MS)测定替考拉宁ρ_(min),采用多元线性回归分析以及逐步回归分析法分析替考拉宁ρ_(min)的影响因素。结果本研究中共监测了238重症感染患者的367个血样,替考拉宁平均ρ_(min)为(16.06±11.81)μg·mL^(-1),只有65.4%的在治疗窗范围内。替考拉宁ρ_(min)的值按从G_(S)组、G_(M)组和GH组的顺序显著增加[(12.52±8.41)μg·mL^(-1)、(16.46±11.74)μg·mL^(-1)和(20.59±14.49)μg·mL^(-1)],P<0.05。3组浓度达标率分别为48.39%,68.32%和84.15%,差异有统计学意义(P<0.001);当替考拉宁谷浓度升高时,肾毒性、肝毒性和血小板减少不良反应发生率均有升高趋势,但是3个剂量组患者药物不良反应发生率无明显统计学差异(P>0.05)。多元线性回归分析结果提示,给药剂量、肾小球滤过率及白蛋白水平为影响重症感染患者替考拉宁血药浓度的主要因素。结论替考拉宁在重症感染患者中采用常规剂量给药多数患者浓度不达标,应给予足够负荷剂量的替考拉宁,以保证替考拉宁ρ_(min)在治疗窗范围内,从而提高替考拉宁治疗的有效性。给药剂量、肾小球清除率及白蛋白水平对替考拉宁ρ_(min)有影响。