中枢神经系统脱髓鞘疾病脑脊液蛋白质组学研究

目的建立中枢神经系统脱髓鞘疾病蛋白质组学技术体系,寻找并鉴定与中枢神经系统脱髓鞘疾病发生有关的生物标识物。方法以中枢神经系统脱髓鞘疾病患者的脑脊液为研究对象,分别采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,离线应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱得到相应的肽指纹图谱;同时用超高压液相色谱分离酶解肽段,在线采用电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定肽段氨基酸序列;搜索数据库鉴定部分蛋白质。结果分别获得中枢神经系统脱髓鞘疾病患者组和对照组的脑脊液双向电泳蛋白质组表达图谱,筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质10个,其中在疾病组中血红蛋白有明显上调而前列腺素H2表达下调明显。结论这些差异蛋白可能成为具有临床诊断意义的中枢神经系统脱髓鞘疾病潜在标识物,从而为中枢神经系统脱髓鞘疾病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据。

HPLC法同时测定人血浆中舒必利、氯氮平、氯丙嗪浓度

目的:建立同时测定人血浆中舒必利、氯氮平、氯丙嗪药物浓度的高效液相色谱方法。方法:血浆样品用乙酸乙酯萃取,氮气吹干;残留物用甲醇溶解后进样。色谱柱为C_(18)柱(250 mm×4.6mm),流动相为甲醇-水(80:20,含0.5％三乙胺和0.05％冰醋酸,pH=7.6～7.8),流速:1.0mL·min^(-1),柱温:35T,紫外检测波长:250nm。结果:本法可同时测定血浆中3种药物浓度。舒必利在0.2～1.0μg·mL^(-1)、氯氮平在0.05～1.0μg·mL^(-1)、氯丙嗪在0.01～0.16μg·mL^(-1)范围内,峰面积与其浓度呈良好的线性关系;日内RSD分别为2.9％～3.9％,3.1％～4.1％,3.0％～4.3％;日间RSD分别为3.9％～4.8％,3.8％～5.1％,4.3％～5.3％(n=4)。结论:方法简便、快速、准确,适用于舒必利、氯氮平、氯丙嗪3种药物临床血药浓度的同时检测。

气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中的乳酸

血清和脑脊液样品经甲酯化处理,氯仿提取,氮气吹干,残留物用庚烷溶解后进样,用气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中乳酸含量。结果显示,线粒体脑肌病患者的血清、脑脊液中乳酸含量分别为(294±101)mg/L和(312±103)mg/L,比正常人((192±37)mg/L和(153±81)mg/L)以及神经系统其他疾病患者((150±34)mg/L和(173±29)mg/L)显著增高(P<0.05)。该方法可作为筛选线粒体脑肌病的临床诊断方法。

大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究

目的 :研究大鼠脑组织中单胺类递质及其代谢产物的高效液相反相离子对色谱测定法。方法 :采用LiChrosorbC18,10 μm色谱柱 ,流动相为甲醇 :水 (4 0 :60 ) ,含 0 .0 2 8g LEDTANa2 ,0 .15g LSDS ,0 .2ml LH2 SO4(pH 2 .5～ 3 ) ,荧光检测波长 :λEX=2 85 ,λEM=3 3 3。结果 :对 87只大鼠脑组织中 4种单胺类递质及其代谢产物的含量进行了同时测定 ,高香草酸 (HVA) 2 .5 0～ 40 .0 μg ml、去甲肾上腺素 (NE) 0 .0 1～ 0 .5 0 μg ml、多巴胺 (DA)0 .0 5～ 1.0 0 μg ml、5 羟色胺 (5 HT) 0 .0 2 5～ 0 .5 0 μg ml,峰面积与其含量呈良好的线性关系。 结论 :该法操作简便、快速、准确 ,为组织中单胺类递质及其代谢产物检测的一种理想方法 ,并适用于临床相关研究。

神经蛋白质组学双向电泳技术体系的建立

目的:建立神经蛋白质组学双向电泳技术体系。方法:利用双向电泳技术分别以人脑脊液、人和鼠脑组织为研究对象,通过离心等手段提取蛋白,行双向电泳,硝酸银染色,进行图谱分析。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点:正常人脑脊液359个,多发性硬化人脑脊液397个,正常人脑组织480个,正常鼠脑组织524个。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。结论:从蛋白质水平探讨多发性硬化症、脑出血等疾病的发病机制,对寻找有效的药物靶点具有重要意义,同时为神经系统其它疾病的研究提供了切实可行的神经蛋白质组学研究技术体系。

多发性硬化患者脑脊液蛋白质组学的研究

目的:筛选并鉴定多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,探讨多发性硬化的发病机制。方法:以实验室确诊型和临床怀疑型多发性硬化患者的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染色后,Image Master 2D Platinum 5.0图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点,共鉴定出35种蛋白,并且发现其中大多是在正常的脑脊液中存在的,其中有6种是在多发性硬化双向凝胶谱库中已有的,有4种是本实验所发现的。结论:本研究识别并鉴定了4种多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,但这4种蛋白质与多发性硬化的关系有待进一步研究。

体外血栓形成机理的实验研究

血栓形成与流体力学因素关系密切 ,用健康成人血样进行的实验表明 ,Chandler血栓环内血液呈现出三维流动和二次流动状态 ,在管壁处的剪切应力最大。体外血栓形成应考虑血栓环弯曲和内部血液回流因素。血栓环内下弯月面处血栓的形成可能是流速相对较高的流体元冲击下弯月面导致血小板和红细胞聚集所至。当血栓环旋转时间低于 10min时 ,血栓形成不良。 15min是血栓形成的最佳时间。转速为 3 75rpm时 。

脑脊液CystatinC改变与格林-巴利综合征关系的探讨

目的对格林-巴利综合征(GBS)患者和对照组脑脊液进行蛋白质组学分析,寻找改变最明显的蛋白质,初步探讨其与GBS的关系。方法分别取GBS疾病组和对照组的新鲜脑脊液,冰丙酮沉淀法提取总蛋白,进行第一向等电聚焦电泳(IEF)和第二向十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组,Image Master 2D图像分析软件对分析胶进行比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点。抠取制备胶上相应的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI/TOF/MS)得到肽质量指纹图谱(PMF),搜索SWISSPROT数据库鉴定蛋白质点。结果双向电泳图谱上有6个点在两组间存在明显差异,4个蛋白质点在GBS疾病组中表达明显上调,2个降低。其中Cystatin C表达下调,是改变最明显的蛋白质点,为本实验首次发现。随后的酶联免疫吸附实验(ELISA)也证实GBS患者的脑脊液中Cystatin C的浓度明显低于对照组[(2.79±0.65)mg/L,(3.65±0.82)mg/L,P<0.01]。结论Cystatin C浓度在GBS患者脑脊液中的浓度明显降低,可为研究格林-巴利综合征疾病机制提供线索。

核磁共振波谱技术在恶性肿瘤检测中的临床研究

利用低分辨质子核磁共振波谱仪，采用双重抑制法抑制血中水的质子峰，并和由作者曾报道过的冷冻干燥法及国外报道的预饱和法进行比较，对236价临床血标本的甲基和次甲基的平均线宽进行测量和分析比较。结果表明，恶性肿瘤患者血的甲基和次甲基峰的平均线宽值明显低于正常人和良性肿瘤患者，其差异非常显著（P＜0．001）。这一结果为临床检测提供了有价值的数据，同时可用来监测癌症病人的治疗过程。

核磁共振波谱技术诊断恶性肿瘤的临床研究

使用低磁场质子核磁共振波谱仪，采用双重抑制法、冷冻干燥法及预饱和法抑制血液样品质子ＮＭＲ谱中的水峰，分别测量和比较甲基、次甲基的平均线宽及其两者的平均线宽。通过ＮＭＲ检测２３６份临床血标本发现，恶性肿瘤患者血的甲基和次甲基峰明显窄于正常人和良性肿瘤患者，其平均线宽差异有高度显著性（Ｐ＜０．００１），检测准确率均达８５％以上。

脑脊液双向电泳技术体系的建立

目的:建立用于脑脊液(CSF)蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找多发性硬化患者和对照组脑脊液蛋白质差异,从分子水平探讨多发性硬化患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法:分别取对照组及多发性硬化患者的脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白质后,加入适量裂解液使蛋白质充分裂解,离心后取上清液上样。进行第1向等电聚焦(IEF)电泳和第2向十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),染色脱色后,分析所得蛋白质斑点。结果:对照组和多发性硬化患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质斑点,其中2个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量增加,4个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量减少,12个蛋白质斑点为多发性硬化患者脑脊液特有。结论:对照组和多发性硬化患者脑脊液的双向电泳图谱存在明显差别,这些发现可为研究多发性硬化疾病机制提供线索。

RRMS疾病潜在生物标记物关系探讨

目的通过对复发-缓解型多发性硬化(RRMS)患者脑脊液进行比较蛋白质组学及生物信号网络分析,探索其潜在生物标记物之间以及生物标记物与该疾病间的关系。方法分别收集RRMS组和对照组脑脊液进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D图像分析软件筛选出表达有显著差异的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱对其进行鉴定,ELISA进行定量验证,MetaCore集成软件对所鉴定蛋白质进行相关分析。结果8个蛋白质点在两组凝胶图谱上存在明显差异,4个点在RRMS组显著上调,4个点下调,其中Cystatin C的ELISA结果为,RRMS组(4.36±1.22)mg/L,对照组(6.00±1.68)mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明,对所鉴定蛋白质成功构建了信号网络图谱。结论蛋白质点的差异表达及其生物信号网络图谱在分子水平上对RRMS疾病的发病机理、鉴别诊断及药物靶点的探索提供了依据。

脊髓蛛网膜炎82例临床分析

本文报道了我院近二十年来收治的82例经脊髓腔碘油造影,其中部分病例经手术探查证实的脊髓蛛网膜炎的病程、临床表现与临床诊断分析,同时讨论了该病的病因和预后。