人卵母细胞玻璃化冷冻技术在辅助生殖中的应用

目的:探讨人卵子玻璃化冷冻的可行性及临床应用价值。方法:回顾性分析2011年8月至2012年7月在取卵日因男方因素行卵子玻璃化冷冻的6例患者,解冻卵子后行卵胞浆内显微注射,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果:6例患者共解冻卵子52枚,复苏卵子31枚,复苏率59.62%。对31枚卵子行ICSI,受精21枚,形成胚胎20枚。1例患者取消移植,5个移植周期共移植胚胎9枚,临床妊娠2例,临床妊娠率40%。结论:卵子的玻璃化冷冻是目前保存女性生育力的有效措施。

精子DNA完整性与IVF/ICSI助孕结局的关系

目的:探讨精子DNA碎片与体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)结局的关系。方法:采用精子染色质扩散实验(SCD)对接受IVF/ICSI治疗的280例(IVF 208例、ICSI 72例)男性精液样本进行DNA碎片指数(DFI)检测。根据检测结果将精液样本划分为低DFI(<25%)组和高DFI(≥25%)组,并比较两组的受精率、卵裂率、优胚率、可利用胚胎率及临床妊娠率。结果:无论选择何种受精方式,低DFI组和高DFI组的受精率、卵裂率、优胚率、胚胎利用率及临床妊娠率均无统计学差异(P>0.05)。结论:DFI的高低对IVF/ICSI的各种指标及助孕结局的影响不大。

精子DNA碎片指数与精液参数的相关性研究

目的:探讨男性精子DNA碎片与精液常规参数及精子顶体酶活性之间的关系。方法:收集生殖中心门诊553例男性患者精液标本,采用改良精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA碎片指数(DFI),按精子DFI结果分为DFI<15%(I组)、15%≤DFI<25%(II组)、DFI≥25%(III组),同时检测精子密度、总数、(a+b)级精子百分率、畸形率及顶体酶活性,对DFI与精液各项参数的相关性进行分析。结果:精子密度及精子总数与DFI无显著相关性;前向运动精子百分率随DFI升高逐渐降低,III组与I组间存在显著性差异;精子正常形态率随DFI的增加有下降的趋势,但是差异不显著;精子顶体酶活性随DFI升高而降低,组间均有显著性差异。结论:精子DNA碎片指数与前向精子百分率及精子顶体酶活性呈负相关。因此DFI可作为评估精子功能的一个较好的参考指标。

胚胎冷冻保存时间对FET妊娠结局的影响

目的：探讨胚胎冷冻保存时间是否会对冻融胚胎移植（FET）周期妊娠结局造成影响。方法：回顾性分析本中心833个解冻移植周期,按冷冻保存时间分为Ⅰ组（〈90d）;Ⅱ组（90~365d）;Ⅲ组（366~730d）;Ⅳ组（〉730d）,比较组间临床妊娠结局情况。结果：四组的平均年龄及平均移植胚胎数均无显著性差异,各组间的临床妊娠率无显著性差异。结论：冷冻保存时间对FET妊娠结局无不良影响。

哺乳动物性腺特异表达基因研究进展

在哺乳动物配子发生过程中,需要一个严格的阶段性和细胞特异性的基因表达程序。近年来,随着基因克隆、表达及功能研究技术的发展与应用,发现了许多配子发生过程中发挥特定作用的阶段特异和细胞特异表达的基因,有的已被证明在配子发生中起重要作用,但生殖细胞在分化及发育时受其调节的分子机制尚未了解,需要进行更加广泛深入的研究。文章综述了动物性腺特异表达基因研究的最新进展,旨在为从事该领域研究的工作者提供参考信息。

水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率。结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24)。该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用。

猪精子和睾丸组织RNA的初步分析

试验采用Trizol一次法提取猪精子和睾丸组织的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中Protamine-1(PRM-1)、Protamine-2(PRM-2)、Clusterin、Heat shock protein 90(HSP90)、C-myc基因的mR-NA是否存在;通过不同精子数量的使用,检测在本试验条件下扩增出清晰PRM-1带所需要的适宜精子数量;通过琼脂糖电泳检测精子与睾丸组织RNA的电泳特征。结果,猪睾丸组织中有PRM-1、PRM-2、Clusterin、HSP90、C-myc的mRNA,而射出的猪精子(上游处理)本试验只检测出PRM-1的mRNA;在使用RNA沉淀剂时,3.0×107～6.5×107精子可得到清晰的PRM-1条带;本试验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖胶电泳图。初步研究的结果表明:射出猪精子中存在的RNA种类与睾丸组织中存在的RNA种类差异大;猪精子RNA的18S和28S片段与睾丸组织无明显差异。猪精子的RNA需要更多的研究。

水牛SRY基因的克隆及序列分析

根据荷斯坦牛SRY基因设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术,以中国沼泽型水牛(Swamp Buffalo)基因组DNA为模板,扩增得到SRY(Sex deterimation region of Y chromosome)全序列约2005bp,其中1-504bp为5’启动子区,1196-2005bp为3’侧翼序列,在505-1195bp为SRY的外显子,编码229个氨基酸。在SRY HMG-box区域设计探针,用地高辛标记后分别与雄性、雌性水牛基因组DNA进行Southern杂交,结果显示该段序列只在雄性DNA样本中有杂交信号,证明SRY基因为雄性特异。BLAST比对结果显示与牛属动物SRY基因的同源性为96％,其中SRY基因HMG box区域同源性高达99％,说明SRY基因具有高度的进化保守性。

小鼠性腺特异表达基因(GSE)的克隆及初步研究

从小鼠的睾丸中克隆了GSE(gonad-specific expression gene)基因,并对该基因进行序列分析和Southern、Northern杂交分析。核苷酸序列分析表明,GSE基因的ORF长度为745 bp,编码247个氨基酸,预测蛋白质分子量为27.6 kDa;Southern杂交证明GSE可能是单拷贝的基因;Northern杂交显示,GSE基因在小鼠体细胞组织(心脏、肝脏、肾脏、大脑、骨骼肌和脾脏)中没有检测到其表达,在睾丸中表达量很高,在卵巢中表达量较低。从推断出的氨基酸序列表明,GSE蛋白在细胞中可能是一个不带有信号肽的可溶性蛋白。

低评分胚胎发育潜能的研究

目的:探讨低评分胚胎体外囊胚培养的发育潜能。方法:将IVF/ICSI周期中第3天的低评分胚胎进行体外囊胚培养,观察胚胎发育情况,将形成的致密桑葚胚和囊胚进行玻璃化冷冻,并进一步观察这些冷冻胚胎冻融后的临床结局。结果:613周期中2058枚低评分胚胎进行囊胚培养后共获得753枚囊胚和13枚致密桑葚胚,囊胚形成率为36.59%;共冻胚322枚,冷冻胚胎率为15.65%;其中有低胚冷冻的周期为220,冷冻周期拥有率为35.89%;54例冻融有低胚移植周期中有18例临床妊娠,临床妊娠率为33.33%。结论:将低评分胚胎进行体外囊胚培养,可以筛选出具有发育潜能的胚胎,提高胚胎利用率和累计妊娠率。

玉带凤蝶发生规律及其人工饲养技术

本文介绍了玉带凤蝶的形态特征、生活特性、人工饲养技术及饲养过程中应注意事项。

不同脱颗粒细胞时间对体外受精胚胎移植的影响

目的：探讨短时受精后不同脱颗粒时间对体外受精胚胎移植周期的影响。方法：将行常规IVF治疗患者的同周期卵子分为两组（除去完全受精失败以及受精率低下的治疗周期），即短时受精即刻脱颗粒细胞组（A组：精卵孵育4h后即刻脱颗粒细胞）和短时受精并次日晨脱颗粒细胞组（B组：精卵孵育4h并受精后17～18h脱颗粒细胞），比较两组的受精率（2PN率）、多精受精率（多PN率）、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率。结果：两组的受精率（2PN率）、多精受精率（多PN率）、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率之间差异无统计学意义。结论：精卵孵育4h后去除颗粒细胞对受精、胚胎发育没有显著影响。

体外受精-胚胎移植中受精失败的原因及补救措施

在接受体外受精(in vitro fertilization,IVF)或卵细胞浆内单精子注射(intra-cytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕的患者中,受精率一直是患者普遍关心的问题。不幸的是,虽然国内外的学者作了大量的研究和探索工作,但是受精失败及低受精率仍然时有发生。因为受精过程是一个非常复杂的生物过程,中间任何一个环节出现了问题都可能导致受精失败。虽然整个受精过程的一些步骤和环节已被广泛认知和接受,但仍有很多调控机制不为人知或知之甚少。本综述旨在对目前已知并被广泛认同的受精失败的原因进行探讨。

辅助生殖技术中PGT嵌合体胚胎的发生比例及处理对策

目的 探讨辅助生殖技术中胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing, PGT)嵌合体的发生比例以及嵌合体胚胎移植的相关风险及处理对策。方法 回顾性分析2018年3月至2020年9月在中国人民解放军联勤保障部队第九二四医院生殖医学部行PGT的276例患者,共704枚活检胚胎(囊胚)的二代测序结果,分析嵌合体的发生比例和不同嵌合类型的占比,以及6例移植嵌合体胚胎(单条染色体或单一片段嵌合)患者的临床结局。结果 活检的704枚胚胎中,有8枚胚胎样本未通过质检无法测序,进行二代测序的696枚胚胎结果显示,染色体异常胚胎占比为44.25%(308/696)。在染色体异常的胚胎中,多条染色体或多条片段嵌合的胚胎占31.17%(96/308),单一染色体或单一片段嵌合的胚胎占19.48%(60/308)。6例移植嵌合体胚胎的患者,2例已分娩(外观无异常),1例早期生化妊娠流产,3例未妊娠。结论 辅助生殖技术中嵌合体胚胎约占染色体异常胚胎的50%,但是部分单一染色体片段嵌合且嵌合率较低的胚胎有获得健康活产婴儿的可能。如何选择合适的嵌合体胚胎进行移植,还需要结合遗传咨询以及大量产前诊断和活产随访数据进行综合考量。

基于热管的乏燃料池冷却关键技术研究与应用

2011年日本福岛事件之后,乏燃料池(SFP)事故后的长期冷却问题广受关注,日本原子能协会对福岛事件进行总结,明确提出乏燃料水池冷却需要建立乏燃料池的自然循环冷却系统,即使丧失电源也可以导出衰变热.然而,AP1000发生极端事故后乏燃料水池的冷却只能依靠池水的蒸发,没有长期的非能动自然循环冷却,这会带来一系列问题,例如沸腾产生大量蒸汽对环境产生明显影响、有乏燃料组件破损会产生放射性外泄、向乏燃料水池补水时会导致硼逐渐稀释等.而且AP1000的乏燃料池冷却系统(SFS)非能动补水冷却,只能确保事故后72 h的乏燃料安全,乏燃料池长期冷却还依赖于移动泵等厂外支援进行补水.