间接 ELISA 和 HI 方法检测鸡新城疫病毒抗体的相关性分析

分别采用商品化的酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对152份临床血清样本和标准阴阳性血清进行新城疫病毒(NDV)抗体检测,比较间接 ELISA 和 HI 两种方法的相关性。研究结果表明,间接 ELISA 和 HI 两种方法呈显著相关,二者间的相关系数为0.9261。间接 ELISA 和 HI 两种方法检测 NDV 抗体的阳性符合率为96.8%,阴性符合率为92.9%,间接 ELISA 方法是一种敏感、特异、快速的血清学诊断方法,可以用于临床样本的大规模检测。

鸡传染性喉气管炎ELISA试剂盒的应用研究

通过对不同来源的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)血清的检测,进行ELISA试剂盒检测ILTV抗体的应用研究,并与传统的琼脂扩散试验(AGP)方法进行了比较。研究结果表明该试剂盒具有较好的敏感性、特异性和重复性,与AGP方法相比,其敏感性大大提高。ILT诊断用ELISA试剂盒可以应用于养禽生产实践中。

传染性支气管炎病毒受体及其纤突蛋白受体结合域研究进展

传染性支气管炎(IB)是一种由冠状病毒科γ属传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种高度接触性传染病,有多个临床致病型。位于冠状病毒囊膜上的纤突蛋白(S)是病毒组织嗜性和致病性的主要决定因素,S1蛋白上受体结合域(RBD)与宿主细胞受体的结合是病毒感染的第一步,α和β属多种冠状病毒纤突蛋白(S)与宿主受体相互作用机制已研究得比较清楚,目前IBV受体及受体结合域是研究的热点。论文就近几年来IBV S蛋白的受体结合域、受体多样性、S1蛋白变异对RBD的影响及S2蛋白对IBV细胞嗜性的影响等方面研究进展进行综述,以期为揭示其致病机制,研制更有效的疫苗、抗病毒药物及诊断制剂等提供参考。

山东省禽源致病性大肠杆菌流行病学监测及耐药模式分析

禽大肠杆菌病是养禽业广泛存在的细菌性疾病,是造成禽肉产品废弃及药物治疗费用高的重要原因。为了解近年来山东省禽源致病性大肠杆菌的流行及其耐药性演化情况,对2016—2020年疑似患病禽进行致病性大肠杆菌分离鉴定和耐药性检测。从山东省12个地市的105份病料中共分离到93株致病性大肠杆菌。PCR检测发现,禽致病性大肠杆菌与其他呼吸道病原的混合或继发感染较严重,其中与H9亚型禽流感病毒等病原的二重感染率为67.74%,多重感染率为11.83%,而禽致病性大肠杆菌单一感染率仅为20.43%。耐药检测发现:分离菌株对阿莫西林、氨苄西林和多西环素的耐药率较高,分别为100%、98.21%和94.59%;对丁胺卡那霉素和阿奇霉素的耐药率较低,分别为20.43%和13.33%;对复方药物氨苄西林/舒巴坦和阿莫西林/棒酸的耐药率也相对较低,分别为40.91%和17.86%;94.62%的分离菌株对3种及以上药物产生耐药。研究表明,山东省禽源致病性大肠杆菌流行形势严峻,且耐药程度严重,应加快新抗菌药物及复合型抗菌药物研发,减少并合理使用抗菌药物,禁止滥用。

2018~2021年传染性喉气管炎在山东商品肉鸡中的发生和防控

2018~2021年间,山东部分地区的商品肉鸡等陆续发生了278例传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)疑似病例。经实验室PCR检测和病原分离鉴定,初步确诊为传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis virus,ILTV)。利用SPF鸡胚,进行绒毛尿囊膜接种,结果分离到23株ILTV。选取10株ILTV毒株,对其结构蛋白gB基因进行了测序,比较了其核苷酸同源性,绘制了系统发育树,揭示了ILTV分离株及其与疫苗株的关系。此外,本文还分析了疫苗免疫在防控过程中所起的关键作用,对于如何预防和控制ILT具有重要的指导意义。

转移因子的组成和作用机制研究

转移因子(Transfer Factor,TF)是白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类可透析和传递"信使"小分子物质,它携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,在受者体内能够诱导T细胞转变为致敏性淋巴细胞,并能够特异地将供者的细胞免疫力被动的转移到受者体内,使受者获得细胞免疫功能,即转移和扩大细胞免疫力。

肉鸡传染性喉气管炎的发生和诊断及其PCR诊断方法的建立

传染性喉气管炎(ILT)是家禽重要的呼吸道疾病,主要危害成年鸡和产蛋鸡。但是,自2019年4月以来,在山东省多个地区发生多起商品肉鸡、地方品种肉鸡等感染该病并致病现象。临床主要表现为严重的呼吸困难、喘鸣、打喷嚏和伸颈呼吸,严重的咳出带血的分泌物,呼吸道粘膜出血和充血。经绒毛尿囊膜接种10日龄SPF鸡胚,5 d后可产生典型的绒毛尿囊膜病变。参考GenBank中传染性喉气管炎病毒(ILTV)的序列,设计出一对针对其ICP4基因的特异性引物,对可疑病料和分离出的病原分别进行PCR扩增,结果扩增出目的条带,经测序证实为ILTV。特异性和敏感性试验证实,新建立的PCR可快速、准确地鉴定出病原,具有一定的临床推广应用价值,为有效防控ILT的发生奠定了基础。

转移因子在家禽疫病防控中的应用

转移因子（Transfe Factor,TF）是动物白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质。TF携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,在受者体内能够诱导T细胞转变为特异性致敏淋巴细胞,因此,它能够特异地将供者的细胞免疫被动地转移到受者体内.

2016—2017年山东省济南市犬布鲁氏菌病血清流行病学调查

为初步了解山东省济南市犬布鲁氏菌病流行情况,2016—2017年,在济南市5个辖区采集502份犬血样,利用竞争ELISA抗体试剂盒、虎红平板凝集试验,分别检测光滑型(猪、牛、羊种)和粗糙型(犬种)布鲁氏菌抗体。结果显示,济南市犬布鲁氏菌光滑型、粗糙型抗体阳性率分别为8.76%、1.99%。结果表明,济南市宠物犬中的光滑型布鲁氏菌感染率较高,潜在传播风险较大,应引起高度重视。

貂源肺炎克雷伯氏菌对小白鼠的致病性及其药物防治研究

为评价貂源肺炎克雷伯氏菌(抗原型K2-5)的致病性和药物防控效果,利用水貂和小白鼠分别进行动物回归试验和半数致死量(LD_(50))毒力测定,旨在建立小白鼠致病模型。同时,按1 LD_(50)剂量接种小白鼠,选用盐酸洛美沙星分别按0.05(低)、0.2 mg/只(高)两个不同的剂量进行饮水预防和治疗,同时设攻毒和健康对照,观察、记录和比较试验结果。结果表明:该菌对小白鼠腹腔注射的LD_(50)为6.29 CFU/0.3 m L。药物试验表明,高剂量组预防和治疗效果显著优于低剂量组,预防组优于单纯的治疗组,而攻毒组则100%发病,存活率仅为60%。该结果为临床防控貂源肺炎克雷伯氏菌病提供了依据。

戊二醛癸甲溴铵溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果研究

以大肠杆菌(E.Coli.)和金黄色葡萄球菌(S.A)为杀菌对象,按照常规消毒剂的标准,评价了戊二醛癸甲溴铵溶液(JM)的消毒效果,同时选择国外同类产品(FG)作对照。结果表明:当JM1∶700稀释时,其对E.Coli.的杀菌率为99.96%;而FG则降至93.00%。当JM在1∶1000稀释时,对S.A.的杀菌率为99.86%;而FG仅为82.04%。当两种消毒剂分别按1∶128稀释时,JM对E.Coli.杀菌率达100%时仅需2 min,而FG则需要5 min才能达到同样的效果。对S.A的杀灭试验则显示出同样的规律。新研制的戊二醛癸甲溴铵溶液杀菌效果明显优于国外同类产品。

禽源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测

了解规模化养禽场的大肠杆菌耐药情况,为合理选择抗生素提供参考。对山东、河北等地2013～2014年送检病禽进行细菌分离鉴定,对获得的大肠杆菌用17种药物进行敏感性试验。结果表明：在分离鉴定的28株大肠杆菌中,有27株对17种药物存在不同程度的耐药性。其中,对氨苄西林、氯霉素高度耐药,分别为96.43%和89.29%;对阿米卡星、多粘菌素和加替沙星耐药率较低分别为32.14%、35.71%和42.86%,对舒巴坦钠与氨苄西林、头孢曲松、头孢克洛、头孢呋辛、头孢噻肟的组合物耐药率最低,为7.14%。研究发现大肠杆菌分离株的耐药性较为严重,应高度重视对大肠杆菌的耐药性跟踪监测并根据药敏结果筛选合适的药物。

外源性新城疫和禽流感抗体在SPF鸡体内的动态消长规律

选取2月龄SPF鸡100只,随机分组,分别设接种(肌注和口服)、攻毒保护和对照(正常和发病)组。检测SPF鸡接种不同接种途径、时间等血清中新城疫(Newcastle disease virus,NDV)和禽流感(Avian influenza virus,AIV)不同亚型(H5、H9N2)抗体滴度的变化,进而探讨不同抗体在体内的消长规律。结果表明:肌肉注射组的ND、H5(RE-4和RE-6)和H9N2抗体在注射后14d内,每天的抗体水平均显著高于对照组(P<0.01),且注射后抗体滴度在24h内达到峰值,高水平抗体至少可维持5d。口服抗体效果较差。动物攻毒试验表明,抗体对NDV具有较好的保护效果。

一例由疫苗接种引起的商品肉鸡多病原混合感染

为确诊山东某商品肉鸡群发病的原因,采集病死鸡的喉头、气管等组织,分别进行核酸和病原分离鉴定。结果显示,传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和禽腺病毒4型(FAd V-4)等特异性PCR均呈阳性,而新城疫病毒(NDV)、低致病性禽流感H_(9)N_(2)等均为阴性。测序结果表明,ILTV分离株(PY)与疫苗株(K317)ICP4基因的核苷酸同源性为100%;而IBV分离株(PY)与疫苗株H120、4/91 N基因的同源性分别为86.4%、86.6%,显示出较大的差异。CAM途径接种鸡胚分离出腺病毒,且对SPF鸡胚具有一定的致病性。同时,从病鸡肝脏中分离到大肠杆菌,药敏试验证实对多粘菌素B、健牧茶多酚、阿莫西林棒酸、头孢噻肟敏感,采用敏感药物治疗后取得一定的临床治疗效果。综上所述,该病是一起由疫苗接种应激而引起的多病原混合感染。

佐康对油苗免疫效果的影响

为解决注射油苗对家禽造成的应激问题,对佐康配合疫苗的免疫效果进行了测定,结果表明,注射油苗时配合佐康,因注射油苗造成的产蛋下降幅度明显低于不用佐康的对照组。因此,佐康能有效减轻疫苗引起的应激反应。

中国禽源新城疫病毒(NDV)流行株F和HN基因的遗传演化和变异频率

【目的】新城疫(ND)是中国流行最严重的疫病之一,对家禽业可造成巨大的经济损失,疫苗防控是控制ND的重要措施。新城疫病毒(NDV)流行株的遗传演化一直是研究NDV的焦点。本文利用分子信息学手段,通过比较近20年间NDV流行株不同基因型F和HN基因的分子特征和遗传变异频率,解析免疫压力下NDV的演化规律。【方法】利用Lasergene 7.1和MEGA5.1软件,选取本实验室89株NDV分离株,结合从Gen Bank下载的364株NDV流行株以及15株NDV经典毒株的基因序列,对其进行系统发育、分子特征和替代频率分析。【结果】系统发育表明,NDV已经演化为15个基因型。一致性比较显示,NDV流行株相同基因型之间核苷酸(氨基酸)高度同源,而不同基因型之间差异较大且存在明显的氨基酸变异积累。NDV基因型的分布与时间、地域密切相关,VII d亚型为中国NDV优势流行株。为评估NDV变异的频率,以Go/GD/QY/1997株(中国较早发生的基因VII亚型)为参照,1997-2015年间NDV的F/HN基因的年平均核苷酸(氨基酸)替代率为2.31×10^(-3)(2.26×10^(-3))/3.37×10^(-3)(2.35×10^(-3))。其中,1997-2001年(未使用基因VII型疫苗)F/HN基因核苷酸年平均替代率为4.72×10^(-3)/8.28×10^(-3);2002-2015年(疫苗使用后)为1.6×10^(-3)/1.84×10^(-3),显示出基因VII型疫苗在控制NDV变异速度方面具有明显的效果。【结论】生物信息学分析证实:研制出与NDV流行毒株相匹配的新型疫苗是控制当前NDV变异的关键。

鸡脾水解液对鸡淋巴细胞和巨噬细胞免疫调节的影响

为了定量研究鸡脾水解液对鸡的免疫增强功能,将SPF鸡随机分为4组,按高、中、低剂量分别灌服鸡脾水解液,并设立空白对照组来测定不同剂量鸡脾水解液对鸡T淋巴细胞数量的影响;将SPF鸡随机分为两组,采用鸡脾水解液点眼滴鼻的方式考察其对鸡巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明:鸡脾水解液在持续用药第7天和第14天,所有接种组的T淋巴细胞百分率均显著高于空白对照组,其中高剂量组比对照组高约30百分点,差异极显著(P<0.01);停服后第7天,高剂量组T淋巴细胞百分率仍高于对照组约10百分点,差异显著(P<0.05)。通过碳廓清试验证实了鸡脾水解液还能明显提高巨噬细胞吞噬指数,试验组在点眼滴鼻鸡脾水解液后第2天和第5天巨噬细胞吞噬指数增长率比对照组分别高36.61百分点和29.54百分点。说明鸡脾水解液具有免疫增强的功能。

一株源自孔雀的新型支原体的鉴定及其致病性和基因组分析

【背景】Mycoplasma gallinaceum(MGC)是禽源支原体的一种,仅在南非、英国等地发生,我国鲜有报道。【目的】从患呼吸道病的孔雀气管中分离到一株支原体,命名为Peacock20181011,确定其分类、致病性和基因组特征。【方法】利用微生物学常规方法,结合分子生物学检测和基因组序列,对其进行鉴定;通过对Special pathogenic free(SPF)鸡、鸡胚的致病性研究和最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)测定,确定其致病性和药敏性。【结果】通过对分离菌的培养、纯化、形态学和染色观察,结合生化试验和16SrRNA基因测序证实,该菌为一株新的MGC,与模式菌株NCTC10183的16S rRNA基因相似性高达99.86%,系统发育树显示该菌与MGC属同一分支;人工感染实验表明该菌对SPF鸡无致病性,但可造成SPF鸡胚发育迟缓,爪部蜷缩;MIC结果显示该菌对单硫酸卡那霉素和氟苯尼考等敏感。基因组序列表明,该菌基因组长度为1183913 bp,(G+C)mol%含量为28.7%,含有898个Coding sequences(CDS),拥有4个拷贝的16S rRNA基因和6个质粒,预测有20个毒力因子基因和2个耐药基因。【结论】明确了MGC在我国的存在,丰富了中国禽源支原体的种类,为支原体病的防控提供了依据。

转移因子对肉鸡增重及细胞因子影响的研究

为了探讨转移因子(TF)对肉鸡增重及细胞因子的影响,试验将随机选取的200只1日龄健康肉鸡分为4组,1~3组自5日龄开始灌服不同剂量的TF,分别为0.1 mL/只(T1组)、0.25 mL/只(T2组)、1 mL/只(T3组),第4组为空白对照(不灌服TF,CK组)。每次连续灌服7 d,间隔7 d后再次灌服,共灌服3次。在每个灌服期末,即第12,26,40日龄进行称重,采血检测白细胞介素2(IL-2)、肌肉生长抑制素(MSTN)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,利用DPS 2000软件进行统计学分析,Origin 9.0软件进行相关性分析,并选择使肉鸡增重最明显的TF剂量进行田间推广试验。结果表明:给肉鸡灌服TF后,T1~T3组的平均体重在第26,40日龄均明显高于CK组,尤其是在第40日龄时,T1~T3组与CK组比较差异显著(P<0.05);T1~T3组IL-2的分泌量比CK组显著增加(P<0.05),而MSTN和TGF-β1的分泌量显著减少(P<0.05);IL-2含量和体重之间呈正相关,而MSTN、TGF-β1含量和体重之间呈负相关;TF应用组肉鸡体重比空白组提高4.12%。说明连续使用TF具有明显的增重效应,且与细胞因子的调控密切相关。