健脾扶正汤治疗心脾两虚型癌因性疲乏的研究

目的:观察健脾扶正汤治疗心脾两虚型癌因性疲乏(cancer-related fatigue,CRF)的临床疗效。方法:将100例行化学治疗的CRF患者按1∶1的比例分为两组,每组50例。治疗组给予健脾扶正汤(药物组成:黄芪、龙眼肉、人参、太子参、白术、酸枣仁、远志、木香、茯神、炙甘草),1剂/d,水煎2次,取药汁400 mL,200 mL/次,2次/d,口服。对照组给予药物含量5%以内的健脾扶正汤稀释模拟剂(外观、剂型、重量、颜色、气味均与治疗组药物一致,药液∶水为1∶20)治疗,服用方法同治疗组。两组均于化学治疗(以下简称化疗)第1天开始服用,治疗21 d时根据卡氏功能评分(Karnofsky performace score,KPS)判定疗效,并对比Piper疲乏修订量表评分(the revised Piper fatigtle scale,PFS-R)及血常规。结果:治疗组提高25例,稳定21例,降低4例,好转率为92.00%(46/50);对照组提高13例,稳定14例,降低23例,好转率为54.00%(27/50)。两组疗效对比,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后,治疗组PFS-R评分低于对照组(P<0.01),白细胞、血红蛋白、血小板水平下降幅度小于对照组(P<0.01)。结论:健脾扶正汤治疗心脾两虚型CRF疗效确切,能改善疲乏症状,改善贫血,提高患者生活质量。

猪2型圆环病毒核酸疫苗的构建、鉴定和表达

以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分别酶切鉴定后,转染BHK-21和PK-15细胞进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting检测。结果表明,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。

猪圆环病毒2型内蒙古株全基因组的克隆及序列分析

取内蒙古某猪场疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征 (PMWS)病猪的肝、淋巴结、肺、脾等器官组织病料 ,处理后负染 ,透射电镜观察到约 17nm的病毒粒子。用 PCR法从病料中扩增获得 2型猪圆环病毒的全基因组序列 ,其全长为176 7bp,与 Gen Bank中公布的 11株 PCV- 2型序列比较 ,同源性为 95 .2 %～ 99.8%

盐酸羟考酮控释片联合加巴喷丁治疗癌性神经病理性疼痛的疗效观察

目的观察盐酸羟考酮控释片（以下简称羟考酮）联合加巴喷丁治疗癌性神经病理性疼痛的临床疗效。方法40例Ⅲ、Ⅳ期恶性肿瘤合并癌性神经病理性疼痛患者，随机分为2组：单药组20例给予羟考酮治疗，联合组20例给予羟考酮联合加巴喷丁治疗。比较2组治疗前后羟考酮的用量、镇痛效果、生活质量和不良反应。结果2组治疗后疼痛均有不同程度的缓解，且联合组优于单药组（P〈0．05）；羟考酮日均用量联合组低于单药组（P〈0．05）；2组患者生活质量均较治疗前有改善，组间差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组便秘及恶心呕吐的发生率低于单药组（P〈0．05）。结论盐酸羟考酮控释片联合加巴喷丁能有效控制癌性神经病理性疼痛，减少羟考酮的用量及不良作用，并能提高患者的生活质量。

大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达

根据大肠杆菌 O15 7Z4182基因设计 1对引物 ,并在其 5′端分别加入 Nco 、Xho 酶切位点 ,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌 O15 7及 1株产志贺毒素大肠杆菌 (STEC) O8、1株肠道聚集粘附大肠杆菌 (EAgg EC)和 1株产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)菌株中也扩增出了 80 3bp的 DNA片段。以大肠杆菌 O15 7菌株 94H的 DNA为模板 ,用上述引物做 PCR,将其产物连接到载体质粒 p ET2 8a(+) ,然后转化到宿主菌大肠杆菌 L E392 ,从该菌中提取重组质粒 ,再将其转化到表达宿主大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,用 PCR、限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定 ,表明 Z4182基因定向克隆到了载体质粒 p ET2 8a(+)。将转化子培养并经 IPTG诱导后 ,做SDS- PAGE电泳 ,表明该菌株可以表达 Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌 O15 7Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。

猪2型圆环病毒与O型口蹄疫病毒二联重组鸡痘病毒的构建和筛选

以pUTA2LacZ为真核表达载体,以中国流行株O型口蹄疫病毒(FMDV)NY00株结构蛋白前体P1基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了2个重组质粒作为中间转移质粒,标记为pUTALP1-ORF2和pUTALP1-ORF2ORF1。将这2个重组转移质粒分别酶切鉴定后,与鸡痘病毒野毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞。结果显示,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。经5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)加压筛选,挑取单个蚀斑,3次纯化,获得2株重组毒vpUTALP1-ORF2ORF1和vpUTALP1-ORF2。结果表明,这2株重组鸡痘毒在电镜下可形成完整的病毒粒子。

ECF与DOF方案治疗晚期胃癌的临床疗效观察

目的观察ECF方案（表柔比星联合顺铂、氟尿嘧啶）和DOF方案（多西他赛联合奥沙利铂、氟尿嘧啶）治疗晚期胃癌的临床疗效和不良反应。方法将68例确诊为晚期胃癌患者分为两组,其中ECF组30例,DOF组38例,ECF方案：表柔比星50mg/m2第1天,顺铂20mg/m2第1~3天,氟尿嘧啶500mg/m2第1~5天;DOF方案：多西他赛75mg/m2第1天,奥铂130mg/m2第1天,氟尿嘧啶500mg/m2第1~5天。21d为1个周期,两组均治疗2个周期以上。根据WHO的标准评价其有效性和毒性。结果 68例患者均可评价疗效,ECF组有效率为46.67%（14/30）,DOF组有效率为42.11%（16/38）。不良反应主要为骨髓抑制、胃肠道反应、脱发、神经毒性等,DOF组神经毒性发生率39.47%（15/38）高于ECF组的13.33%（4/30）,ECF组恶心呕吐发生率93.33%（28/30）高于DOF组的68.42%（26/38）,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ECF方案与DOF方案对晚期胃癌的疗效相似,不良反应可以耐受。

水貂绿脓杆菌(山东株)血清分型和ERIC-PCR分型的研究

为了探明水貂出血性肺炎病原和流行特点,2011-2012年对山东省15个水貂养殖场进行水貂出血性肺炎流行病学调查。从病貂中分离出19株绿脓杆菌,分别测定了分离株的血清型,同时应用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）对菌株进行DNA分型。结果 19株分离株中血清型G型15株,血清型B型2株,血清型E型和I型各1株;ERIC-PCR谱型表现为7种基因型,其中15株G型株存在于谱型Ⅰ-Ⅶ中（Ⅵ除外）,B型株属于谱型Ⅱ,I型株属于谱型Ⅳ,E型株属于谱型Ⅵ。表明山东地区水貂出血性肺炎由绿脓杆菌引起,其分离株血清型以G型为主,基因型呈现多样性。

鸡源巴氏杆菌的分离鉴定及致病性研究

从青岛农业大学动物医院的蛋鸡送检病料中,无菌采集病死鸡肺脏、肝脏组织进行细菌的分离培养和鉴定,并对鉴定的分离菌进行药敏试验和致病性试验。结果表明,分离菌在血琼培养基上呈圆隆、露滴状、表面光滑带荧光的白色菌落,染色镜检为革兰氏阴性短杆菌,经PCR鉴定该菌为多杀性巴氏杆菌;该菌对氟苯尼考、阿米卡星高度敏感,对头孢曲松、头孢氨苄、阿莫西林等13种药物表现出不同程度耐药;该菌对小鼠呈高致死性,表明该菌具有很强的致病性。

动物传染病学存在的问题及提高实践教学环节质量对策

为适应国内外社会对动物传染病防控水平不断提高的要求和增强动物医学专业学生在未来兽医人才队伍中的职业素质,基于动物传染病实践教学环节中存在的传染病新规律、新技术、临床实践经验等问题,从实践教学的综合性、案例模板、试验基地以及本科生导师制等方面进行了研究和探讨,旨在提高动物传染病实践教学质量,为培养新型创新型专业人才提供参考。

猪圆环病毒2型鸡痘病毒活载体疫苗诱导的CTL杀伤活性检测

通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细胞;构建重组质粒p Display-ORF2,并转染PK-15传代细胞,用G418多次筛选得到靶细胞。借助CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒从细胞免疫水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性评价该重组鸡痘活载体疫苗的免疫效果。结果表明,采用"Pri me pVAX1-ORF2ORF1,boost vPUTAL-P1-ORF2ORF1"的免疫方案所获得的杀伤活性最高达66.005%±2.671%(效靶比50∶1)和38.870%±2.883%(效靶比25∶1),显著高于对照组(P<0.01)。说明vUTA-P1-ORF2ORF1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,且以核酸疫苗首免,重组鸡痘活载体疫苗追加免疫的接种方案最优,为PCV-2基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。

犬瘟热病毒疫苗株与野毒株H蛋白球状头部域的免疫原性比较研究

以犬瘟热病毒疫苗株CDV3和野毒株LYM基因组RNA为模板,RT-PCR扩增得到CDV3和LYM的H全基因序列,PCR分别扩增得到CDV3和LYM-Head Domain基因,将其分别克隆于p ET-30a载体进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析表明,这两种重组蛋白均正确表达,分子质量约为50.8 ku。再将两种重组蛋白分别免疫小鼠,间接ELISA结果表明,这两种重组蛋白均能激发机体产生特异性抗体,具有一定免疫原性。中和试验结果表明,这两种重组蛋白的抗体中和效价差异不显著(P>0.05)。

山东牛轮状病毒的分离鉴定及其卵黄抗体应用试验

为研究卵黄抗体对牛轮状病毒(BRV)的预防与治疗效果,本试验收集山东某牛场的腹泻粪便样本接种MA104细胞进行病毒分离、纯化,采用RT-PCR和电镜进行鉴定。将分离株增殖灭活制成油苗多次免疫产蛋鸡,收集高免鸡蛋,用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体(IgY),用琼扩法测定抗体效价,进行安全性检测。选10头1日龄BRV阴性的犊牛,随机均分为2组,人工感染BRV,进行犊牛口服IgY疗效观察。结果显示:病毒盲传至第8代后出现稳定细胞病变,经蚀斑纯化后测得病毒滴度为10-5.62 TCID 50/mL;分离毒株经RT-PCR和电镜观察证实为BRV,命名为SD-LX株。SD-LX株灭活油苗免疫蛋鸡后得到滴度为1∶64的IgY,该抗体对犊牛感染BRV的保护率与对照组相比为100%,治愈率为40%。本试验成功分离到1株BRV,该毒株油苗免疫蛋鸡制成的IgY对犊牛BRV有良好的保护作用。

貂源绿脓杆菌山东分离株exoA-fliC基因的原核表达及其免疫原性研究

采用重叠PCR方法扩增水貂绿脓杆菌山东分离株(PASD01株)的exoA与fli C基因,并将两段基因嵌合后,克隆到表达载体p ET-30a上,转化到宿主菌BL21(DE3)中诱导表达,并对表达产物进行免疫原性分析。结果表明,重组嵌合蛋白在37℃,0. 8 mmol/L IPTG诱导7 h时表达量最高;经SDS-PAGE和Western Blot分析,该蛋白在约68 k D处出现特异性条带,与预期结果一致;该重组嵌合蛋白免疫小鼠后,最高血清效价可达1∶640 000。结论:水貂绿脓杆菌exoA-fli C嵌合蛋白具有良好的免疫原性,为其进一步发展成为新型亚单位疫苗来抵抗水貂出血性肺炎奠定基础。

动物传染病成人教学改革探讨

该文通过调查问卷的方式,分析总结成人教育学员的学习心理特点,介绍了动物传染病实行教学改革的对策。

猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究

为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。

替米考星可溶性粉在乌鸡体内的药动学研究

为研究替米考星可溶性粉在乌鸡体内的药动学特征,选24只(公母各半)体重相近的60日龄健康乌鸡,随机均分为2组,按照12 mg/kg体重剂量口服替米考星可溶性粉溶液,在给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、16、24、48、72 h分别采血1次,每次2 mL,用高效液相测谱法测定药动力学参数并分析,预试期14d,正试期3d。结果表明:消除半衰期(T1/2β)为(33.786±14.720)h,达峰时间(T_(max))为(1.125±0.311)h,峰浓度(C_(max))为(0.377±0.234)μg/mL,药时曲线下面积(AUC)为(2.322±0.713)μg/mL·h,平均滞留时间(MRT)为(9.346±1.155)h。研究表明,替米考星在乌鸡体内吸收快、分布广,消除缓慢,有很好的利用前景。

非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用

本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白,并进一步将其用于ELISA试验研究。参考非洲猪瘟病毒Con09/Bzz020株P54基因(E183L)的核苷酸序列,通过序列优化后合成P54基因,克隆至表达载体pET-30c(+),构建重组质粒pET-30c(+)-p54。结果显示,pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架,可高效表达分子量约20.7ku的p54蛋白,该蛋白表达稳定,具有可溶性,易于纯化,纯度高达900μg·mL-1,所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020株p54蛋白氨基酸序列相同;Western blot试验显示,表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应;ELISA试验显示,p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67。研究结果证实p54蛋白表达产量高,易于纯化,具有较好的抗原性,可用于非洲猪瘟ELISA诊断。

口蹄疫重组鸡痘病毒诱导猪特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测

目的:评价口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1诱导猪产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的能力。方法:用PCR方法亚克隆O型FMDVVP1基因C末端部分片段(第1 30～2 1 3AA)。将其插入真核表达载体pDisplay中,构建质粒pDisplay- mVP1。将pDisplay -mVP1转染PK 1 5细胞,经3次G41 8加压筛选,并用RT- PCR和IFA鉴定,证明获得表达目的基因的PK 1 5 /pDisplay- mVP1细胞。最后,利用该细胞作为靶细胞,用LDH法检测口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫猪的特异性CTL杀伤活性。结果:vUTAL3CP1免疫组在效靶比2 5∶1和5 0∶1时,CTL裂解活性分别达到42 . 84%±3 2. 1 %和61 . 94%±4 2. 8% ,显著高于灭活疫苗组与其它对照组(p <0 . 0 1 )。结论:vUTAL3CP1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,为进一步的FMDV基因工程疫苗的研究奠定了基础。

口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究

通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因，以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游，构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经Western blot和IFA检测，目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。动物实验表明，免疫小鼠T淋巴细胞明显增殖，特异性CTL杀伤活性较对照组显著提高；血清抗体能分别与O型和A型抗原反应，抗体效价均高于空白对照组，但较灭活苗低。