PIK3R3对三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的观察PIK3R3在三阴性乳腺癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖、迁移活动的影响和可能的机制。方法首先,采用免疫组织化学方法检测53例三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织标本内PIK3R3的阳性表达率,分析PIK3R3与临床病理参数(肿瘤TNM分期和淋巴结转移情况)之间的相关性。然后将人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231瞬时转染siRNA-PIK3R3,并设转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞(Blank)的对照组,Western blot检测细胞内PIK3R3的表达。在下调PIK3R3后,用流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,MTT法和Transwell实验分别测定MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,Western blot检测MDA-MB-231细胞内磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、雌激素受体(ERα)、G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)蛋白的表达。最后建立动物模型,下调PIK3R3后验证其对动物体内肿瘤的影响。结果PIK3R3在正常乳腺组织中的阳性表达率为22.64%(12/53),而在三阴性乳腺癌组织中的阳性表达率为60.38%(32/53),明显高于正常组织(P<0.01),且阳性表达率的高低与肿瘤TNM分期和淋巴结转移呈正相关(均P<0.01)。下调PIK3R3后,MDA-MB-231细胞的凋亡过程几乎未受到影响;Transwell实验结果显示siRNA-PIK3R3组穿膜细胞数为(89.9±7.3),siRNA-NC组为(161.3±24.7),空白对照组为(178.4±37.7),siRNA-PIK3R3组细胞迁移能力明显低于siRNA-NC组和空白对照组(均P<0.01);MTT检测结果显示,敲减PIK3R3可以显著抑制MDA-MB-231的增殖;Western blot检测结果显示,下调PIK3R3可促进GPER1的表达。下调PIK3R3的表达能够延缓小鼠体内肿瘤生长速度。结论PIK3R3表达与乳腺癌肿瘤分期密切相关,表明PIK3R3在乳腺癌的发生及发展过程中发挥重要作用。使用siRNA敲减PIK3R3后,细胞凋亡未受影响,却对MDA-MB-231细胞的增殖和迁移有明显抑制,这为乳腺癌的治疗和预后提供了新的研究方向。

KLF3通过STAT3调控乳腺癌细胞的运动、迁移及侵袭

目的 观察人类Krüppel样因子3(KLF3)对乳腺癌细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,并探索KLF3影响乳腺癌细胞运动、迁移及侵袭的潜在机制.方法 首先在乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)中,分别通过蛋白质印迹、实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、荧光素酶报告系统及染色质免疫共沉淀等实验方法验证KLF3对STAT3表达的调控作用;其次构建STAT3启动子的突变型质粒,进一步证实KLF3对STAT3启动子活性的影响;进而利用细胞划痕实验及Transwell法检测细胞运动、迁移、侵袭的能力;最后通过动物实验验证敲减KLF3对动物体内肿瘤转移的影响.结果 在MDA-MB-231细胞中敲低KLF3后STAT3的mRNA水平升高(3.58±0.65)倍,而在MCF-7细胞中敲低KLF3后STAT3的mRNA水平升高(2.28±0.19)倍(P<0.001).KLF3能够结合于STAT3的启动子区域,在MDA-MB-231细胞中敲低KLF3后STAT3的转录活性升高(2.47±0.87)倍,而在MCF-7细胞中敲低KLF3后STAT3的转录活性升高(2.63±0.65)倍(P<0.01);敲减KLF3能够抑制乳腺癌细胞的运动、迁移、侵袭能力,在此基础上沉默STAT3能够部分逆转KLF3的功能;敲减KLF3能够促进小鼠体内肿瘤转移.结论 敲减KLF3能够促进STAT3的转录活性,从而促进后者的蛋白表达;KLF3能够通过STAT3影响乳腺癌细胞的运动、迁移及侵袭,KLF3可能作为治疗转移性乳腺癌的潜在靶点.