棉纤维次生壁增厚相关基因的cDNA克隆与分析

以陆地棉品种“徐州 14 2”植株开花后 14、18、2 4、30d的棉纤维和胚珠离体培养 12d、并分别在添加 0 (对照 )和10 0 μmol·L- 1 ABA的培养基中继代培养 5h的棉纤维为材料 ,用mRNA差异显示技术分析其基因表达差异。回收到 2 0条差异条带。利用反向Northern杂交鉴别和分析阳性差异条带 ,结果表明 :PG39 4在次生壁开始增厚以后表达 ,又被ABA诱导表达 ,为质的差异 ;PC39 1为ABA增强表达 ,PG10 2、PG2 0 3和PC2 0 4为ABA减弱表达 ,这 4个差异条带为量的差异。BLASTX分析表明 ,这 5个EST与拟南芥的蛋白激酶、普通烟草的细胞色素P4 5 0单加氧酶、乙二醛酶Ⅰ、异黄酮还原酶同系物和拟南芥的异黄酮还原酶的相似性分别为 5 1%、92 %、85 %、4 4 %和 6 5 %。进而推测这 5个EST与棉纤维次生壁增厚相关。

杀虫剂西维因单克隆抗体的研制及鉴定

目的 制备特异性的西维因单克隆抗体。方法 合成了西维因的半抗原并对其进行了结构鉴定 ,将半抗原与牛血清白蛋白和卵清蛋白共价偶联分别制备免疫抗原和包被抗原。再将免疫的Balb c小鼠脾脏细胞与SP2 0小鼠骨髓瘤细胞融合 ,建立一株分泌西维因单克隆抗体的杂交瘤细胞。分析该杂交瘤细胞的染色体 ,并以间接酶联免疫吸附分析法 (ELISA)检测了单克隆抗体免疫球蛋白的类型及其与西维因的亲和性和特异性。结果 杂交瘤细胞的平均染色体数目为 98条 ,它分泌IgG1亚类的单克隆抗体 ;该单克隆抗体与西维因的亲和性较高 (IC50 =5 2ng mL)而与西维因结构类似物的交叉反应很小。结论 本实验成功的制备了西维因特异性的单克隆抗体 ,为其ELISA方法的建立提供了条件。

甲萘威ELISA方法的建立及初步应用

以方阵法筛选甲萘威ELISA的抗原和抗体浓度 ,并建立了甲萘威的标准抑制曲线 ;以直接竞争性ELISA为基础 ,考察了单克隆抗体的特异性和ELISA法的各种影响因素 ;在黄瓜样品中添加定量甲萘威 ,用ELISA法和HPLC法检测其中甲萘威的含量 .结果显示 ,ELISA法的最低检测限为 4 .1ng/mL ,单克隆抗体对甲萘威的特异性较强 ;甲萘威的ELISA法受分析液中离子强度、pH值、有机溶剂和样品基质浓度的影响 ;ELISA回收率在 89.4 %～ 10 3.2 %之间 ,变异系数为 7.8%～ 10 .7% ;ELISA和HPLC两种方法分析结果无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .本研究成功建立了甲萘威的直接竞争ELISA法 ,并将该方法初步应用于黄瓜样品中甲萘威的快速检测 .图 5表 2参