核纤层蛋白B1通过影响端粒酶活性调控肝癌细胞生长

核纤层蛋白B1(nuclear lamina protein B1,LMNB1)高表达于肝癌组织中,通过敲低LMNB1探讨其对肝癌细胞增殖的影响及其机制。利用siRNA在肝癌细胞中敲低LMNB1,Western blotting检测敲低效果,使用端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol assay,TRAP)检测其端粒酶活性变化。利用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测其端粒长度变化。并通过CCK-8、克隆形成、Transwell、划痕实验检测其生长,侵袭和迁移能力变化。利用慢病毒系统构建稳定敲低LMNB1的HepG2细胞,检测其端粒长度及端粒酶活性变化,采用SA-β-gal衰老染色检测细胞衰老情况,通过裸鼠皮下成瘤实验及对肿瘤后续的组化染色,SA-β-gal衰老染色,端粒荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测其对成瘤性的影响。最后利用生物信息分析的方法寻找LMNB1在临床肝癌组织中的表达情况,及其与临床分期、病人生存期的关系。HepG2和Hep3B中敲低LMNB1后端粒酶活性显著降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低,细胞和裸鼠成瘤实验证明稳定敲低LMNB1后端粒酶活性降低的同时端粒长度缩短,细胞发生衰老,此外细胞成瘤性降低,Ki-67表达降低,生物信息分析结果显示,LMNB1高表达于肝癌组织,且与肿瘤分期和患者生存相关。LMNB1在肝癌细胞中过表达,其有望成为评估肝癌患者临床预后的指标和精准治疗的靶点。

基于RNA-seq技术分析模拟微重力的作用机制

目的 利用RNA转录组测序技术(RNA-seq)筛选模拟微重力(SMG)作用前后的差异表达基因(DEG),并探讨SMG在转录组学层面对人体细胞的作用机制。方法 按照不同培养条件将人白血病细胞HL-60分为3组:常规重力(NG)组、SMG组和SMG-NG(SMGNG)组,利用RNA-seq筛选SMG作用前后HL-60细胞mRNA DEG;用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行功能注释,分析SMG调节的通路及在恢复NG后可快速回复及不可快速回复的通路。结果 与NG组相比,SMG组中共检测到735个DEG(424个上调和311个下调),其中有624个DEG的表达在SMGNG中可快速回复,110个DEG的表达在SMGNG中不可快速回复;GO、KEGG分析发现可快速回复的DEG与信号转导、脂质代谢、免疫调节及细胞凋亡高度相关,不可快速回复的DEG主要参与核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体信号转导相关通路、类固醇代谢和骨代谢过程。结论 初步明确了SMG调控的靶基因及信号通路,为进一步研究微重力的生物学功能及机制奠定了基础。