清解化攻方调控NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎小鼠模型胰腺组织的保护作用

目的观察清解化攻方对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠模型的治疗作用,探索清解化攻方抗炎症反应的作用机制。方法将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成空白组,模型组,清解化攻方低、中、高剂量组,西药组(乌司他丁),每组6只,除空白组小鼠,余各组小鼠采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立SAP模型,清解化攻方低、中、高剂量组在造模后分别予以清解化攻方1、2、4 g/kg灌胃,西药组在造模后予以腹腔注射乌司他丁(5×10^(4) U/kg),共干预7 d。采用苏木素-伊红染色观察胰腺组织病理改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α水平;RTqPCR检测胰腺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平;免疫组化检测胰腺组织NLRP3、TLR4、NF-κB的阳性表达率;Western Blot技术检测NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与空白组相比,模型组小鼠胰腺组织结构弥漫性破坏、胰腺小叶间隔局灶性扩张、腺泡萎缩和大量炎症细胞浸润,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显升高(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显上升(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达均明显上调(P值均<0.05)。与模型组相比,清解化攻方各剂量组和西药组可见小鼠胰腺组织结构稍紧密、完整,胰腺腺泡细胞排列有序,伴少量炎症细胞浸润和胰腺小叶出血灶,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显下降(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显降低(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达水平均明显减弱(P值均<0.05)。结论清解化攻方可能通过抑制NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的激活,减少炎症介质的释放,防止炎症级联反应增强,进而对SAP小鼠胰腺组织发挥保护作用。

基于网络药理学与分子对接技术探讨脊髓伤方治疗脊髓损伤的作用机制

目的采用网络药理学与分子对接技术探讨脊髓伤方治疗脊髓损伤(SCI)的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)与中国知网(CNKI)数据库筛选脊髓伤方的活性成分及其作用靶点,运用人类基因数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和治疗靶标数据库(TTD)等数据库挖掘SCI的疾病相关靶点;最终获取中药复方活性成分作用靶点与疾病相关靶点的交集靶点。运用Cytoscape 3.7.2软件与STRING数据库分别构建“活性成分-潜在作用靶点”和蛋白互作网络(PPI),筛选出潜在核心靶点;运用R软件和Metascape平台分别用于分析基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)途径的富集;对潜在靶点进行GO和KEGG富集分析。利用AutoDock Tools 1.5.6软件对关键化合物与核心靶点进行分子对接验证。结果共筛选获取138个活性成分及111个潜在作用靶点;获取到槲皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素、β-胡萝卜素等核心活性成分,白蛋白(ALB)、白介素6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、管内皮生长因子A(VEGFA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、表皮生长因子(EGF)、转录因子AP-1(JUN)、白介素1B(IL1B)、转录3的信号换能器和激活子(STAT3)等核心靶点;共筛选获取179条信号通路,关键通路包括糖尿病并发症中晚期糖基化终产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、松弛素(RLX)信号通路、甲状腺激素(TH)信号通路、叉头盒O(FoxO)信号通路、阿佩林(AP)信号通路等。分子对接结果的最小结合能均<-5.0 kJ/mol,提示对接较良好。结论脊髓伤方可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素、β-胡萝卜素等关键活性成分,调控ALB、IL-6、AKT1、VEGFA、CASP3等潜在核心靶点,调控AGE-RAGE、PI3K-AKT、HIF-1、RLX、TH、FoxO、AP等信号通路,进而发挥治疗SCI的作用。

基于中、西医临床病证特点的胃癌动物模型分析

胃癌死亡率居全球第四,因此对于胃癌发病机制、发展、转移、治疗的研究尤为重要。基于胃癌的中、西医临床特点,本研究对现应用的动物模型进行总结分析,根据中、西医临床诊断特点分析动物模型的临床吻合度。对于模型的评价,西医方面重视病理学、细胞学,其他方面关注较少;中医方面则病证结合胃癌动物模型目前研究较少,主要采用的是“以药测证”的方式进行发病机制、药物研究。本研究在分析胃癌动物模型临床吻合度的同时,分析、总结各种模型的优缺点及应用范围,并提出存在的问题,使胃癌动物模型进一步完善,更加符合临床病证要求,为胃癌的中西医结合的基础研究提供可供参考的动物模型,更好地服务于中、西医的基础研究。

清解化攻汤对急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障和血清炎症因子的影响

目的:探讨清解化攻汤对急性胰腺炎(AP)大鼠肠黏膜屏障及血清炎症因子的干预作用。方法:24只SD大鼠随机分成假造模组、模型组、西药组及中药组,每组各6只,运用雨蛙素联合脂多糖腹腔注射建立大鼠AP模型,成模后按分组给予相应药物干预,观察回肠组织的病理改变情况;检测血清淀粉酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、D-乳酸及内毒素水平;Western blot检测回肠组织紧密连接蛋白Occludin的表达情况。结果:与假造模组比较,模型组回肠组织病理损伤明显,回肠黏膜绒毛略不规整或破损,肠上皮下间隙稍见增宽,与固有层分离增大,局部炎性细胞浸润增多,内皮下及固有层充血及出血明显增多,模型组血清淀粉酶、TNF-α、IL-1β、IL-10、D-乳酸及内毒素水平明显升高(P<0.01),回肠组织Occludin蛋白相对表达量明显下降;与模型组比较,西药组和中药组病理改变明显减轻,血清淀粉酶、TNF-α、IL-1β、D-乳酸及内毒素水平均明显下降(P<0.01),血清IL-10及回肠Occludin蛋白相对表达量均明显增高(P<0.01);与西药组比较,中药组血清淀粉酶、D-乳酸及内毒素水平降幅更明显(P<0.05)。结论:清解化攻汤对AP大鼠的肠黏膜屏障有一定的保护作用,而且该方可降低血清促炎细胞因子水平,提高抑炎细胞因子水平,对AP大鼠血清炎症因子有明显的调控作用。

基于网络药理学和分子对接技术探讨独活寄生汤治疗退行性腰椎管狭窄症的分子作用机制

目的运用网络药理学的研究方法,初步分析独活寄生汤治疗退行性腰椎管狭窄症(DLSS)的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索和筛选独活寄生汤方药物的活性成分,同时在GeneCards、OMIM数据库中检索DLSS的靶点。利用Venny平台得到独活寄生汤治疗DLSS的潜在作用靶点。利用STRING数据库和Cytoscape软件构建独活寄生汤治疗DLSS的“单味药—活性成分—作用靶点”网络和蛋白质相互作用网络(PPI),并通过David数据库对独活寄生汤治疗DLSS的作用靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,研究独活寄生汤治疗DLSS的作用机制,并通过分子对接来模拟活性成分作用于靶蛋白的结合情况。结果共探索出独活寄生汤主要涉及1939个有效活性成分及对应292个潜在靶点,DLSS靶点1258个,筛选出共同靶点122个。经PPI互作图显示蛋白ALB、AKT1、IL-6、IL-1B、CASP3等存在较多连线。药物-活性成分-靶点网络图显示,度值较高的活性成分主要涉及柚皮素、芒柄花黄素、甘草查尔酮A、黄芩素等,被影响较多的靶点为PTGS2、ESR1、HSP90AA1等。GO功能分析提示,关键靶点基因在生物过程(BP)主要参与了对氧化应激的反应、对脂多糖的反应、细胞对化学应激的反应等,在分子功能(MF)主要参与了脱氧核糖核酸-结合转录因子结合、信号受体激活剂活性、肽结合等,在细胞成分(CC)主要参与了膜筏、膜微区、囊腔等细胞结构,由此推测,治疗作用机制可能与信号转导蛋白、活性酶调节、炎症反应等有关。KEGG通路富集分析提示,关键通路主要涉及AGE-RAGE、IL-17、TNF等信号通路。结论借助网络药理学的研究方法,发现独活寄生汤治疗DLSS具有多靶点、多通路的特点,从抗炎、抗氧化、抗纤维化、抑制破骨细胞活性、促进成骨细胞活性等多个机制发挥治疗作用。

靶向Wnt/β-catenin通路中医药防治胃癌的研究进展

胃癌是一种发生在消化系统高死亡率、临床治疗效果不佳的恶性肿瘤。目前临床上治疗胃癌的效果不佳且预后较差,发病机制尚未清晰,常涉及多条信号通道。Wnt/β-catenin通路作为消化系统肿瘤信号经典传导通路之一,其异样激活会启动靶基因及相关因子转录、翻译、表达进程,与胃黏膜病变甚至胃癌的发生进展息息相关。中医药作为我国几千年一直延续下来的医学,在防治疾病过程中重视整体观念辨证论治。鉴于中医宏观调控与西医微观调控互补关系,协同中医药靶向治疗胃癌已经成为新的医学热点。因此,立足于近年研究者关于中医药干预Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭转移、自我更新等方面的研究,科学总结阐述中医药能够干预靶向Wnt/β-catenin信号通路上的靶点、效应点防治胃癌的机理,这有利于为中医药临床靶向治疗胃癌提供系统的科学依据。

解毒化瘀颗粒治疗急性肝衰竭的研究进展

急性肝衰竭是指多种因素引起的大量肝细胞坏死导致肝脏的合成、解毒、排泄、生物转化等功能发生严重障碍的一组临床综合征,其病死率极高。解毒化瘀颗粒是广西名中医毛德文教授根据其对肝衰竭“毒”“瘀”“虚”病机的认识所创药方,验之临床疗效颇著。本文结合现代药理学研究,针对解毒化瘀颗粒治疗急性肝衰竭的理论基础、疗效及作用机制的研究进展进行综述,以期为急性肝衰竭的治疗提供更全面、更精准的解决方案。

基于TLR4/NF-κB/MyD88通路探讨清解化攻方抑制雨蛙素诱导重症急性胰腺炎模型大鼠炎症反应的生信分析及实验验证

目的基于TLR4/NF-κB/MyD88通路探讨清解化攻方抑制雨蛙素诱导重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠炎症反应的网络药理学分析及实验验证。方法采用网络药理学方法收集清解化攻方有效成分群和潜在靶点,构建药物-成分-靶点网络图,作用靶点通过Metascape数据库GO和KEGG富集分析,筛选SAP炎症相关的靶向通路。采用雨蛙素联合脂多糖复制SAP大鼠模型,予清解化攻方灌胃;HE染色观察胰腺组织,酶联免疫吸附实验和免疫组化验证清解化攻方对SAP大鼠的抗炎作用及其对TLR4/NF-κB/MyD88靶点通路的调控作用。结果预测并筛选得到清解化攻方有效成分105种和124个SAP关键作用靶点;KEGG富集到包含Toll样受体经典通路与NF-κB通路在内的320条不同通路。动物实验验证清解化攻方可降低SAP大鼠血清淀粉酶、血清脂肪酶活性及IL-6、TNF-α水平;HE染色观察到清解化攻方对胰腺病理组织改变的影响,并抑制炎症转导通路TLR4、NF-κB、MyD88关键蛋白的阳性表达。结论清解化攻方改善重症急性胰腺炎大鼠胰腺损伤的作用机制之一,可能与通过下调TLR4/NF-κB/MyD88通路关键蛋白表达相关。

清解化攻方调节重症急性胰腺炎模型大鼠肠道菌群及对肠黏膜屏障的影响

目的研究清解化攻方调节重症急性胰腺炎(SAP)模型大鼠肠道菌群及对肠黏膜屏障的影响。方法采用雨蛙素联合脂多糖腹腔注射法复制SAP大鼠模型,观察各组大鼠生存状态,检测大鼠血清中血清淀粉酶、白细胞介素10(IL-10)、IL-18、IL-1β水平,观察大鼠胰腺及小肠组织的病理变化,检测大鼠小肠组织中闭合蛋白(Occludin)、闭锁连接蛋白1(ZO-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平;利用16S rRNA高通量测序检测大鼠肠道菌群结构和相对丰度。结果经清解化攻方干预后,SAP模型大鼠腹部膨胀症状明显减轻,精神状态恢复较好;血清中血清淀粉酶、IL-18水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05);胰腺组织坏死区域、炎症细胞浸润减少,肠上皮细胞结构紊乱程度有所缓解,肠黏膜上皮脱落减少;小肠组织中HMGB1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。16S rRNA高通量测序结果显示,清解化攻方可升高大鼠肠道拟杆菌门、乳酸杆菌属等益生菌群的相对丰度,减少厚壁菌门等有害菌群的定植。结论清解化攻方可通过上调小肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达,下调HMGB1蛋白表达,改善肠黏膜屏障损伤,并可调节不同菌群的相对丰度从而达到保护肠道的作用。

中药多途径治疗急性胰腺炎并发腹间隔室综合征疗效评价:一项荟萃分析

目的系统评价中药多途径治疗急性胰腺炎并发腹间隔室综合征疗效。方法检索中国知网、万方、维普、Sinomed、PubMed、Embase、CochraneLibrary自建库至2020年12月1日收录的中医药治疗急性胰腺炎并发腹间隔室综合征的临床试验,RevMan5.3软件进行荟萃分析。结果共纳入17项研究,共1033例病人;荟萃分析显示,与西药基础治疗比较,中西药联用可显著降低腹内压[标准化均数差(SMD)95%CI:−0.63(−0.83,0.43)];与西药基础治疗比较,联用中药组可显著降低急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分[SMD 95%CI:−0.65(−0.87,0.43)];与西药基础治疗比较,联用中药组可有效缩短排便恢复时间[SMD 95%CI:−0.68(−1.14,0.22)];此外,小样本的研究表明中西医结合相较于单纯西药治疗可降低病人死亡情况[比值比(OR)95%CI:1.04(−1.91,−0.16)]。结论中药治疗急性胰腺炎并发腹间隔室综合征可降低腹内压、减少临床APACHEⅡ评分、缩短病人排便恢复时间。

尿液羧肽酶B激活肽作为急性重症胰腺炎早期诊断的潜在标志物:一项具有试验序贯分析的Meta分析

目的探讨尿液羧肽酶B激活肽(carboxypeptidase B activating peptide, CAPAP)作为急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)早期标志物的诊断价值。方法检索PubMed、Embase、Web of Science、中国知网、万方以及维普数据库,时间为1995年1月至2021年3月。RevMan5.3制作QUADAS-2量表评估文献质量,Stata 16.0软件荟萃分析及绘制综合受试者工作特征(summary receiver operating characteristic,SROC)曲线,TSA 0.9.5.10 Beta软件试验序贯分析。结果纳入9项研究,研究无阈值效应,CAPAP诊断SAP的灵敏度、特异度、阳性似然比(postive likelihood ratio, PLR)、阴性似然比(negative likelihood ratio, NLR)、诊断比值比(diagnostic oddsratio, DOR)分别为0.84、0.92、10、0.17、59;SROC曲线下面积为0.94;亚组分析提示,发表年份、研究区域和检测方法不是异质性来源;发表偏倚及敏感性分析提示文献存在发表偏倚;试验序贯分析提示需纳入更大的样本量验证CAPAP对SAP的诊断效能。结论尿液CAPAP可以作为SAP诊断困难时的辅助指标,仍需多中心、大样本、前瞻性的研究予以验证。

基于网络药理学及分子对接技术探讨清解化攻方治疗重症急性胰腺炎的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接技术探讨清解化攻方治疗重症急性胰腺炎(SAP)的作用机制。方法应用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索清解化攻方的活性成分和作用靶点,通过Cytoscape构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图,借助DAVID数据库和R软件对药物疾病交集基因进行GO和KEGG富集分析,利用Autodock Vina软件进行分子对接。结果共筛选出清解化攻方的202个药物活性成分和225个潜在靶点,其中210个靶点与SAP相关。靶点通路富集分析结果显示,清解化攻方可能作用于炎性因子、细胞凋亡等途径发挥作用。分子对接结果显示,清解化攻方的主要活性成分与关键靶点具有良好的结合活性。结论清解化攻方可能通过P53信号通路、PI3K-AKT信号通路等多途径发挥抗炎、调控细胞凋亡、改善能量代谢等作用。

基于网络药理学和分子对接分析大黄治疗急性胰腺炎的分子作用机制

目的运用网络药理学和分子对接分析大黄治疗急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的分子作用机制。方法运用TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction数据库筛选大黄的活性成分及靶点,GeneCards、OMIM数据库筛选AP的靶点。然后利用Cytoscape软件构建大黄“活性成分-药物靶点”网络、大黄治疗AP的“活性成分-疾病靶点”网络,在STRING数据库构建PPI网络,Metascape数据库和R语言进行GO和KEGG富集分析。最后通过分子对接验证前期所得的核心活性成分与核心靶点结合的可能性。结果查询得到大黄活性成分192个,AP靶点1882个。大黄治疗AP主要且核心的前3个活性成分为beta-sitosterol、aloe-emodin、EUPATIN,大黄治疗AP核心靶点为HSP90AA1。GO富集分析集中于对有毒物质反应等,KEGG富集分析则显著富集在与AP密切相关的p53信号通路。分子对接显示结合性好、构象稳定。结论大黄可通过p53信号通路影响与AP相关的基因、蛋白表达,从而抑制细胞凋亡,缓解AP的炎症损伤。

基于核因子-κB信号通路探讨中医治疗急性胰腺炎现状

核因子-κB(NF-κB)信号通路作为介导炎症反应的枢纽,与急性胰腺炎的炎症反应系统密切相关。临床上,中医辨治急性胰腺炎的疗效明显。本文通过分析NF-κB信号通路与急性胰腺炎关系,系统梳理近年中药干预NF-κB信号通路治疗急性胰腺炎的研究,明确中医治疗急性胰腺炎的优势,拓展中医治疗急性胰腺炎的药用范围,为临床用药及相关研究提供参考。

中药复方辅助治疗腰椎管狭窄症围手术期临床疗效的系统评价及试验序贯分析

目的系统评价中药复方辅助治疗腰椎管狭窄症(LSS)围手术期临床疗效,并以试验序贯分析(TSA)解决传统Meta分析在反复更新中出现随机误差的问题。方法计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、The Cochrane library、PubMed、EMBASE等7个国内外数据库有关中药复方辅助治疗LSS症围手术期临床疗效的随机对照试验(RCT)文献,并以手工检索相关论文。检索时限均为建库至2021年1月20日。由两位评价员独立筛选文献、提取资料、评价纳入研究的方法学质量,再分别选用Stata/SE 12.0、TSA0.9.5.10 Beta软件对结局指标进行Meta分析和试验序贯分析(TSA)。结果共纳入24个RCT,共包含1645例,研究组与对照组分别为821例、824例患者。Meta分析结果表明:与对照组相比,研究组在提高治疗后总有效率(RR=1.13,95%CI:1.09~1.18,P<0.05),改善JOA评分(SMD=4.62,95%CI:2.82~6.43,P<0.05),降低VAS评分(SMD=-0.83,95%CI:-1.13~-0.54,P<0.05)、ODI评分(MD=-5.65,95%CI:-9.94~-1.35,P<0.05)方面均优于对照组。TSA结果显示:治疗后JOA评分、VAS评分累计的Z值均穿越了RIS;治疗后总有效率、ODI评分累计Z值均穿越了传统界值和TSA界值,但未穿越RIS。结论中药复方辅助治疗LSS围手术期患者获得了较好的临床疗效,其能够有效地提高治疗后总有效率,改善JOA评分,降低VAS评分、ODI评分,从而促进患者术后快速康复。鉴于纳入文献的质量有限,上述结论尚需更多高质量、多中心的RCT为临床提供证据支持。

不同黏度骨水泥经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折的有效性与安全性Meta分析

目的系统评价不同黏度骨水泥经皮椎体后凸成形术(PKP)治疗骨质疏松性椎体压缩骨折(OVCF)的有效性与安全性。方法计算机检索自建库至2021年4月18日收录在中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、PubMed、中国生物医学文献数据库(CBM)、The Cochrane library等数据库的文献,搜索有关PKP中采用高低黏度骨水泥治疗OVCF的随机对照试验(RCT)文献,并以手工检索相关论文。由2位评价员独立筛选文献、提取资料及评价纳入研究的方法学质量后,采用Review 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入12篇RCT文献,共1089例患者,其中高黏度组544例,低黏度组545例。Meta分析结果表明:与对照组相比,研究组在降低术后视觉模拟量表(VAS)评分(MD=-0.43,95%CI:-0.67~-0.19,P<0.01)、Oswestry功能障碍指数(ODI)(MD=-3.89,95%CI:-6.32~-1.47,P<0.01)、Cobb角(MD=-1.78,95%CI:-2.08~-1.48,P<0.00001)、减少骨水泥注入量(MD=-0.18,95%CI:-0.34~-0.02,P<0.05)、缩短手术时间(MD=-6.91,95%CI:-12.84~-0.99,P<0.05)和恢复伤椎高度(MD=3.01,95%CI:1.15~4.86,P<0.01)方面均明显优于对照组;与对照组相比,研究组在降低术后骨水泥渗漏率(RR=0.40,95%CI:0.32~0.51,P<0.01)和其他并发症发生率(RR=0.55,95%CI:0.39~0.78,P<0.01)方面均明显低于对照组。结论与低黏度骨水泥相比,PKP中选用高黏度骨水泥具备更好的临床疗效及安全性。然而,上述结论仍需更多高质量、多中心的RCT进一步证实。

清解化攻方对重症急性胰腺炎大鼠结肠巨噬细胞极化和糖酵解关键激酶的影响

目的从肠道巨噬细胞糖代谢角度探讨清解化攻方对重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)结肠损伤的修复作用及可能机制。方法雨蛙素联合脂多糖胰腺被膜下注射法复制SAP大鼠模型,HE染色法观察空白组、模型组、中药组大鼠胰腺组织病理改变;酶联免疫吸附法检测血清淀粉酶、IL-6、IL-10、TNF-α表达水平;免疫荧光法检测SAP结肠黏膜固有层巨噬细胞的M1/M2极化亚型;Western Blot检测结肠糖酵解关键激酶HK2、PKM2、PDK1、LDHA蛋白表达水平;PCR检测结肠PKM2、HK2、PDK1、LDHA mRNA表达水平。结果胰腺病理及ELISA实验表明清解化攻方可减轻SAP大鼠胰腺水肿、减少炎性因子释放并抑制胰腺、结肠炎症反应。免疫荧光结果表明,与空白组比较,模型组大鼠黏膜固有层中M1型巨噬细胞比例显著上调,M2巨噬细胞比例无明显变化,与模型组比较,复方中药可有效降低M1型巨噬细胞比例,并增加M2型巨噬细胞比例(P<0.05)。Westen Blot结果表明,与空白组比较,模型组HK2、PKM2、PDK1、LDHA蛋白表达水平显著升高,与模型组比较,给药组上述蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);PCR结果表明,与空白组比较,模型组HK2、PKM2、PDK1、LDHA的mRNA表达水平显著升高,与模型组比较,给药组大鼠结肠组织中HK2、PKM2、PDK1的mRNA表达水平均显著下降(P<0.05)。结论清解化攻方能有效抑制重症急性胰腺炎大鼠结肠炎症反应,可能机制为调节PKM2等糖酵解关键激酶表达并诱导结肠巨噬细胞M2极化发挥抗炎效用。

清解化攻方对急性胰腺炎小鼠腺泡细胞焦亡和肠屏障的影响

目的探讨清解化攻方调节环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHipk3)减轻急性胰腺炎(AP)腺泡细胞焦亡并保护肠屏障的机制。方法将60只小鼠随机分为空白组、模型组、乌司他丁组、清解化攻方组、基因沉默组、基因沉默联合中药组,每组10只;基因沉默和基因沉默联合中药组尾静脉注射circHipk3基因沉默腺相关病毒;模型组、各干预组腹腔注射50μg/kg雨蛙素,每小时1次,连续7次;清解化攻方、基因沉默联合中药组中药2 g/kg灌胃,空白组、模型组予等量蒸馏水,乌司他丁组予腹腔注射乌司他丁5 U/kg,每天2次,连续3天。观察小鼠胰腺、回肠病理情况;检测血清内毒素(Endotoxin)、TNF-α、IL-18、IL-1β水平,胰腺消皮素D(GSDMD)表达,回肠闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)表达;Western Blot法检测胰腺半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、GSDMD、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、IL-1β及回肠ZO-1、Occludin、封闭蛋白1(CLDN1)表达;聚合酶链反应检测胰腺circHipk3、微小RNA miR-193a-5p、caspase-1、GSDMD mRNA水平及肠黏膜通透性。结果与空白组比较,模型组胰腺湿/干比重和腹水增多,胰腺和回肠组织评分增加,血清Endotoxin、TNF-α、IL-18、IL-1β水平升高,GSDMD阳性表达增强,GSDMD、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达升高,ZO-1、Occludin、CLDN1表达降低,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA表达升高,miR-193a-5p降低,ZO-1、Occludin阳性表达减少,肠道通透性升高(P<0.05)。与模型组比较,各干预组胰腺湿/干比重降低,乌司他丁组、清解化攻方组、基因沉默联合中药组腹水减少,胰腺和回肠组织评分降低,Endotoxin、TNF-α、IL-18、IL-1β水平下降,GSDMD阳性表达减弱,GSDMD、caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,回肠蛋白表达升高,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA表达降低,miR-193a-5p升高,ZO-1、Occludin阳性表达增多,肠道通透性升高(P<0.05)。与基因沉默组比较,基因沉默联合中药组胰腺湿/干比重、腹水、胰腺和回肠组织评分降低,Endotoxin、TNF-α、IL-18降低,GSDMD阳性表达减弱,GSDMD、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达降低,ZO-1、Occludin、CLDN1蛋白表达增加,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA降低,miR-193a-5p升高,ZO-1、Occludin阳性表达增多,肠道通透性降低(P<0.05)。结论清解化攻方可下调circHipk3、caspase-1基因,上调miR-193a-5p基因表达水平,降低胰腺焦亡蛋白表达,减轻胰腺损伤保护肠屏障。

“通因通用”法论治原发性遗尿经验探析

丁世霖副主任医师临证辨治原发性遗尿,着眼于发病从5岁小儿开始的特点,明晰该年龄阶段发病的病因病机,重视病程长久,动态观察随病情发展给病因病机带来的变化,在补脾肾安心神治其本的同时,用通因通因之法,活血化瘀以治其标,临床效果显著,并举典型案例以验证。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨八珍荔核抗纤方对HSC活化增殖、迁移的影响

目的 观察八珍荔核抗纤方对HSC-T6活化增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照组和八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组,空白对照组用生理盐水灌胃,含药血清低、中、高组以纯水溶解八珍荔核抗纤方颗粒进行灌胃。换算成SD大鼠的低、中、高剂量分别为7.96g·kg^(-1)、15.93g·kg^(-1)、31.86g·kg^(-1);连续灌胃7d,最后取血制备空白血清和含药血清。通过噻唑蓝(MTT)法测定TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化的最佳浓度及不同浓度,八珍荔核抗纤方含药血清对TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化增殖影响。细胞划痕愈合法测定八珍荔核抗纤方含药血清对HSC-T6细胞迁移的影响;免疫荧光法测定HSC活化相关指标Col I、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路核心因子β-catenin表达的影响,蛋白质印迹法(western blot)测定八珍荔核抗纤方对HSC活化相关蛋白Col I、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、p-GSK3β、Cyclin D1表达的影响;qPCR测定八珍荔核抗纤方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt1、β-catenin、Cyclin D1表达的影响。结果 MTT实验结果显示,rhTGF-β1刺激HSC-T6活化的最佳浓度为10ng/ml;与模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高含药血清均能抑制rhTGF-β1刺激的HSC-T6细胞增殖活化(P<0.05),其抑制强度具有剂量依赖性(P<0.05)。划痕实验结果显示,与模型组相比,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组的细胞迁移能力减弱(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05)。Western Blotting实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col I、α-SMA及β-catenin蛋白表达水平均降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col I、α-SMA及细胞核内β-catenin平均荧光强度均降低(P<0.05)。qPCR实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组β-catenin基因表达水平均降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平无明显变化(P>0.05)。结论 八珍荔核抗纤方可以抑制HSC的活化增殖、迁移,减少ECM合成进而抗肝纤维化,可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。